TBX2基因和FEZ1基因在胃癌中的表達及其臨床意義

牟時斌，崔 峰，王二數(shù)，王繼紅

（1.河北省臨西縣人民醫(yī)院病理科，河北 臨西 054900；2.邢臺礦業(yè)集團總醫(yī)院病理科，河北 邢臺 054000；3.河北省邢臺市第一醫(yī)院急診科，河北 邢臺054000；4.河北省邢臺市第三醫(yī)院麻醉科，河北 邢臺 054000）

TBX2基因和FEZ1基因在胃癌中的表達及其臨床意義

牟時斌1，崔 峰2，王二數(shù)3，王繼紅4

（1.河北省臨西縣人民醫(yī)院病理科，河北 臨西 054900；2.邢臺礦業(yè)集團總醫(yī)院病理科，河北 邢臺 054000；3.河北省邢臺市第一醫(yī)院急診科，河北 邢臺054000；4.河北省邢臺市第三醫(yī)院麻醉科，河北 邢臺 054000）

目的 探討TBX2、FEZ1在正常胃黏膜、上皮內(nèi)腫瘤及胃腺癌中的表達及其臨床病理意義。方法 采用免疫組織化學(xué)方法檢測30例正常胃黏膜、30例上皮內(nèi)腫瘤及80例胃腺癌中TBX、FEZ1蛋白質(zhì)的表達。應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS15.0分析其與臨床病理及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果 TBX2在低分化組織中的陽性表達高于高分化組織（P＜0.05），臨床分期 Ⅳ期的表達高于Ⅰ期（P＜0.05），肌層浸潤 ＞1／2的表達高于≤1／2的表達（P＜0.05）；FEZ1在低分化組織中的陽性表達低于高分化組織（P＜0.05），臨床分期Ⅲ期的陽性率表達低于Ⅰ期的表達（P＜0.05），腫瘤直徑＞4cm陽性表達低于≤4cm的表達（P＜0.05），肌層浸潤 ＞1／2的表達低于≤1／2的表達（P＜0.05），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達（P＜0.05），年齡＞60歲的表達低于≤60歲的表達（P＜0.05）。結(jié)論TBX2和FEZ1在胃黏膜發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，前者發(fā)揮著原癌基因的作用，后者發(fā)揮著抑癌基因的作用。

胃腫瘤；病理學(xué)，臨床；免疫組織化學(xué)

胃癌是人類常見的惡性腫瘤之一，國內(nèi)胃癌較為常見，且病死率高，居惡性腫瘤死亡的首位。胃癌的發(fā)生是一個多基因、多因素參與的多階段過程，顯性癌基因的異常激活與抑癌基因的失活在其中扮演著重要角色。目前對一些原癌基因和抑癌基因在胃癌中的表達已經(jīng)有了一定的認識，而對大鼠T-框蛋白（T-box protein 2，TBX2）、抑癌蛋白（FEZ1）在胃癌中表達及相互作用還知之甚少，本研究運用免疫組織化學(xué)Envision兩步法檢測TBX2和FEZ1在正常胃黏膜、胃黏膜上皮內(nèi)腫瘤與胃癌中的表達，并分析其與腫瘤臨床參數(shù)的關(guān)系，進而探討二者在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及可能的作用機制，旨在為胃癌的早期診斷及患者的預(yù)后提供新的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 標本來源：選取2006年10月—2012年7月臨西縣人民醫(yī)院保存的經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋的胃組織標本 110例，其中胃黏膜上皮內(nèi)腫瘤標本30例，胃腺癌標本80例，另選取30例正常胃黏膜標本30例作為對照組。80例胃癌患者均為初治病例，年齡40～70歲，中位年齡55歲；手術(shù)分期按WHO胃癌TNM分期標準，Ⅰ期30例，Ⅱ期27例，Ⅲ期20例，Ⅳ期3例；病理類型全部為腺癌，病理分級高分化15例，中分化35例，低分化30例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性25例，陰性55例；肌層浸潤≤1／2者38例，＞1／2者42例。

1.2 主要試劑：即用型TBX2鼠抗人單克隆抗體、即用型FEZ1鼠抗人單克隆抗體及免疫組織化學(xué)試劑盒均購自北京中杉金橋公司，免疫組織化學(xué)采用Envision兩步法，切片常規(guī)脫蠟至水，檸檬酸鹽加熱抗原修復(fù)，具體步驟參照試劑盒說明書進行，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木精復(fù)染細胞核。

1.3 結(jié)果判斷：TBX2免疫組織化學(xué)染色以細胞核和（或）胞質(zhì)中出現(xiàn)黃色至棕褐色顆粒視為陽性著色；FEZ1染色結(jié)果以細胞膜出現(xiàn)背景清晰的黃色或棕黃色顆粒為陽性。采用半定量積分法判斷結(jié)果。根據(jù)染色強度分為4級，無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；根據(jù)陽性細胞數(shù)所占百分比分為4級，陽性細胞數(shù)＜10%為 1分，11%～50%為1分，51%～75%為2分，＞76%為3分。兩項得分相乘，0～3分為（－），4～5分為（＋），6～8分為（＋＋），＞9分為（＋＋＋）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法：應(yīng)用SPSS15.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，分別進行秩和檢驗、χ2檢驗、Spearman等級相關(guān)檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 TBX2、FEZ1在胃黏膜病變組織中的表達：TBX2蛋白主要定位于癌細胞胞質(zhì)，正常胃黏膜組、上皮內(nèi)腫瘤組和胃腺癌組表達的陽性率呈逐漸升高趨勢，胃腺癌組陽性表達率高于正常胃黏膜組和上皮內(nèi)腫瘤組（P＜0.05或＜0.01）；FEZ1蛋白表達主要定位于細胞胞質(zhì)，正常胃黏膜組、上皮內(nèi)腫瘤組和胃腺癌組表達的陽性率呈逐漸降低趨勢，胃腺癌組和上皮內(nèi)腫瘤組陽性表達率均低于正常胃黏膜組（P＜0.01）。見表1。

2.2 不同病理參數(shù)TBX2、FEZ的表達：TBX2在低分化組織中的陽性表達高于高分化組織（P＜0.05）；臨床分期 Ⅳ期的表達高于Ⅰ期（P＜0.05）；肌層浸潤 ＞1／2的表達高于≤1／2的表達（P＜0.05）。FEZ1在低分化組織中的陽性表達低于高分化組織（P＜0.05）；臨床分期Ⅲ期的陽性率表達低于Ⅰ期的表達（P＜0.05）；腫瘤直徑＞4cm陽性表達低于≤4cm的表達（P＜0.05），肌層浸潤 ＞1／2的表達低于≤1／2的表達（P＜0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達（P＜0.05）；年齡＞60歲的表達低于≤60歲的表達（P＜0.05）。見表2。

2.3 TBX2與FEZ1表達的相關(guān)性：Spearman等級相關(guān)分析顯示，TBX2與 FEZ1的表達呈負相關(guān)（rs＝－0.430，P＜0.01）。

表1 3組TBX2和FEZ1在胃黏膜中表達的比較Table 1 Expression of TBX2 and FEZ1 in gastric muscosa （n，%）

表2 胃腺癌中TBX2、FEZ1的表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系Table 2 Correlation between expression of TBX2，F(xiàn)EZ1 and clinic pathologic parameters （n，%）

3 討 論

TBX2基因是 t-box基因家族成員之一。TBX2位于染色體17q23，其編碼蛋白TBX2主要通過其C末端的轉(zhuǎn)錄抑制結(jié)構(gòu)域發(fā)揮轉(zhuǎn)錄抑制作用，是一個指導(dǎo)胚胎、組織器官軸發(fā)育的重要轉(zhuǎn)錄因子［1］。TBX2在多種腫瘤中高表達，并且與細胞惡性轉(zhuǎn)化、腫瘤細胞增殖以及細胞凋亡等有關(guān)，其促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展的作用日益受到關(guān)注［2］。首先，TBX2可以協(xié)同RAS、MYC等基因使細胞向惡性轉(zhuǎn)化；其次，它還可以抑制p19ARF-MDM-p53通路的關(guān)鍵蛋白p19ARF的表達，促使細胞繞過衰老途徑，而使細胞周期停滯在G1／S和（或）G2／M期，從而抑制細胞的衰老與凋亡，當這種致病基因的異常表達積累達到時間和量的極限而使細胞突破這一臨界值時，就可能最終導(dǎo)致細胞的惡性轉(zhuǎn)化；最后，將組蛋白去乙?；?1（HADC1）轉(zhuǎn)運到p21基因的表達啟動子位置，通過 HADC1抑制p21基因的表達而抑制細胞凋亡，參與p21WAF 1／CIP1突變的致瘤途徑［3－4］。研究［5－6］表明 TBX2在惡性腫瘤如子宮內(nèi)膜癌、胰腺癌、乳腺癌、腎上腺癌、子宮頸癌及黑色素瘤等惡性腫瘤中都有高表達和（或）擴增。本研究發(fā)現(xiàn)TBX2在胃腺癌中的表達明顯高于正常胃黏膜。說明TBX2蛋白過表達在胃黏膜病變晚期發(fā)揮了明顯的作用，TBX2基因活化是癌變過程中的晚期事件。本研究還顯示隨著胃癌的分化程度降低、臨床分期增加、肌層浸潤加深TBX2陽性率呈明顯增高。說明TBX2可以促進癌變的進一步演進，使腫瘤的惡性程度增加。

FEZ1／LZTS1全長約1.5mb，位于人類染色體8p21.3的D8S261位點附近，具有 3個可能的轉(zhuǎn)錄本，分別含有4、5、2個外顯子。免疫組織化學(xué)顯示FEZ1蛋白主要存在于胞質(zhì)中，少部分位于胞核內(nèi)［7］。本研究結(jié)果表明，在正常胃黏膜、胃黏膜上皮內(nèi)腫瘤變、胃腺癌中，F(xiàn)EZ1的表達逐漸降低，并且隨著胃癌的分化程度降低、肌層浸潤加深、腫瘤體積增大及出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和年齡的增加，F(xiàn)EZ1蛋白的表達逐漸降低。說明FEZ1基因在胃癌的演進中起到了抑癌基因的作用。

作為抑癌基因，F(xiàn)EZ1在前列腺癌、食管癌、頭頸部癌肝癌及膽管癌的研究中均顯示該蛋白的表達缺失或下調(diào)［8－9］，Ishii等［10］對前列腺癌、食管癌和乳腺癌等多種上皮腫瘤進行分析后發(fā)現(xiàn)了在2個食管癌及1個前列腺癌細胞株中FEZ基因存在點突變。FEZ1的畸變和失活可能在包括胃癌在內(nèi)的幾種人類腫瘤中起作用。

本研究結(jié)果顯示TBX2與FEZ1在胃癌中表達呈負相關(guān)，并且TBX2的異常表達和FEZ1的表達降低均與胃癌腫瘤分化程度、肌層浸潤深度有關(guān)。提示在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中TBX2和FEZ1可能發(fā)揮了相對立的作用?？傊?，TBX2與FEZ1基因可能在胃癌的發(fā)生發(fā)展中密切相關(guān)，有望成為胃癌發(fā)生的生物學(xué)標記和腫瘤基因治療的新靶點，可為胃癌的診斷和治療提供新的手段。

［1］TENG H，PARKER MI，PRINCE S.Functional characterization of cis-acting elements involeved in basal transcription of the human TBX2 gene：a new insight into the role of Sp1 in transcriptional regulation［J］.Gene，2012，423（1）：8－13.

［2］DOBRZYCKA KM，KANG K，JIANG S，et al.Disruption of scaffold attachment factor B1 leads to TBX2 up-regulation，lack ofp19ARF induction，lack od senscence，and cell immortalization［J］.Cancer Res，2011，66（16）：7859－7863.

［3］VANCE KW，CARREIRA S，BROSCH G，et al.TBX2 is overexpressed and plays an important role in maintaining proliferation and suppression of senesene in melanoma［J］.Cancer Res，2013，65（6）：2260－2268.

［4］BILICAN B，GODING CR.Cell cycle regulation of the T-box transcription factor TBX 2［J］.Exp Cell Res，2011，312（12）：2358－2366.

［5］ABRAHAMS A，PARKERMI，PRINCES.TheT-box transcription facter TBX2：itsrolein developmentand possible implication in cancer［J］.IUBMB Life，2010，62（2）：92－102.

［6］JACOBS JJ，KEBLUSEK P，ROBANUS-MAANDAG E，et al.Senescene bypass screen identifies TBX2，which represses Cdkn2a（p19（ARF））and is amplified in a subset of human breast cancers［J］.Nat Genet，2012，26（3）：291－299.

［7］ISHII H，VECCHIONE A，MURAKUMO Y，et al.FEZ1／ZTS1 gene at 8p 22suppresses cancer cell growth and regulates mitosis［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2011，98（18）：10374－10379.

［8］VECCHIONE A，CROCE CM，BALDASSARRE G，et al.Fezl／Lztsl a new mitoticregulator implicated in cancer development［J］.Cell Div，2007，24（2）：24.

［9］KAWAKI L，MIYAZAKI M，ITO H，et al.Allelic loss in human intrahepatic cholangiocarcinoma：correlation between chromosoma 8p22 and tumor progression［J］.Int J Cancer，2000，88（2）：228－231.

［10］ISHII H，BAFFA，R，NUMATA SI，et al.The Fezl gene at chromosoma 8p22 encodes a leucine-zipper protein，and its expression is altered in multiple human tumors［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2011，96（7）：3928－3933.

（本文編輯：許卓文）

EXPRESSION OF TBX2 AND FEZ1 GENE IN GASTRIC ADENOCARCINOMA AND THEIR CLINIC PATHOLOGY ROLE

MU Shibin1，CUI Feng2，WANG Ershu3，WANG Jihong4
（1.Department of Pathology，the People＇s Hospital of Linxi，Hebei Province，Linxi054900，China；2.Department of Pathology，the General Hospital of Xingtai Mining（group）Co.ltd，Hebei Province，Xingtai054000，China；3.Department of Eemeryency，the First Hospital of Xingtai City，Hebei Province，Xingtai054000，China；4.Department of Aneshesiology，the Third People＇s Hospital of Xingtai，Hebei Province，Xingtai054000，China）

ObjectiveTo investigate the expression of T-box protein 2（TBX2）and antioncogene FEZ1 in normal gastric muscosa，intraepithelial tumor and gastric adenocarcinoma and the roles of their clinic pathology.MethodsThe exprssion of TBX2 and FEZ1 were detected by immunohistiochemistry in normal gatromucosa，intraepithelial tumor and gastric carcinoma.Statistic soft ware SPSS15.0 was used to analyze the clinicopathological significance and its relationship to prognosis.ResultsThe positive expression rate of TBX2 protein was higher in low differentiated group than in high differrentiated one（P＜0.05），and TBX2 in group with stageⅣwas also higher than in group with stageⅠ（P＜0.05），and also in group with over one half deeply muscle infiltration was significantly higher than in group with under one-half infiltration（P＜0.05）.The positive expression rate of FEZ1 protein was lower in low differentiated group than in high differrentiated one（P＜0.05），so was it in group with tumor diameter over 4cm than ingroup under 4cm （P＜0.05）；the expression rate of FEZ1 was lower in group with over 1／2 muscle infiltration than in group with under1／2 infiltrattion，so was it in group with lymph nodule metastasis than in group without lymph nodule metastasis（P＜0.05）；also it was higher in group with the age over 60 years old than in group under 60 years old（P＜0.05）.ConclusionTBX2 and FEZ1 were of great importance in the development and prognosis of gastric adenocarcinoma.The former played an important role of oncogene with the latter anti-oncogene.

stomach neoplasm；pathology，clinical；immunohistiochemistry

R735.2

A

1007-3205（2014）10-1159-04

2014－01－24；

2014－04－10

牟時斌（1977－），男，河北清河人，河北省臨西縣人民醫(yī)院主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事臨床外科病理學(xué)研究。

10.3969／j.issn.1007-3205.2014.10.014