胰腺癌患者化療前后外周血NKT、IFN-γ、IL-6水平變化及意義

吳安任

(徐聞縣中醫(yī)院，廣東徐聞524100)

胰腺癌屬于較棘手的普外科惡性腫瘤，一旦確診一般為晚期，且多無手術(shù)治療機會，因此該類患者多采取姑息性化療措施進(jìn)行治療［1］。目前，胰腺癌發(fā)病機制尚未完全明確，但有越來越多的證據(jù)表明胰腺癌與自然殺傷細(xì)胞(NKC)的活力下降有關(guān)［2］;且有研究［3，4］表明，胰腺癌與 CD+4及 CD+26T細(xì)胞的功能異常密切相關(guān)。本文觀察了化療前后胰腺癌患者外周血自然殺傷 T細(xì)胞(NKT)、γ干擾素(IFN-γ)、IL-6水平變化，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2010年1月～2013年8月我院收治的胰腺癌患者35例(胰腺癌組)，男22例，女13例;年齡(57.4±12.6)歲;以上患者均為Ⅲ期，且未接受化療;瘤體位于胰頭21例，胰體8例，胰尾部6例;經(jīng)病理學(xué)或ERCP送檢細(xì)胞學(xué)確診為腺癌者27例，經(jīng)臨床表現(xiàn)、實驗室檢查結(jié)合腹部增強CT掃描確診8例。排除其他系統(tǒng)治療以及風(fēng)濕免疫性疾病，且近期內(nèi)無服用激素或免疫抑制劑等情況［3］。另選取同期就診的慢性胰腺炎［5］患者35例，男24例，女11 例;年齡(56.9±13.1)歲。健康體檢志愿者35例(對照組)，男21例，女14例;年齡(53.4±11.9)歲。各組一般資料比較無統(tǒng)計學(xué)差異，具有可比性。化療方法:吉西他濱單藥方案(21例):劑量為1 000 mg/m2，靜脈滴注30 min，每周1次，連用7周，休息2周，之后每周1次，連用3周，4周重復(fù)［6］。聯(lián)合方案(14例):氟尿嘧啶 425～600 mg/m2;或順鉑60～75 mg/m2;或奧沙利鉑85～130 mg/m2;或卡培他濱1 000 mg/m2。在化療開始前，采集靜脈血1次;7周時第2次采集靜脈血。

1.2 外周血NKT、IFN-γ、IL-6檢測方法 清晨空腹抽取所有受試對象靜脈血約5 mL，以上標(biāo)本均抗凝保存于4℃冰箱內(nèi)待測。CD3-FITC、CD16-PE、CD56-PE、IFN-γ-PE及IL-6-PE細(xì)胞因子抗體均購自南京建成生物工程研究所。多色流式細(xì)胞儀為美國BD公司生產(chǎn)。采用Ficoll分離獲得外周血單個核細(xì)胞，隨后應(yīng)用尼龍毛柱獲得T淋巴細(xì)胞，再免疫磁珠孵育30 min后進(jìn)行磁珠而分離出NKT細(xì)胞。使用固定穿透劑對NKT胞內(nèi)IFN-γ及IL-6進(jìn)行染色，使用雙激光光源，其中FL1和FL2熒光通道以相應(yīng)同種型鼠IgG染色細(xì)胞作陰陽分界線，仔細(xì)設(shè)置各熒光通道之間的熒光補償，每管獲取細(xì)胞數(shù)1 000個;運用FACSDiva軟件對NKT細(xì)胞百分含量及其胞內(nèi)細(xì)胞因子水平進(jìn)行分析;采用放射免疫試劑盒檢測 CA199 水平［7］。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計量資料以±s表示，三組間兩兩比較采用單因素方差分析(ANOVA)SNK法，應(yīng)用配對t檢驗比較化療前后的指標(biāo)變化。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胰腺癌組化前后及胰腺炎組、對照組NKT、IFN-γ、IL-6、CA199水平比較 見表1。

表1 胰腺癌組化前后及胰腺炎組、對照組NKT、IFN-γ、IL-6、CA199 水平比較(±s)

表1 胰腺癌組化前后及胰腺炎組、對照組NKT、IFN-γ、IL-6、CA199 水平比較(±s)

注:與對照組比較，aP ＜0.05;與胰腺炎組比較，bP ＜0.05;與同組化療前比較，cP ＜0.05

組別 n NKT(%) IFN-γ(%) IL-6(%) CA199(μg/L)35化療前 5.22±1.63ab 1.93±0.84ab 18.39±4.87ab 34.16±9.48ab化療后 13.76±3.35c 5.71±2.42c 6.81±2.61c 13.87±4.91胰腺炎組 35 18.26±5.47 7.34±2.61 4.64±1.55a 2.38±1.47a對照組胰腺癌組35 20.75±6.81 8.41±3.27 1.80±0.37 0.83±0.21

2.2 胰腺癌組 NKT、IFN-γ、IL-6的相關(guān)性 NKT與 IFN-γ 呈正相關(guān)(r=0.785，P ＜0.05)，IL-6 與CA199呈正相關(guān)(r=0.674，P ＜ 0.05)，NKT 與CA199 呈負(fù)相關(guān)(r= －0.894，P ＜0.05)。

3 討論

Nagaraj等［8］報道，胰腺癌年發(fā)病率約 511/10萬，估計每年新增近6萬例，吸煙、大量飲酒、糖尿病史、膽石癥史及多次生育史為發(fā)病的主要危險因素。胰腺癌發(fā)病機制仍不甚清楚，除上述危險因素外，年齡、性別、種族、地域也與此癌有一定的相關(guān)性［9］。近年來，對胰腺癌免疫機制的研究有很大進(jìn)展，例如對腫瘤抗原、免疫監(jiān)視、免疫逃避、免疫耐受、T淋巴細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞因子以及調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞的調(diào)節(jié)、共刺激分子的下調(diào)及腫瘤微環(huán)境有了一定的認(rèn)識［10，11］。

由于胰腺癌患者胰導(dǎo)管易發(fā)生梗阻，導(dǎo)致常伴發(fā)慢性胰腺炎而增加診斷難度，因此臨床上經(jīng)常遇到胰腺癌誤診為慢性胰腺炎采用非手術(shù)治療，后因病情惡化甚至發(fā)現(xiàn)癌轉(zhuǎn)移才發(fā)現(xiàn)誤診，但此時已失去手術(shù)切除機會，這對胰腺癌的早期診斷是明顯不利的［12］。NKT是一種既表達(dá)T細(xì)胞標(biāo)志性的CD3分子，又表達(dá) NK細(xì)胞的 CD16及 CD56分子的 T細(xì)胞［13］;其同時具備NK和T細(xì)胞雙重免疫活性，在抗腫瘤的免疫機制當(dāng)中扮演重要角色［14］。研究表明，NKT細(xì)胞可在抗原刺激下體外大量擴增，呈TH0樣細(xì)胞因子分泌，激活后可以產(chǎn)生IFN-γ等細(xì)胞因子，從而介導(dǎo)細(xì)胞免疫并發(fā)揮細(xì)胞毒性作用，是NKT抗腫瘤的重要機制［15］。IL-6是一種重要的炎癥因子，在多種炎癥及腫瘤可表達(dá)升高［16］。

本研究發(fā)現(xiàn)，胰腺癌組NKT、IFN-γ水平較對照組低，這與Yamasaki等［13］的結(jié)果類似，說明NKT及IFN-γ在胰腺癌及慢性胰腺炎外周血中存在差異性表達(dá)。本研究顯示，胰腺癌組及胰腺炎組IL-6水平均高于對照組，且胰腺癌組高于胰腺炎組，其原因是惡性腫瘤可產(chǎn)生大量壞死物從而誘發(fā)局部及全身炎癥，從而使IL-6水平升高［17］;而慢性胰腺炎其胰腺內(nèi)程度較輕，胰管壓迫、堵塞相對較輕，胰腺自身消化并不嚴(yán)重，因此IL-6升高不如急性胰腺炎及胰腺癌明顯［18］。本研究還發(fā)現(xiàn)，胰腺癌組化療后NKT、IFN-γ水平均較治療前升高，說明NKT的抗腫瘤活力有所恢復(fù)，化療有效。而胰腺癌組化療后IL-6水平較化療前下降，說明胰腺細(xì)胞壞死程度減輕，炎性滲出減少。胰腺癌組CA199水平較胰腺炎及對照組高，仍然支持CA199診斷胰腺癌的特異性。相關(guān)性分析顯示，NKT與IFN-γ呈正相關(guān)，IL-6與CA199呈正相關(guān)，NKT與 CA199呈負(fù)相關(guān)，說明 NKT與IFN-γ是胰腺癌患者病情轉(zhuǎn)歸的有利因素，而IL-6是一個反映炎癥和壞死的不利因素。

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