PCR與ELISA檢測(cè)乙肝病毒的對(duì)比及臨床意義

（菏澤醫(yī)學(xué)專(zhuān)科學(xué)校，山東菏澤274000）

PCR與ELISA檢測(cè)乙肝病毒的對(duì)比及臨床意義

王海峰

（菏澤醫(yī)學(xué)專(zhuān)科學(xué)校，山東菏澤274000）

目的探討熒光PCR法檢測(cè)HBV-DNA定量ELISA定性檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物臨床價(jià)值比較。方法取受試者空腹血清標(biāo)本同時(shí)以熒光定量PCR法檢測(cè)HBV-DNA和酶聯(lián)免疫法檢測(cè)乙肝病毒兩對(duì)半。結(jié)果HBV-DNA定量在9.99×108IU/mL～1.00×106IU/mL之間的404例，大三陽(yáng)比例為85.89%；HBV-DNA定量在9.99×105IU/mL～1.00×103IU/mL之間的416例，小三陽(yáng)比例為59.38%；HBV-DNA定量在1.00×103IU/m l～1.00×102IU/mL的140例中，HBsAg、HBcAb陽(yáng)性患者比例為71.43%；HBV-DNA定量＜1.00×102IU/mL的992例中，HBsAg、HBeAg陰性模式比例為95.67%。結(jié)論熒光定量PCR法檢測(cè)HBV-DNA和ELISA定性檢測(cè)HBV表面標(biāo)記物呈正相關(guān)，即HBV-DNA拷貝數(shù)多的以大三陽(yáng)居多，HBV-DNA拷貝數(shù)少的以無(wú)傳染性病毒攜帶者和陰性者居多。熒光定量PCR可以直接反映體內(nèi)乙肝病毒感染狀態(tài)及病毒載量情況，較ELISA更利于判斷疾病的嚴(yán)重程度和傳染性，更有利于指導(dǎo)臨床藥物選擇和療效觀察。

熒光定量聚合酶聯(lián)反應(yīng)試驗(yàn)；乙型肝炎病毒DNA；酶聯(lián)吸附試驗(yàn)

乙型肝炎是一種由乙肝病毒（HBV）感染引起的傳染病，乙肝病毒主要侵嗜肝細(xì)胞。我國(guó)屬HBV高發(fā)區(qū)，一般人群的HBsAg陽(yáng)性率為9.09%[1]。實(shí)時(shí)定量熒光PCR技術(shù)能夠?qū)υ寄０宥繌?fù)制，使我們能更精確地了解HBV的復(fù)制情況。HBV-DNA是乙肝病毒的遺傳物質(zhì)，HBV-DNA-PCR是從血清中檢測(cè)HBV存在的靈敏而直接的方法[2]。本文以1952份血清標(biāo)本分別用實(shí)時(shí)定量熒光PCR法檢測(cè)HBVDNA和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbentassay,ELISA)檢測(cè)乙肝病毒五項(xiàng)指標(biāo)，進(jìn)行對(duì)比分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 臨床材料

1.1 一般資料空腹血清標(biāo)本均取自2013年1月1日—2013年7月10日我們對(duì)1952份。其中，男1158例，女794例，年齡1～81歲，平均43.5歲?？崭共扇§o脈血，每份血清標(biāo)本分兩份，一份置-20℃凍存待測(cè)，一份4℃待測(cè)。1.2試劑、儀器與方法HBV-DNA定量檢測(cè)：采用上海復(fù)星診斷公司生產(chǎn)的HBV核酸擴(kuò)增熒光定量試劑盒，嚴(yán)格按試劑和說(shuō)明書(shū)操作。使用上海普迪生物科技有限公司ABI7000檢測(cè)，HBV-DNA含量＜1.0×102IU/mL為檢測(cè)下限。乙肝病毒兩對(duì)半檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上?？迫A生物工程股份有限公司，用ELISA法進(jìn)行HBV標(biāo)志物檢測(cè)并依據(jù)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分組。

2 結(jié)果

乙肝五項(xiàng)指標(biāo)定性檢測(cè)與病毒定量檢測(cè)結(jié)果比較，見(jiàn)表1。

表1 乙肝五項(xiàng)指標(biāo)定性檢測(cè)與病毒定量檢測(cè)結(jié)果比較（例，%）

3 討論

乙肝病毒HBV只侵犯人類(lèi)和其他靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物，是DNA病毒。乙肝病毒五項(xiàng)指標(biāo)是從免疫學(xué)水平來(lái)檢測(cè)HBV感染機(jī)體后引起的免疫應(yīng)答。由于個(gè)體反應(yīng)的差異，不同的人在感染HBV后會(huì)出現(xiàn)不同的免疫應(yīng)答，從而得到不同的乙肝病毒五項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果模式。其結(jié)果只能用病毒大量復(fù)制、傳染性強(qiáng)、少量復(fù)制、傳染性弱、不復(fù)制等描述，不能直接反應(yīng)患者體內(nèi)病毒的復(fù)制水平及傳染程度。實(shí)時(shí)定量熒光PCR技術(shù)則是從分子生物水平直接檢測(cè)HBV病毒自身的遺傳物質(zhì)DNA，是病毒存在、復(fù)制的最可靠、最直接的指標(biāo)。HBV-DNA定量在9.99×108IU/mL～1.00× 106IU/mL之間的受試者，大三陽(yáng)比例為85.89%，反映病毒復(fù)制活躍、傳染性強(qiáng)。但仍有2例HBV-DNA定量在9.99×108IU/mL～1.00×106IU/mL之間，血清學(xué)結(jié)果顯示陰性，這種情況可以考慮隱匿性HBV感染[3]，即S區(qū)突變：氨基酸第129位天門(mén)冬氨酸和第145位丙氨酸置換可導(dǎo)致血循環(huán)中HBsAg陰性；S蛋白第122與123位之間、123與124位之間，分別有2和3個(gè)氨基酸插入，也可導(dǎo)致HBsAg不能檢出。或處于乙肝病毒感染窗口期，ELISA法檢測(cè)不出，但實(shí)時(shí)定量熒光PCR法具有很高的靈敏度，即血清學(xué)結(jié)果為陰性，而DNA定量結(jié)果顯示病毒大量復(fù)制。HBVDNA定量在9.99×105IU/mL～1.00×103IU/mL之間，小三陽(yáng)比例為59.38%，反映一部分患者病毒復(fù)制弱，傳染性弱。S基因變異株的抗原性、免疫原性可發(fā)生相應(yīng)的改變，并可能同時(shí)造成與之重疊的P基因變異而影響病毒的復(fù)制。另外，HBV Prec區(qū)1896位的變異，是HBV中最常見(jiàn)的變異。1989年英國(guó)學(xué)者carlTlan等首次報(bào)道了HBV PreC區(qū)1896位的突變。野毒株1896位是G，變異是A，A83氨基酸(TGG)變異為終止密碼(TAG)，使PreC區(qū)蛋白的翻譯終止，從而使HBeAg不能合成，但它并不影響病毒復(fù)制。因此，臨床上表現(xiàn)為HBeAg陰性、HBV-DNA陽(yáng)性，而患者仍處于活動(dòng)狀態(tài)的慢性乙型肝炎。該位點(diǎn)的突變(G-A)有利于HBV前基因組RNA襻結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的增加，從而更有利于HBV-DNA的復(fù)制。并且另有報(bào)道，由于突變而引起的血清學(xué)的HBeAg陽(yáng)性至HBe-Ab陽(yáng)性的轉(zhuǎn)變，從而使病毒逃避了免疫清除，導(dǎo)致了肝炎重癥化或暴發(fā)性肝炎[4]。HBV-DNA定量在1.00×103IU/ mL～1.00×102IU/mL之間，HBsAg(+)、HBcAb(+)模式占71.43%。但是HBV-DNA定量＜1.00×102IU/mL，仍有1例為大三陽(yáng)患者，這種情況應(yīng)考慮是否HBV基因的S區(qū)發(fā)生有意義的點(diǎn)突變或插入、缺失突變[5]。

綜上所述，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)HBV-DNA在判斷體內(nèi)HBV是否在復(fù)制、復(fù)制的程度、用藥前后HBV量的變化，以及診斷等方面，均優(yōu)于HBV血清學(xué)標(biāo)志物的檢測(cè)，有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。

[1]中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì),感染病學(xué)分會(huì).慢性乙型肝炎防治指南[J].肝臟,2005,(10):348-357.

[2]王自正.實(shí)用臨床RIA與PCR檢測(cè)[M].北京:原子能出版社,1995: 127.

[3]張玲榮，馬媛，郝彥琴，等.隱匿性HBV感染者血清中HBV S基因變異分析[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011,42(10)：781-783.

[4]賈林梓，馮英明.隱匿性HBV感染與肝癌關(guān)系的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2009,17(5):985-988.

[5]何印蕾.乙肝患者血清前S1抗原檢測(cè)及臨床價(jià)值[J].右江醫(yī)學(xué)，2005,33(2):154-155.

The Com parison and Clinical Significance of HBV betw een PCR and ELISA

W ang Haifeng
(Heze MedicalCollege,Heze 274000,Shandong)

Ob jectiveAnalysis of 1952 casesw ith fluorescent PCRmethod to detectHBV-DNA quantitative re?sults and ELISA qualitative detection of HBV markers in serum specimens,and discusses the difference of the twometh?odsand clinical value.M ethods Fasting serum specimensof subjectswere used w ith fluorescentquantitative PCRmethod to detect HBV-DNA and enzyme-linked immunoassay(ELISA)to detecthepatitis b virus(HBV)two half-and-half at the same time.Resu ltsHBV-DNA quantitative in 9.99×108IU/m l-1.00×106IU/m l404 cases,the ratio of the patients (HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+))was 85.89%;HBV-DNA quantitative in 9.99×105IU/m l-1.00×103IU/m l416 cas?es,the ratio of the patients(HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+))was 59.38%;HBV-DNA quantitative in 1.00×103IU/m l-1.00×102IU/m l 140 cases,patients w ith HBsAg,HBcAb positive percentage is 71.43%;HBV-DNA quantitative＜1.00×102IU/m l 992 cases,95.67%HBsAg,HBeAg negativemode.ConclusionsThe fluorescence quantitative PCR method to detect HBV-DNA and ELISA qualitative detection of HBV surfacemarkerswere positively correlated,Most of the HBV-DNA copy number in themajority were HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+),Most of the HBV-DNA copy number less were no infectious virus carrier and the negative person.Fluorescence quantitative PCR can directly reflect the stateof hepatitisb virus(HBV)infection and viral load,PCR ismore conducive to judge the severity and infectious dis?eases,more conducive to guide clinicaldrug selection and curativeeffectobservation than ELISA.

Fluorescence quantitative PCR;Hepatitis B Virus DNA:ELISA

R446.61；R512.62

A

1008-4118（2014）02-0012-03

2014-01-15

10.3969/j.issn.1008-4118.2014.02.04