分光光度法測(cè)定假臭草中的化學(xué)物質(zhì)

趙春　李水清

摘要：為研究開(kāi)發(fā)利用假臭草（Eupatorium catarium），用分光光度法測(cè)定了假臭草莖、花、葉中類黃酮、單寧、草酸和亞硝酸鹽的含量。結(jié)果表明，假臭草葉中類黃酮、草酸含量最高；花中單寧、亞硝酸鹽含量最高。該結(jié)果將為假臭草的綜合開(kāi)發(fā)利用提供參考。

關(guān)鍵詞：假臭草（Eupatorium catarium）；類黃酮；單寧；草酸；亞硝酸鹽；分光光度法

中圖分類號(hào)：Q815 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）06-1418-02

Determination of Chemicals in Eupatorium catarium with Spectrophotometry

ZHAO Chun，LI Shui-qing

（College of Chemistry and Environmental Engineering， Yangtze University， Jingzhou 434023， Hubei， China）

Abstract： In order to utilize Eupatorium catarium， the contents of total flavonoids， tannin， oxalic acid and nitrite in stems， flowers and leaves of E. catarium were determined with spectrophotometry. The results showed that the contents of total flavonoids and oxalic acid in leaves were highest. The contents of tannin and nitrite in flowers were highest. The results will provide a reference for utilizing E. catarium.

Key words： Eupatorium catarium； total flavonoids； tannin； oxalic acid； nitrite； spectrophotometry

假臭草（Eupatorium catarium）是菊科澤蘭屬一年生草本植物。假臭草最早于20世紀(jì)80年代在香港發(fā)現(xiàn)，但一直被誤認(rèn)為是熊耳草（Ageratum houstonianum），直至1995年才被鑒定。目前已經(jīng)占領(lǐng)了廣東、福建、澳門、香港、臺(tái)灣、海南等沿海地區(qū)大部分荒坡、荒地、灘涂、林地、果園。假臭草對(duì)土壤肥力的吸收力強(qiáng)，能極大消耗土壤養(yǎng)分，對(duì)土壤可耕性的破壞極為嚴(yán)重，與林木爭(zhēng)水、爭(zhēng)肥，嚴(yán)重影響林木生長(zhǎng)[1，2]。

假臭草含有許多具有生物活性的次生代謝產(chǎn)物。林成俊等[3]在假臭草中分離、鑒定出一種全順-環(huán)己烷-1，2，4-三醇的物質(zhì)，生物測(cè)定證實(shí)對(duì)蘿卜和小白菜種子萌發(fā)具有抑制作用；假臭草的揮發(fā)油對(duì)昆蟲和真菌產(chǎn)生忌避或抑制作用[4]；鄧世明等[5]研究表明高濃度的假臭草超聲提取液能顯著抑制小顆粒種子萌發(fā)，抑制植物幼根生長(zhǎng)；假臭草的甲醇提取物、乙醇提取物分別對(duì)螺旋粉虱成蟲、荔枝粗脛翠尺蛾具有較強(qiáng)的殺蟲活性和拒食活性[6，7]；岑伊靜等[8]證明假臭草揮發(fā)油對(duì)柑橘木虱成蟲也有顯著的驅(qū)避作用；鄧世明等[7]從假臭草的乙酸乙酯萃取物中分離得到5種黃酮化合物。本試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定假臭草中類黃酮、單寧、草酸和亞硝酸鹽的含量，為假臭草的綜合開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

假臭草采自湖北省荊州市護(hù)城河畔，洗去泥土，風(fēng)干，在80 ℃烘箱中烘至恒重，粉碎，過(guò)80目篩，密封保存?zhèn)溆谩?/p>

蘆丁、無(wú)水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、單寧酸、鎢酸鈉、磷鉬酸、磷酸、碳酸鈉、三氯化鐵、草酸鈉、醋酸鉛、丙酮、草酸、重鉻酸鉀、次甲基藍(lán)、硫酸、對(duì)氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽、硫酸鋅均為市售分析純?cè)噭?/p>

1.2 儀器

植物粉碎機(jī)，上海精密科學(xué)儀器有限公司；EB-330H分析天平，上海精科電子天平廠；722型分光光度計(jì)，上海精密科學(xué)儀器有限公司；數(shù)顯恒溫水浴鍋，電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，常州國(guó)華電器有限公司。

1.3 方法

類黃酮測(cè)定采用乙醇浸提法[9]，單寧測(cè)定采用比色法[10]，草酸測(cè)定采用次甲基藍(lán)-重鉻酸鉀法[11]，亞硝酸鹽測(cè)定采用分光光度法[12]，每處理平行測(cè)定4次。

準(zhǔn)確稱取一定量樣品2份，一份加入標(biāo)準(zhǔn)品，另一份不加，按相同方法測(cè)定類黃酮、單寧、草酸和亞硝酸鹽含量，計(jì)算回收率，平行測(cè)定4次。

2 結(jié)果與分析

2.1 假臭草中類黃酮含量的測(cè)定結(jié)果

以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫座標(biāo)，吸光度為縱座標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到吸光度（y）與濃度（x）的線性方程為：y=10.56 x-0.000 6，R=0.997 1。結(jié)果表明，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與吸光度之間呈良好線性關(guān)系。

假臭草中類黃酮的含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。從表1可知，葉中類黃酮含量最高，花中類黃酮含量次之，莖中類黃酮含量最低，三者含量差異顯著。

2.2 假臭草中單寧含量的測(cè)定結(jié)果

假臭草各部分單寧含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2?？梢?jiàn)，假臭草花、葉中單寧含量差異不大，而莖中單寧含量最低，且與花、葉中單寧含量差異顯著。

2.3 假臭草中草酸含量的測(cè)定結(jié)果

以草酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫座標(biāo)，吸光度為縱座標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得吸光度（y）與草酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（x）的線性方程為：y=0.101 3 x+0.037 3，R2=0.986 6，線性關(guān)系良好。

假臭草中草酸的含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果說(shuō)明，莖、花、葉中草酸含量各不相同，葉中草酸含量最高，花中草酸含量最低。

2.4 假臭草中亞硝酸鹽含量的測(cè)定結(jié)果

以吸光度為縱座標(biāo)，亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫座標(biāo)，得吸光度（y）與亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（x）的線性方程為：y=0.687 1 x+0.000 2，R=0.999 7。

假臭草莖、花、葉中亞硝酸鹽含量見(jiàn)表4。由表4可知，假臭草花中亞硝酸鹽含量最高，莖中亞硝酸鹽含量最低。

2.5 回收率測(cè)定結(jié)果

類黃酮、單寧、草酸和亞硝酸鹽回收率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5，由表5可知，各類化合物的回收率均達(dá)到96%以上，表明測(cè)定方法可靠。

3 討論

類黃酮、單寧、草酸和亞硝酸鹽是植物次生代謝產(chǎn)物，植物中的類黃酮和單寧具有較強(qiáng)的生理活性，在醫(yī)藥和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中有著廣泛的用途。在農(nóng)業(yè)有害生物的防治中，一般認(rèn)為黃酮類化合物對(duì)昆蟲具有防御作用，其防御機(jī)制可能是通過(guò)影響它們的行為和代謝，使之發(fā)生忌避和拒食；或者是破壞昆蟲正常的代謝過(guò)程，引起中毒甚至死亡。單寧一般被認(rèn)為是有效的化學(xué)防御物質(zhì)，可干擾昆蟲對(duì)食物的利用，尤其是干擾腸道的消化。單寧分子能與蛋白質(zhì)分子結(jié)合形成穩(wěn)定的交叉鏈，能抑制酶的活性，使昆蟲不能利用蛋白質(zhì)，單寧還能與淀粉形成絡(luò)合物而影響昆蟲對(duì)淀粉的消化。植物中草酸和亞硝酸鹽含量也會(huì)影響昆蟲的取食行為。本試驗(yàn)測(cè)定了假臭草莖、花、葉中類黃酮、單寧、草酸和亞硝酸鹽的含量，可為假臭草的綜合開(kāi)發(fā)利用提供參考。

參考文獻(xiàn)：

[1] HUANG Q Q，WU J M，BAI Y Y， et. al. Identifying the most noxious invasive plants in China：role of geographical origin， life form and means of introduction[J]. Biodiversity Conservation，2009，18（2）：305-316.

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[7] 鄧世明，楊先會(huì)，王 寧，等.外來(lái)入侵植物假臭草的黃酮類成分研究[J].西北植物學(xué)報(bào)，2009，29（12）：2548-2550.

[8] 岑伊靜，葉峻銘，徐長(zhǎng)寶，等.柑橘木虱對(duì)幾種非嗜食植物揮發(fā)油的趨性反應(yīng)測(cè)定[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，26（3）：41-44.

[9] 李水清，馬 鵬，舒俊峰.馬齒莧中類黃酮及單寧含量的測(cè)定[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（35）：17700-17701.

[10] 孫達(dá)旺.植物單寧化學(xué)[M].北京：中國(guó)林業(yè)出版社，1978.

[11] 彭新湘.蕎麥與大豆葉片中草酸含量差異及其可能的原因[J].植物生理與分子生物學(xué)學(xué)報(bào)，2004，30（2）：201-208.

[12] 趙新淮，林 燕，張海霞.蔬菜中亞硝酸鹽的光度測(cè)定[J].理化檢驗(yàn)（化學(xué)分冊(cè)），2006，42（2）：128-129.

假臭草中草酸的含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果說(shuō)明，莖、花、葉中草酸含量各不相同，葉中草酸含量最高，花中草酸含量最低。

2.4 假臭草中亞硝酸鹽含量的測(cè)定結(jié)果

以吸光度為縱座標(biāo)，亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫座標(biāo)，得吸光度（y）與亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（x）的線性方程為：y=0.687 1 x+0.000 2，R=0.999 7。

假臭草莖、花、葉中亞硝酸鹽含量見(jiàn)表4。由表4可知，假臭草花中亞硝酸鹽含量最高，莖中亞硝酸鹽含量最低。

2.5 回收率測(cè)定結(jié)果

類黃酮、單寧、草酸和亞硝酸鹽回收率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5，由表5可知，各類化合物的回收率均達(dá)到96%以上，表明測(cè)定方法可靠。

3 討論

類黃酮、單寧、草酸和亞硝酸鹽是植物次生代謝產(chǎn)物，植物中的類黃酮和單寧具有較強(qiáng)的生理活性，在醫(yī)藥和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中有著廣泛的用途。在農(nóng)業(yè)有害生物的防治中，一般認(rèn)為黃酮類化合物對(duì)昆蟲具有防御作用，其防御機(jī)制可能是通過(guò)影響它們的行為和代謝，使之發(fā)生忌避和拒食；或者是破壞昆蟲正常的代謝過(guò)程，引起中毒甚至死亡。單寧一般被認(rèn)為是有效的化學(xué)防御物質(zhì)，可干擾昆蟲對(duì)食物的利用，尤其是干擾腸道的消化。單寧分子能與蛋白質(zhì)分子結(jié)合形成穩(wěn)定的交叉鏈，能抑制酶的活性，使昆蟲不能利用蛋白質(zhì)，單寧還能與淀粉形成絡(luò)合物而影響昆蟲對(duì)淀粉的消化。植物中草酸和亞硝酸鹽含量也會(huì)影響昆蟲的取食行為。本試驗(yàn)測(cè)定了假臭草莖、花、葉中類黃酮、單寧、草酸和亞硝酸鹽的含量，可為假臭草的綜合開(kāi)發(fā)利用提供參考。

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假臭草中草酸的含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果說(shuō)明，莖、花、葉中草酸含量各不相同，葉中草酸含量最高，花中草酸含量最低。

2.4 假臭草中亞硝酸鹽含量的測(cè)定結(jié)果

以吸光度為縱座標(biāo)，亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫座標(biāo)，得吸光度（y）與亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（x）的線性方程為：y=0.687 1 x+0.000 2，R=0.999 7。

假臭草莖、花、葉中亞硝酸鹽含量見(jiàn)表4。由表4可知，假臭草花中亞硝酸鹽含量最高，莖中亞硝酸鹽含量最低。

2.5 回收率測(cè)定結(jié)果

類黃酮、單寧、草酸和亞硝酸鹽回收率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5，由表5可知，各類化合物的回收率均達(dá)到96%以上，表明測(cè)定方法可靠。

3 討論

類黃酮、單寧、草酸和亞硝酸鹽是植物次生代謝產(chǎn)物，植物中的類黃酮和單寧具有較強(qiáng)的生理活性，在醫(yī)藥和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中有著廣泛的用途。在農(nóng)業(yè)有害生物的防治中，一般認(rèn)為黃酮類化合物對(duì)昆蟲具有防御作用，其防御機(jī)制可能是通過(guò)影響它們的行為和代謝，使之發(fā)生忌避和拒食；或者是破壞昆蟲正常的代謝過(guò)程，引起中毒甚至死亡。單寧一般被認(rèn)為是有效的化學(xué)防御物質(zhì)，可干擾昆蟲對(duì)食物的利用，尤其是干擾腸道的消化。單寧分子能與蛋白質(zhì)分子結(jié)合形成穩(wěn)定的交叉鏈，能抑制酶的活性，使昆蟲不能利用蛋白質(zhì)，單寧還能與淀粉形成絡(luò)合物而影響昆蟲對(duì)淀粉的消化。植物中草酸和亞硝酸鹽含量也會(huì)影響昆蟲的取食行為。本試驗(yàn)測(cè)定了假臭草莖、花、葉中類黃酮、單寧、草酸和亞硝酸鹽的含量，可為假臭草的綜合開(kāi)發(fā)利用提供參考。

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[6] 成家寧，陳炳旭，曾鑫年，等.14種植物乙醇提取物對(duì)荔枝粗脛翠尺蛾成蟲產(chǎn)卵和幼蟲取食的影響[J].果樹(shù)學(xué)報(bào)，2011，28（2）：290-295.

[7] 鄧世明，楊先會(huì)，王 寧，等.外來(lái)入侵植物假臭草的黃酮類成分研究[J].西北植物學(xué)報(bào)，2009，29（12）：2548-2550.

[8] 岑伊靜，葉峻銘，徐長(zhǎng)寶，等.柑橘木虱對(duì)幾種非嗜食植物揮發(fā)油的趨性反應(yīng)測(cè)定[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，26（3）：41-44.

[9] 李水清，馬 鵬，舒俊峰.馬齒莧中類黃酮及單寧含量的測(cè)定[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（35）：17700-17701.

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[12] 趙新淮，林 燕，張海霞.蔬菜中亞硝酸鹽的光度測(cè)定[J].理化檢驗(yàn)（化學(xué)分冊(cè)），2006，42（2）：128-129.