HPLC法測定泡囊中蛇床子素的含量

游國葉,熊大偉,李會娜

(1.信陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院,河南信陽464000;2.杭州民生藥業(yè)有限公司,浙江杭州311100)

HPLC法測定泡囊中蛇床子素的含量

游國葉1,熊大偉1,李會娜2

(1.信陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院,河南信陽464000;2.杭州民生藥業(yè)有限公司,浙江杭州311100)

目的 建立HPLC法測定非離子型表面活性劑泡囊中蛇床子素的含量測定方法。方法 采用HPLC法,采用Luna C18(5μm,250×4.6 mm)柱,以甲醇:水(85∶15)為流動相,流速1.0 m L/min,320 nm處檢測。結(jié)果蛇床子素在濃度0.4～50μg/m L范圍內(nèi),回歸方程為A=93807C+18201(R=0.9999),平均回收率為98.09%, RSD為0.03%。結(jié)論 本法快速、準(zhǔn)確,結(jié)果可靠,重現(xiàn)性好,適于蛇床子素制劑的質(zhì)量控制。

蛇床子素;非離子表面活性劑泡囊;含量測定;HPLC

蛇床子素(osthole或osthol)是從傘形科植物蛇床的干燥成熟果實蛇床子提取而得一種的強脂溶性化合物[1],又稱作甲氧基歐芹酚,其易溶于堿溶液及某些有機溶劑如甲醇、乙醇、氯仿等,不溶于水,口服生物利用度差,臨床具有抗菌、抗病毒、抗變態(tài)及補腎壯陽性激素樣作用,此外抗心律失常、治哮喘,對多種實驗?zāi)[瘤有明顯的抑制活性[1-2]。囊泡組成和結(jié)構(gòu)類似于脂質(zhì)體,主要由非離子型表面活性劑組成,藥物不易泄漏,比脂質(zhì)體穩(wěn)定,具有多種優(yōu)勢,其載體材料不含磷脂,避免了磷脂的氧化降解。近年來非離子表面活性劑泡囊包封技術(shù)已經(jīng)成為化學(xué)、藥學(xué)和生命科學(xué)研究領(lǐng)域中的熱點課題之一。我們實驗應(yīng)用薄膜分散法制備蛇床子素非離子表面活性劑泡囊,用高效液相色譜法測定含量,我們僅對含量測定作一闡述。

1 儀器和試藥

BP211D型半微量電子天平、Waters2695高效液相色譜儀,Waters2996紫外檢測器(美國Waters公司);100μL進樣針(江蘇漢邦科技有限公司)蛇床子素原料藥(上海純優(yōu)生物)、蛇床子素對照品(中國藥品生物制品檢定所)、分析級甲醇等。

2 試驗方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

2.1.1 波長選擇 取處方量蛇床子素標(biāo)準(zhǔn)品和不含藥的空白輔料混合物,分別置于25 m L容量瓶中,流動相溶解定容,備用。以流動相為空白,分別取上兩溶液進行紫外掃描,由試驗可知在320 nm處標(biāo)準(zhǔn)品有最大吸收峰,不含藥的空白輔料混合液無吸收,故選擇320 nm為最佳波長。掃描圖見圖1。

圖1 UV掃描圖

2.1.2 色譜條件 色譜柱:Luna C18(250×4.6 mm, 5μm);流動相:甲醇-水(85∶15);流速: 1.0 m L/min;檢測波長:320 nm;柱溫:室溫;進樣量: 20μL。

2.1.3 儲備液制備 取蛇床子素對照品適量,用流動相溶解稀釋至刻度準(zhǔn)確配制濃度為200μg/m L的蛇床子素對照品貯備液,備用。

2.1.4 干擾試驗 精密量取對照品貯備液0.5 m L置于10 m L容量瓶中,流動相定容至刻度,搖勻,即得10μg/m L的蛇床子素對照品溶液;另按處方量取不含藥的泡囊混懸液1 m L于100 m L的量瓶中,流動相定容,得相當(dāng)于含10μg/m L的蛇床子素空白泡囊;再取含蛇床子素泡囊混懸液同上步操作,即得10μg/m L的蛇床子素泡囊。

取上三種液體按2.1.2色譜條件進樣測定,色譜圖見圖2。

圖2 圖A:蛇床子素空白泡囊;圖B:蛇床子素對照品溶液;圖C:蛇床子素泡囊

試驗可見在該色譜條件下,蛇床子素能達到基線分離且峰形穩(wěn)定,保留時間約為8.5 min,非離子表面活性劑囊泡輔料及破乳劑不干擾蛇床子素的測定。

2.1.5 蛇床子素標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取蛇床子素對照品適量以流動相定容至刻度準(zhǔn)確配制200μg/m L的貯備液。分別精密吸取貯備液0.02、0.05、0.1、0.5、1、1.5、2.5 m L于置l0 m L容量瓶中,以甲醇定容至刻度,搖勻,得濃度分別為0.4、1、2、10、20、30、50μg/m L的系列溶液,進樣測定,以峰面積A對濃度C作線性回歸,得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:A= 93 807C+18 201(r=0.9999),即蛇床子素在濃度0.4～50μg/m L范圍內(nèi),峰面積與測定濃度呈良好的線性關(guān)系。見圖3:

圖3 蛇床子素線性標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.6 精密度試驗 精密量取蛇床子素儲備液適量配制濃度分別為2、20、50μg/m L的RES溶液3份,按2.1.2項下色譜條件進樣,每份樣品每隔4 h測定1次,共測5次;每份樣品每天測1次,連續(xù)測定5 d。分別計算RES的日內(nèi)及日間精密度。結(jié)果見表1。

表1 蛇床子素精密度(ˉx±s,n=5)

2.1.7 回收率測定 取已知含量的蛇床子素(99.9%)9份,每份約100 mg,精密稱定,分別置于已標(biāo)號的1～9的燒杯中,其中1、2、3號中加入蛇床子素對照品溶液50μg/m L,4、5、6中加入蛇床子素對照品溶液100μg/m L,7、8、9加入蛇床子素對照品溶液200μg/m L各10 m L,得到9份加樣回收供試液。按2.1.2項下色譜條件測定,結(jié)果見表2。

表2 回收率實驗

2.2 蛇床子素非離子表面活性劑泡囊含量測定

按照制備方法平行制備三批含藥制劑(編號1、2、3),分別精密吸取蛇床子素非離子表面活性劑泡囊1 m L置50 m L容量瓶中,以流動相定容至刻度,搖勻,過濾,進樣分析,記錄色譜圖并將峰面積帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線中計算主藥含量,結(jié)果如表。

表2.2 蛇床子素囊泡含量(n=3)

3 討論

通過文獻查閱和反復(fù)預(yù)實驗,在紫外掃描的基礎(chǔ)上確定了主藥的測定波長,最終選擇了甲醇-水(85∶15)為流動相,室溫條件下測定非離子表面活性劑泡囊中蛇床子素的體外含量分析方法,以HPLC測定蛇床子素的含量,試驗條件下線性關(guān)系良好,精密度、回收率均符合藥典規(guī)定,重現(xiàn)性好,方法學(xué)考查表明此法可用來進行含蛇床子素制劑的含量測定。

在摸索含量測定流動相時曾參考了相關(guān)文獻,對不同比例的甲醇-水,乙腈-水進行預(yù)試驗,結(jié)合所得色譜圖及實驗室現(xiàn)有條件我們最終根據(jù)既保證藥峰與雜質(zhì)峰分離度及理論塔板數(shù)符合藥典規(guī)定又保證經(jīng)濟實惠的原則選取85∶15的甲醇-水作為流動相,可達到理想的試驗結(jié)果。

[1]張澤君,張欣.蛇床子素化學(xué)成分及藥理學(xué)研究進展[J].黑龍江醫(yī)藥,2011,24(2):275-276.

[2]劉慧英,杜曉丹.骨筋丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高[J].黑龍江醫(yī)藥, 2013,26(2):310-312.

[責(zé)任編輯 李武營]

Determination of osthole in nonionic surfactant vesicles by HPLC

YOU Guoye1，XIONG Dawei1，LI Huina2
（1.Xinyang Vocational and Technical College School of medicinin Henan，Xinyang，Henan 464000，China；2. Hangzhou Minsheng Pharmaceutical Co.，Ltd.，Hangzhou，Zhejiang 311100，China）

Objective To determine the content of osthole for nonionic surfactant vesicles by HPLC.Methods Luna C18（5μm，250×4.6 mm）column was used，methanol：water（85∶15）as mobile phase，flow rate of 1.0m L/min，The wavelength for detection was 320 nm.Results The linear range of osthole was 0.4～50μg/m L，the regression equation was A=93807C+18201（R=0.9999），the average recovery was 98.09%，RSD 0.03%.Conclusion this method is rapid，accurate，reliable，reproducible，suitable for the quality control of osthole preparation.

Osthole；nonionic surfactant vesicles；determination of content；HPLC

R927.7

A

1672-7606(2014)04-0244-03

2014-08-12

河南省自然科學(xué)基金(052442004)。

葉國游(1980-),女,河南信陽人,碩士,講師,從事現(xiàn)代給藥系統(tǒng)和制劑新技術(shù)研究工作。