HPLC法檢測藥品中有關(guān)物質(zhì)殘留的研究

作者簡介：張靜（1981.8- ）女，滿族，河南商丘人，上?，F(xiàn)代哈森（商丘）藥業(yè)有限公司化驗員，研究方向：液相。摘要： 有關(guān)物質(zhì)檢測是對藥品中殘留合成原料、中間體、副產(chǎn)物及可能的降解產(chǎn)物的檢測，是對藥品質(zhì)量控制的一項重要指標，目的是根據(jù)安全性的要求檢測藥品中所含上述雜質(zhì)是否符合標準。下面就工作中遇到的一些問題以及我們的一些解決辦法與大家交流一下。

關(guān)鍵詞：HPLC；藥品有關(guān)物；殘留檢測

【中圖分類號】R453【文獻標識碼】 A【文章編號】1002-3763（2014）09-0109-021 關(guān)于藥品中有關(guān)物質(zhì)殘留檢查研究的一點建議：

1.1 有關(guān)物質(zhì)檢查常用的方法是主成分自身對照法和已知雜質(zhì)對照品比較法。對于主成分自身對照法，采用此方法時確定的檢測波長是否合理直接影響到方法的可行性，因此，檢測波長的選擇是方法學研究的重要內(nèi)容。

1.2 我們認為一些藥物采用HPLC主成分自身對照法檢查有關(guān)物質(zhì)時直接以主成分的最大吸收波長為檢測波長不合理。

2 現(xiàn)行標準中遇到的問題

日常工作中我們常遇到的問題主要有：雜質(zhì)峰和輔料峰不好界定；理論板數(shù)要求過高；關(guān)于溶劑峰；其它干擾；藥品標準中規(guī)定的保留時間不夠。

2.1 理論板數(shù)問題：例如：對乙酰氨基酚有關(guān)物質(zhì)檢查是用對氨基酚作雜質(zhì)對照品，對氨基酚保留時間為6分鐘，對乙酰氨基酚的保留時間為15分鐘，兩者分離度在10以上，但由于對乙酰氨基酚的進樣量過大，所以理論板數(shù)達不到要求的5000，更換多支柱子仍達不到，但樣品濃度在含量測定下時理論板數(shù)達6000以上。我們認為本法只測定對氨基酚，只要兩者的分離度達到要求就可以，而樣品峰的理論板數(shù)與測定無關(guān)。

2.2 關(guān)于溶劑峰：在有關(guān)物質(zhì)檢查時往往會出現(xiàn)溶劑峰，特別是低波長測定時溶劑峰更大，這樣會使雜質(zhì)峰的面積增大，造成有關(guān)物質(zhì)的量不準確。我們的經(jīng)驗是：注入一針溶劑，如果保留時間和峰形與樣品溶液的峰形一致，則表示為溶劑峰，峰面積不能計入雜質(zhì)峰。

2.3 其他干擾峰

2.3.1 在對某企業(yè)生產(chǎn)的吡拉西坦氯化鈉注射液有關(guān)物質(zhì)檢驗時，液相圖譜在2分多鐘時出現(xiàn)一個較大的吸收峰，如果按有關(guān)物質(zhì)算遠遠超過了限度。但氯化鈉本身為無機鹽應該沒有吸收，可是雜質(zhì)峰又不可能那么大。為此我們用氯化鈉注射液按同樣濃度進樣，結(jié)果色譜圖上出現(xiàn)了相同保留時間的吸收峰。該峰究竟是由氯化鈉產(chǎn)生的還是氯化鈉中的雜質(zhì)產(chǎn)生的還不能證實。我們對多個廠家的氯化鈉注射液進樣均有此吸收峰，所以建議在有關(guān)物質(zhì)檢查中增加氯化鈉空白實驗。

2.3.2 在用薄層色譜法檢查煙酸占替諾有關(guān)物質(zhì)時采用的為主成分自身對照法，樣品通過展開顯色后在主斑點下方有一較大的斑點，超出對照斑點很多倍，多次實驗現(xiàn)象相同，懷疑此方法存在問題，請示了上級藥品檢驗所和原標準起草單位，答復是此斑點是煙酸，是正常的。所以有些標準的不完善給我們檢驗者也帶來了很多的麻煩。

2.4 藥品標準中規(guī)定的保留時間不夠由于有的藥物與其有關(guān)物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的極性相差較大，因此在液相色譜分析中有關(guān)物質(zhì)按規(guī)定的記錄時間（為主峰保留時間的2倍），雜質(zhì)峰沒有完全出現(xiàn)，具體表現(xiàn)是當?shù)谝会樧咄旰螅M第二針的時候，峰形與第一針不同，當保留時間延長到3倍時，又出現(xiàn)一個吸收峰，如此按保留3倍多次進樣，則峰形—致，說明標準中規(guī)定的保留時間延長2倍時間是不夠的。液相色譜法檢查有關(guān)物質(zhì)時經(jīng)常遇到的問題是主峰拖尾嚴重與雜質(zhì)峰分離不開，理論板數(shù)不夠，其原因之一是柱子本身柱效低或柱子用的時間久了，柱效降低了。當遇到這些問題時我們解決的辦法首先是換柱子，如果發(fā)現(xiàn)柱子拖尾嚴重，在流動相內(nèi)加入0.02%的三乙胺作為掃尾劑，如果分離不好，則調(diào)節(jié)流動相，降低有機相的比例。如發(fā)現(xiàn)是柱子本身問題可打開柱子檢查是否有塌陷或柱頭污染情況，如果有污染可挖去一部分，填上同型號填料，沖柱即可。

3 乙酰水楊酸制劑中游離水楊酸的檢查

阿司匹林類藥物為常用解熱鎮(zhèn)痛藥，由于阿司匹林易分解為水楊酸和醋酸，而水楊酸對人體有一定的毒副作用，因此，阿司匹林及其制劑的質(zhì)量標準中均有游離水楊酸的限度檢查，標準中均采用比色法進行檢查。此方法靈敏度底，目視誤差較大。方法研究：乙酰水楊酸鋅是某藥廠生產(chǎn)的原料藥，游離水楊酸也是采用比色法，我們提出是否用HPLC法測定其含量和游離水楊酸，經(jīng)過多次試驗，得到一個較可行的HPLC法。

3.1 方法：選擇了最常用的C18柱，流動相為（6.8g磷酸二氫鉀，加0.1mol/L氫氧化鉀70ml溶解后，加水至850ml，用0.1mol/L氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH為6.3±0.1，加甲醇80ml，再加水1000m1）檢測波長290nm，進樣量20ul。取供試品相當于乙酰水楊酸鋅300mg，加流動相使成100ml，濾過，濾液作為供試品溶液；另取水楊酸對照品15mg，加流動相使成200ml，取2ml加流動相稀釋至50ml。

3.2 結(jié)果：如供試品溶液中有與對照品相同保留時間的吸收峰，其面積不得大于對照品峰面積。經(jīng)過實驗線性關(guān)系r=0.9999，加樣回收率為99.5%，RSD=0.5%

3.3 討論

3.3.1 由于乙酰水楊酸鋅在酸性條件下不穩(wěn)定，故選擇的流動相和溶劑為中性。

3.3.2 水楊酸易溶于甲醇，所以選擇流動相為溶劑。

3.3.3 通過對其他制劑的實驗證明用此方法檢查游離水楊酸分離效果良好，重現(xiàn)性好，專屬性較強，結(jié)果準確。

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