蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)的推廣應(yīng)用

摘 要 隨著我國經(jīng)濟(jì)水平的不斷提高，農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)的重點(diǎn)逐漸從數(shù)量轉(zhuǎn)移到質(zhì)量安全方面。目前，國內(nèi)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)的主要是蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類二大類農(nóng)藥殘留。國內(nèi)用于農(nóng)藥殘留的常用檢測(cè)方法有氣相色譜法和酶抑制法。氣相色譜法成本高，適合用于定性定量檢測(cè)；酶抑制法操作簡便、成本低廉，適合用于定性的快速檢測(cè)。實(shí)現(xiàn)對(duì)農(nóng)產(chǎn)品中蔬菜、水果的農(nóng)藥殘留監(jiān)督，需要推行快速、簡便、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法，才能達(dá)到有效監(jiān)控的目的?；诖?，利用廣東省開平市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)站的技術(shù)力量和儀器設(shè)備，對(duì)目前華南地區(qū)占主流地位的4種農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)儀器所應(yīng)用的技術(shù)進(jìn)行了一系列的試驗(yàn)，從而篩選出適用于當(dāng)前情況的技術(shù)，進(jìn)行推廣應(yīng)用，并調(diào)查驗(yàn)證推廣應(yīng)用的效果。

關(guān)鍵詞 蔬菜；農(nóng)藥殘留；檢測(cè)技術(shù)

中圖分類號(hào)：S968.25 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B 文章編號(hào)：

1 工作措施

1.1 儀器

臺(tái)灣速測(cè)儀、RP-410速測(cè)儀、NC-800速測(cè)儀、PR-3速測(cè)儀、氣相色譜儀。

1.2 樣品

甲胺磷、對(duì)硫磷、氧化樂果、敵敵畏、克百威、涕滅威的標(biāo)準(zhǔn)樣品、蒸溜水。

1.3 實(shí)驗(yàn)條件

嚴(yán)格按照儀器的相關(guān)操作要求和使用條件。

2 實(shí)驗(yàn)方法

將甲胺磷、對(duì)硫磷、氧化樂果的濃度分別配制成0.1、0.5、1.0、1.5、2.0mg/kg，將敵敵畏、克百威、涕滅威的濃度分別配制成0.1、0.5、1.0mg/kg。按要求進(jìn)行測(cè)定，對(duì)不同農(nóng)藥在各種儀器上的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較。

臺(tái)灣機(jī)的陽性標(biāo)準(zhǔn)為對(duì)酶抑制率≥35%；RP-410的陽性標(biāo)準(zhǔn)為對(duì)酶抑制率≥70%；NC-800陽性標(biāo)準(zhǔn)為對(duì)酶抑制率≥50%；PR-3速測(cè)儀其結(jié)果判斷是根據(jù)藥片顏色變化深淺（藍(lán)→白）進(jìn)行的目測(cè)判斷。

2.1 酶抑制率法與配套NC-800速測(cè)儀的檢測(cè)方法

2.1.1 試劑準(zhǔn)備

按使用說明書進(jìn)行。

2.1.2 檢測(cè)操作步驟

2.1.2.1 樣品提取 取2g果蔬樣品（葉菜剪成寬度為1cm左右的菜樣，塊根菜取1cm左右的表皮樣品）放入三角瓶中，加入10mL（1萬μL）緩沖液，振蕩提取（搖動(dòng)）2miN后，用濾紙?jiān)诹硪粋€(gè)三角瓶上干濾，濾出清液即為待測(cè)試液。

2.1.2.2 對(duì)照測(cè)試 在1cm比色皿中，用微量移液器加入酶100μL，加入緩沖液2.50mL（2500μL），混勻；微量移液器加入顯色劑100μL，用微量移液器加入底物20μL；搖勻后，及時(shí)放入儀器樣品池，按“對(duì)照測(cè)量”鍵進(jìn)行測(cè)試。

2.1.2.3 樣品測(cè)試 在1cm比色皿中，用微量移液器加入酶100μL，加入待測(cè)試液2.50mL，混勻；靜置10miN后，再加入顯色劑100μL，微量移液器加入底物20μL。搖勻后，及時(shí)放入儀器樣品池，按“樣品測(cè)量”鍵進(jìn)行測(cè)試。

2.1.2.4 測(cè)試結(jié)果的判斷 樣品的抑制率在40%～50%時(shí)，為可疑農(nóng)殘超標(biāo)樣品；抑制率大于50%時(shí)，為農(nóng)殘超標(biāo)樣品。

檢測(cè)結(jié)果計(jì)算公式

抑制率=

：對(duì)照組10miN后與10miN前吸光值之差

：樣本10miN后與10miN前吸光值之差

注：對(duì)照的比色杯中用3mL提取試劑代替樣本提取液

2.2 速測(cè)卡法與配套PR-3農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)儀的檢測(cè)方法

2.2.1 樣品預(yù)處理

取表面干凈的果蔬5g，剪成約1cm，放入加有5mL純凈水的燒杯中，用玻棒或振蕩器攪動(dòng)約1～2miN，使樣品與水充分接觸。同時(shí)，用純凈水做一空白對(duì)照。（注意：每剪成一個(gè)樣品，剪刀要洗凈后方可處理另一樣品，以免影響測(cè)試結(jié)果。）

2.2.2 檢測(cè)方法與步驟

1）接通電源，達(dá)到設(shè)定溫度后，儀器自動(dòng)提示。

2）將速測(cè)卡透明膜揭去，紅色藥片向上插入試紙，白色藥片置于加熱器上方。

3）分別用滴管吸取少量提取液，在試紙白端分別滴上2滴提取液。

4）按下啟動(dòng)鍵，開始加熱至TEMP時(shí)，蜂鳴器響一聲和自動(dòng)進(jìn)行TIME1倒計(jì)時(shí)，完成倒計(jì)時(shí)后，蜂鳴器響3聲，合上前蓋，儀器進(jìn)入倒計(jì)時(shí)TIME2，完成倒計(jì)時(shí)TIME2后，蜂鳴器連續(xù)發(fā)出響聲，提示開前蓋，停止加熱。

5）打開速測(cè)儀上蓋，觀察和記錄速測(cè)卡上白色藥片的顏色變化，藍(lán)色為陰性，淺藍(lán)色為弱陽性，白色為強(qiáng)陽性。

2.2.3 注意事項(xiàng) 見儀器說明書。

2.3 酶抑制率法與PR-410農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)儀的檢測(cè)方法

2.3.1 試劑準(zhǔn)備

按使用說明書進(jìn)行。

2.3.2 檢測(cè)操作步驟

1）取2g樣本（非葉菜類取4g），切碎。

2）加入20mL提取試劑，震蕩1～2miN，倒出上清液，靜置3～5miN。

3）于平底小試管中加入50μL酶、3mL樣本提取液、50μL顯色劑，在37～38℃下培養(yǎng)30miN。

4）待測(cè)的平底小試管內(nèi)加入50μL底物，倒入比色杯內(nèi)進(jìn)行儀器測(cè)定。

5）檢測(cè)結(jié)果計(jì)算公式：

抑制率=

：對(duì)照組3miN后與3miN前吸光值之差

：樣本3miN后與3miN前吸光值之差

注：對(duì)照的比色杯中用3mL提取試劑代替樣本提取液。

6）結(jié)果判定。檢測(cè)結(jié)果以抑制率（%）表示，抑制率<70%為陰性，抑制率>70%為陽性。

2.4 酶抑制率法與配套臺(tái)灣農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)儀的檢測(cè)方法

2.4.1 試劑準(zhǔn)備

按使用說明書進(jìn)行。

2.4.2 檢測(cè)操作步驟

1）取1g樣本，切碎。

2）以2mL緩沖液進(jìn)行萃取3miN，萃取液靜置2miN。

3）于96孔檢驗(yàn)盤內(nèi)加入50μL樣品萃取液（以50μL緩沖液當(dāng)對(duì)照組）、50μL酵素，靜置3miN。

4）3miN后加入50μL受質(zhì)及顯色劑混合液，于412Nm波長下，讀取吸光值因時(shí)間（2miN）變化之斜率。

5）由吸光值變化速率與對(duì)照組之差異計(jì)算其抑制率，抑制率超過35%之樣品為陽性。

3 結(jié)果

3.1 分別使用速測(cè)儀對(duì)不同濃度的單標(biāo)樣品和混標(biāo)樣品進(jìn)行檢測(cè)

4種不同的的儀器相對(duì)不同的農(nóng)藥靈敏度各不相同：PR-3速測(cè)儀、NC-800速測(cè)儀靈敏度較適中；臺(tái)灣速測(cè)儀對(duì)克百威的靈敏度較高，但對(duì)甲胺磷的靈敏度相對(duì)偏低；RP-410速測(cè)儀對(duì)對(duì)硫磷的靈敏度較高，但對(duì)甲胺磷的靈敏度相對(duì)偏低；四種儀器對(duì)敵敵畏的靈敏度都較高。

對(duì)不同濃度的混標(biāo)（甲胺磷、對(duì)硫磷、克百威3種農(nóng)藥混合）樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下。

1）混合農(nóng)藥0.1mg/kg：采用臺(tái)灣速測(cè)儀的抑制率為69.81%、70.96%、71.91%、71.6%、74.42%；采用RP-410速測(cè)儀其抑制率為3%、6.7%、0.4%、11.6%、15.1%、7.36%；采用PR-3速測(cè)儀其紙片顏色為藍(lán)色、藍(lán)色、藍(lán)色、藍(lán)色、藍(lán)色；采用NC-800速測(cè)儀其抑制率為81.8%、82.6%、82.9%、80.5%、81.8%。

2）混合農(nóng)藥0.5mg/kg：采用臺(tái)灣速測(cè)儀的抑制率為95.22%、95.22%、95.03%、91.69%、94.85%；采用RP-410速測(cè)儀其抑制率75.7%、74.3%、75.9%、72.2%、72.7%；采用PR-3速測(cè)儀其紙片顏色為白色、白色、白色、白色、白色；采用NC-800速測(cè)儀其抑制率為91.9%、90.6%、94%、92.5%、92.3%。

3）混合農(nóng)藥1.0mg/kg：采用臺(tái)灣速測(cè)儀的抑制率為96.56%、95.78%、96.18%、95.35%、93.85%；采用RP-410速測(cè)儀其抑制率為79.7%、79%、81.3%、77.1%、77.6%、78.9%；采用PR-3速測(cè)儀其紙片顏色為白色、白色、白色、白色、白色；采用NC-800速測(cè)儀其抑制率為95.6%、97.1%、96.4%、95.8%、95.6%、96.1%。

結(jié)論：對(duì)3種混合標(biāo)樣進(jìn)行檢測(cè)，臺(tái)灣速測(cè)儀、NC-800速測(cè)儀的靈敏度較高，RP-410速測(cè)儀、PR-3速測(cè)儀適中。

3.2 儀器（配套檢測(cè)方法）的重現(xiàn)性、實(shí)測(cè)樣品的符合率

1）重現(xiàn)性。用同一個(gè)樣品提取液，在不同儀器上進(jìn)行2次以上檢測(cè)，看檢測(cè)結(jié)果吻合情況。

2）符合率。樣品同時(shí)用四種速測(cè)儀根據(jù)其對(duì)應(yīng)的檢測(cè)方法檢測(cè)，再用氣相色譜儀定性定量（有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥的測(cè)定）分析。

①重現(xiàn)性。本實(shí)驗(yàn)共檢測(cè)50個(gè)樣品，各檢測(cè)2次，2次的結(jié)果不吻合情況為：臺(tái)灣速測(cè)儀與配套方法1個(gè)，RP-410速測(cè)儀與配套方法3個(gè)，PR-3速測(cè)儀與配套速測(cè)卡法1個(gè)，NC-800速測(cè)儀與配套方法2個(gè)，儀器及配套方法重現(xiàn)性排名為a.臺(tái)灣速測(cè)儀與配套方法及PR-3速測(cè)儀與配套速測(cè)卡法；b.NC-800速測(cè)儀與配套方法；c.RP-410速測(cè)儀與配套方法。②本實(shí)驗(yàn)從50個(gè)樣品中抽15個(gè)樣品用氣相色譜儀定性定量分析，結(jié)果為NC-800速測(cè)儀與配套方法的符合率最高，其次為臺(tái)灣速測(cè)儀與配套方法、RP-410速測(cè)儀與配套方法，PR-3速測(cè)儀與配套速測(cè)卡法因受提取液色素的干擾，符合率與前3種速測(cè)儀與配套方法比較稍差。

3.3 檢測(cè)消耗時(shí)間的比較

1）臺(tái)灣速測(cè)儀及配套方法。1批次可檢測(cè)88個(gè)樣品，每批次的培養(yǎng)時(shí)間短，為3miN，檢測(cè)時(shí)間為2miN，前處理方法簡單。

2）RP-410速測(cè)儀及配套方法。1批次可檢測(cè)5個(gè)樣品，每批次的培養(yǎng)時(shí)間長，為30miN，檢測(cè)時(shí)間為3miN，前處理方法簡單。

3）PR-3速測(cè)儀及速測(cè)卡片法。1批次可檢測(cè)11個(gè)樣品，每批次的培養(yǎng)時(shí)間適中，為10miN，檢測(cè)時(shí)間為3miN，前處理方法簡單。

4）NC-800速測(cè)儀及配套方法。1批次可檢測(cè)5個(gè)樣品，每批次的培養(yǎng)時(shí)間適中，為10miN，檢測(cè)時(shí)間為3miN，前處理方法較復(fù)雜。

3.4 檢測(cè)消耗試劑的成本比較

1）臺(tái)灣速測(cè)儀及配套方法。理論上，檢測(cè)單個(gè)樣品消耗試劑成本為0.2元/個(gè)，試劑的保存條件要求較高，酶試劑配制后需冷凍保存，使用時(shí)重復(fù)解凍2～3次，酶的活性會(huì)降低，甚至?xí)А?/p>

2）RP-410速測(cè)儀及配套方法。理論上，檢測(cè)單個(gè)樣品消耗試劑成本為1.5元/個(gè)，試劑的保存條件較臺(tái)灣速測(cè)儀的試劑稍低，酶試劑配制后需冷藏保存，存放時(shí)間30d，酶的活性會(huì)降低，甚至?xí)А?/p>

3）PR-3速測(cè)儀及配套速測(cè)卡片法。理論上，檢測(cè)單個(gè)樣品消耗速測(cè)卡成本為1.2元/個(gè)，速測(cè)卡保存方法簡單，存放在干燥器或冰箱中，存放時(shí)間可達(dá)1年以上。

4）NC-800速測(cè)儀及配套方法。理論上檢測(cè)單個(gè)樣品消耗試劑成本為1.5元/個(gè)，試劑的保存條件較臺(tái)灣速測(cè)儀的試劑稍低，酶試劑配制后需冷藏保存，存放時(shí)間30d，酶的活性會(huì)降低，甚至?xí)А?/p>

4 小結(jié)

4.1 結(jié)論

1）PR-3速測(cè)儀。檢測(cè)靈敏度高，重現(xiàn)性好，使用較為方便，一次可檢測(cè)11個(gè)樣品；檢測(cè)所需時(shí)間短，操作簡便，消耗試劑成本適中；樣品提取液受色素的干擾，實(shí)測(cè)樣品符合率與其他3種速測(cè)儀相比稍差。

2）臺(tái)灣速測(cè)儀。檢測(cè)靈敏度較高，重現(xiàn)性好，對(duì)色素的抗干擾能力強(qiáng)，一次可檢測(cè)88個(gè)樣品；實(shí)測(cè)樣品符合率較好，消耗試劑成本低；酶活性不穩(wěn)定，儀器購置成本高，且存放條件要求高。

3）RP-410速測(cè)儀。檢測(cè)靈敏度較適中，對(duì)色素的抗干擾能力強(qiáng)，一次可測(cè)5個(gè)樣品；實(shí)測(cè)樣品符合率較好；酶活性較臺(tái)灣速測(cè)機(jī)穩(wěn)定，耗用酶試劑不多；培養(yǎng)時(shí)間長（30miN），重現(xiàn)性較低。

4）NC-800速測(cè)儀。檢測(cè)靈敏度較高，抗干擾能力較強(qiáng)，一次可檢測(cè)6個(gè)樣品；實(shí)測(cè)樣品符合率好；酶活性穩(wěn)定，前處理較復(fù)雜，且空白對(duì)照需單獨(dú)檢測(cè)。

4.2 速測(cè)儀及配套方法的推廣應(yīng)用

4.2.1 PR-3速測(cè)儀使用優(yōu)勢(shì)及存在問題

1）節(jié)約資金。儀器設(shè)備購置成本最低，是臺(tái)灣速測(cè)儀的1/100，RP-410速測(cè)儀和NC-800速測(cè)儀的1/10；配套儀器和易耗品成本最低，速測(cè)卡購買和保存方便。其他速測(cè)儀的酶試劑配置時(shí)間會(huì)嚴(yán)重影響其活性，基層單位使用頻率低，大大增加了使用成本。

2）容易保存。速測(cè)卡干燥常溫下可以存放，無需冷藏保存。

3）操作簡單，無須專業(yè)人員。一般人員經(jīng)過1d的培訓(xùn)，即可操作使用儀器，并對(duì)結(jié)果做出準(zhǔn)確判斷。

4）使用方便，儀器使用交直流兩用電源、汽車電源，可在室內(nèi)、室外使用，檢測(cè)人員可以直接帶到市場、田間、車上使用；結(jié)果判斷簡單方便，無需讀數(shù)。

5）檢測(cè)量大，有12個(gè)通道，可同時(shí)檢測(cè)12個(gè)樣品。

6）體積小、重量輕、便于攜帶。

7）15miN內(nèi)無任何操作，自動(dòng)關(guān)機(jī)。

8）存在問題。儀器本身存在一定檢測(cè)局限性，對(duì)一些含生物堿和色素含量高的農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)，有假陽性檢出，相關(guān)技術(shù)有待進(jìn)一步研究。

4.2.2 臺(tái)灣速測(cè)儀及配套方法的推廣優(yōu)勢(shì)及存在問題

①方法簡單，檢測(cè)量大，檢測(cè)成本低。儀器具有96孔微盤測(cè)讀儀，可同時(shí)測(cè)讀標(biāo)準(zhǔn)96孔微盤內(nèi)不同樣本的吸光值，一次可檢測(cè)88個(gè)樣本，試劑消耗的成本較低。

②儀器內(nèi)部有97條光纖設(shè)計(jì)，可依序測(cè)讀每1孔內(nèi)的樣本，以減少孔與孔間的光線干擾。

③可連接電腦和打印機(jī)，由分析軟件來控制分析過程及顯示吸光值、畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線、換算濃度等分析功能，并能根據(jù)需要，直接打印出樣本的吸光值及判斷結(jié)果。

④檢測(cè)方法靈敏度較高，重現(xiàn)性好，對(duì)色素的抗干擾能力強(qiáng)；與其它檢測(cè)方法對(duì)照，該儀器及配套方法一致性較好。

⑤存在問題。儀器一次性投資較大。檢測(cè)用酶需冷凍保存，且穩(wěn)定性稍差；儀器須在恒溫、恒濕的環(huán)境中存放和使用。儀器須由經(jīng)培訓(xùn)合格的專業(yè)人員操作；檢測(cè)前試劑準(zhǔn)備時(shí)間相對(duì)較長。

綜上所述，PR-3速測(cè)儀及配套方法適宜于樣品檢測(cè)量大、檢測(cè)時(shí)間要求短或檢測(cè)現(xiàn)場流動(dòng)性大的基層檢測(cè)部門推廣使用，臺(tái)灣速測(cè)儀及配套方法適宜于樣品檢測(cè)量大、檢測(cè)時(shí)間要求短，有一定經(jīng)濟(jì)能力，具有固定和良好檢測(cè)場所的農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)部門或基層檢測(cè)部門推廣使用。

（責(zé)任編輯：劉昀）

收稿日期：2014-01-09

作者簡介：吳水玲（1976-），女，廣東開平人，本科，助理農(nóng)藝師。從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量管理。