弱精子癥患者DFI的預(yù)測、精液常規(guī)處理方法對精子DFI的影響研究

曹芳 陳莉(通訊作者) 王宇峰 于春梅 戴秀亮 夏西陽 高亭亭

（常州市婦幼保健院生殖中心 江蘇 常州 213003）

近年來，伴隨社會經(jīng)濟的不斷發(fā)展及人們生活水平的改變，不孕癥發(fā)病率呈現(xiàn)逐年增加趨勢。在引起不育的各種因素當中，男因占比達50%。而男性不育多由精子生成、成熟出現(xiàn)障礙所致，多表現(xiàn)為精子質(zhì)量下降，或無精子，其中，弱精子癥、少精子癥等在不育男性中的占比達90%[1]。精子DNA碎片率（DFI）是一種用于評估精子DNA完整性的重要指標。而產(chǎn)生精子DNA碎片的機制可能為精子生精時出現(xiàn)細胞凋亡，或者是精子生成中出現(xiàn)染色體組裝異常等。精子DNA完整性對于遺傳信息向下一代的準確傳遞至關(guān)重要[2]。本次研究針對本院收治的80例男性弱精子癥患者，探討DFI的預(yù)測、精液常規(guī)處理方法對精子DFI的影響，現(xiàn)報道如下。

1.對象與方法

1.1 研究對象

于2015年11月—2017年12月期間，選取本院收治的80例男性弱精子癥患者，年齡區(qū)間22～48歲，平均（33.5±5.7）歲，不育年限（4.5±2.8）年。男性第二性征、陰囊、陰莖、輸精管等均正常，經(jīng)外周血染色得知，均為正常核型；排除卵巢早衰者、多囊卵巢綜合征等可能影響卵子質(zhì)量的女方不育因素。所選取患者對本次研究均知情，且簽署有知情同意書；本研究已獲得本院倫理委員會批準。依據(jù)精子DFI的參考值進行分組，A組DFI≤15%，共計17例，B組為15%＜DFI＜30%，共37例，C組DFI≥30%，即26例。

1.2 實驗方法

1.2.1 采集精液 全部均禁欲7d，手淫取精，把精液置入塑料取精杯中，把標本置入到室溫中，靜置30min，當精液全部液化之后，劃分精液，實施DFI檢測、卵泡漿內(nèi)單精子注射及精子熒光原位雜交檢測。

1.2.2 檢測精液常規(guī)參數(shù) 依據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）所給出試驗方法進行精液常規(guī)參數(shù)檢測：待精子處于常溫下，全部液化，對精子情況進行觀察，對精子體積、PH及粘稠度進行檢測。評價粘稠度方法：將液化的精子吸入至一次性塑料吸液管中（1.5mm），于重力作用下，使精液自然向下滴，對其拉絲的長度進行觀察。若為正常，則精液會形成間斷的小滴，自吸液管口向下滴。對pH值進行檢測時，則把一滴已經(jīng)液化的精子，涂在pH試紙上，待浸漬區(qū)顏色已均勻后，則對比于標準條帶的顏色，將pH值讀出。

1.2.3 測定方法 在首次使用時，吸取C2液，并加入到C1液中，形成C液，對C液輕顛倒，充分混合，避光保存。取1.2mL的C液與400μL的B液，均加入到流式細胞儀的樣品管當中，混成平衡緩沖液，上樣，且置于流失細胞儀上，持續(xù)運行15min；依據(jù)CASA標準，對精液濃度進行分析，取1ml于小試管當中，用A液體稀釋，濃度維持在1～2×106個/mL；取B液200μL，加入已經(jīng)稀釋好的精子混合液當中，計時30s，然后加入到600μLLC液中。完成加樣后，置于流失細胞儀上，將樣品流予以啟動，進行監(jiān)測，測定后，用濃度為10%的漂白劑對樣品線5min進行沖洗。

1.3 觀察指標

觀察與對比各組精液常規(guī)參數(shù)、DFI與精液常規(guī)參數(shù)之間的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學方法

SPSS23.0處理數(shù)據(jù)，百分比表示計數(shù)資料，χ2檢驗，計量資料由（±s）表示，t檢驗，若經(jīng)比較有顯著差異，由P＜0.05表示。

2.結(jié)果

2.1 組間精液常規(guī)參數(shù)對比

A組向前運動精子百分率（PR）為（16.79±8.27）%，B組（13.65±7.22）%，C組（9.34±8.93）%；精子總活力（PR+NP）分別為（18.73±8.79）%、（15.87±7.50）%、（10.58±9.04）%。PR+NP及PR的組間比較：C組相比于B組、A組，差異顯著（P＜0.05）；A組與B組比較，無明顯差異（P＞0.05）。

2.2 DFI與精液常規(guī)參數(shù)的相關(guān)性比較

精子DFI與PR+NR、PR呈現(xiàn)顯著負相關(guān)（P＜0.05），而與精子非整倍體率之間呈正相關(guān)（P＜0.05）。CSW、DGC、CSW+DFC處理后，PR+NP、PR均有明顯升高（P＜0.05），濃度都有明顯降低（P＜0.05）。CSW+DFC、CSW處理后，DFI都有顯著降低（P＜0.05），但DGC處理后DFI有顯著升高（P＜0.05）。

3.討論

精液常規(guī)參數(shù)包含精子活力、形態(tài)、pH及濃度等，其無論是在評估其精子質(zhì)量，還是在預(yù)測輔助生殖結(jié)局上，均有一定程度的局限性[3]。DFI實為近年新提出的一種能夠?qū)覦NA完整性進行評價的重要指標，已經(jīng)研究對其與精液常規(guī)參數(shù)之間的關(guān)系進行了研究，目的在于評估DFI對精子質(zhì)量所具有的實際預(yù)測能力。有學者指出[5]，向前運動精子活動率與精子DFI率之間有著緊密的相關(guān)性。但也有研究指出[5]，精子DFI與精液常規(guī)參數(shù)之間僅存在比較弱的相關(guān)性。由本次研究可知，DFI≥30%組的前向運動精子活動率較DFI≤15%組，明顯低于后者。經(jīng)相關(guān)性分析可知，DFI與前向運動精子百分率、精子總活力均存在顯著相關(guān)性。由此可知，此些因素對精子DFI不會造成影響。上述結(jié)果得知，DFI除了會對精子活動力造成影響外，還會對精子運動方式造成影響，DFI能夠被當作評估精子質(zhì)量的獨立指標，與精液常規(guī)檢測相結(jié)合，能夠比較全面的對精子質(zhì)量進行評價。