CK19、Galectin-3在甲狀腺良惡性腫瘤中的表達(dá)及其臨床意義

杜崗 馬艷波

甲狀腺瘤是最為常見的甲狀腺良性腫瘤，包括濾泡狀腺瘤和乳頭狀囊性腺瘤。甲狀腺癌是最為常見的甲狀腺惡性腫瘤，包括有源自于濾泡上皮細(xì)胞的乳頭狀癌、濾泡狀腺癌、未分化癌；源自于濾泡旁降鈣素分泌細(xì)胞（C細(xì)胞）的髓樣癌；未分化癌的預(yù)后最差[1]。甲狀腺腺瘤有引起甲亢和惡變的可能，應(yīng)該早期行患側(cè)甲狀腺大部分或者部分切除。甲狀腺癌的手術(shù)治療包括甲狀腺本身的手術(shù)切除以及頸部淋巴結(jié)的清掃，甲狀腺的手術(shù)切除范圍大小存在分歧，同時頸部淋巴結(jié)的清掃效果固然好，但是對患者的生活質(zhì)量影響比較大。術(shù)前對甲狀腺疾病良惡性質(zhì)的診斷決定著甲狀腺手術(shù)的方式，所以甲狀腺良惡性質(zhì)的誤診將對患者造成巨大的傷害。目前盡管對CK19、Galectin-3進(jìn)行了很多的研究，許多的作用環(huán)節(jié)仍然不夠明確，且在甲狀腺癌與甲狀腺腺瘤中CK19、Galectin-3陽性高表達(dá)所具有的鑒別診斷價值受到質(zhì)疑，為提高甲狀腺癌的診斷正確率、為鑒別甲狀腺良惡性腫瘤提供一種強(qiáng)有力的證據(jù)，這就是本課題研究的目的和意義所在。

1 材料與方法

1.1 組織標(biāo)本來源 病理標(biāo)本來自2012年1月-2013年12月山西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院普外科行外科手術(shù)治療且經(jīng)病理學(xué)證實的80例甲狀腺腫瘤患者，包括甲狀腺癌病理組織標(biāo)本40例、甲狀腺瘤病理組織標(biāo)本40例，術(shù)前均未行放化療。其中甲狀腺癌病理組織標(biāo)本男8例，女32例，年齡28~56歲，平均43.5歲；甲狀腺癌瘤病理組織標(biāo)本男5例，女35例，年齡19~38歲，平均26.3歲。病理組織標(biāo)本均取材于腫瘤原發(fā)灶，同時避開炎癥區(qū)以及壞死區(qū)。

1.2 試劑 兔抗人CK19購自于上海億欣生物科技有限公司、兔抗人Galectin-3購自于武漢博士德生物科技有限公司、鏈酶親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物（SABC）法免疫組織化學(xué)試劑盒購自于北京四柏生物科技有限責(zé)任公司、枸櫞酸鈉抗原修復(fù)液及聯(lián)苯二胺（DAB）顯色劑購自于中國福州邁新生物科技公司。

1.3 免疫組化技術(shù)檢測CK19、Galectin-3在甲狀腺良惡性組織中的陽性表達(dá) 具體步驟按照試劑盒的操作說明進(jìn)行，其中兔抗人CK19以1：80進(jìn)行稀釋、兔抗人Galectin-3同樣以1：80進(jìn)行稀釋；將制作完成病理標(biāo)本切片置于光鏡下（200倍）進(jìn)行觀察，抗原陽性表現(xiàn)為細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的顆粒；評價依據(jù)陽性表達(dá)細(xì)胞的染色強(qiáng)度和百分比分別計分，然后相加得到總積分，具體標(biāo)準(zhǔn)是：（1）根據(jù)陽性表達(dá)細(xì)胞著色強(qiáng)度評分：沒有染色計0，弱染色（很少量的著色細(xì)胞表現(xiàn)為棕黃、或著色細(xì)胞表現(xiàn)為淡黃）計1，強(qiáng)染色（著色細(xì)胞表現(xiàn)為棕黃）計3，中度染色（介于強(qiáng)染色與弱染色）計2；（2）依據(jù)陽性表達(dá)細(xì)胞百分比計分：低于5%計0，5%~25%計1，25%~50%計2，51%~75% 計 3，大于 75% 計 4；（3）總積分 =（1）+（2），0分為陰性（-）、l~2分為弱陽性（+）、3~5分為陽性（++）、6~7分為強(qiáng)陽性（+++）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 所有資料均用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。兩組間樣本率比較采用獨立樣本 字2檢驗（檢驗水準(zhǔn)α=0.0167）；采用靈敏度、特異度和診斷符合率來評價CK19、Galectin-3在鑒別診斷甲狀腺良惡性疾病中的價值，其中靈敏度=真陽性數(shù)/（真陽性數(shù)+假陰性數(shù)）×100%、特異度=真陰性數(shù)/（真陰性數(shù)+假陽性）、診斷符合率=（真陰性數(shù)+真陽性數(shù)）/總測定數(shù)×100%。

2 結(jié)果

2.1 CK19、Galectin-3陽性表達(dá)為細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒。細(xì)胞角蛋白-19（CK19）在40例甲狀腺癌組織中陽性表達(dá)的例數(shù)為40例，陽性率為100%；40例甲狀腺瘤組織中陽性表達(dá)的例數(shù)為15例，陽性率為37.50%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001），見表1。半乳糖凝集素-3（Galectin-3）在40例甲狀腺癌組織中陽性表達(dá)的例數(shù)為32例，陽性率為80.00%；40例甲狀腺瘤組織中陽性表達(dá)的例數(shù)為10例，陽性率為25.00%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001），見表2。

表1 CK19在甲狀腺癌組織與甲狀腺瘤組織中的陽性表達(dá)比較

表2 Galectin-3在甲狀腺癌組織與甲狀腺瘤組織中的陽性表達(dá)比較

2.2 CK19在鑒別診斷甲狀腺良惡性疾病中的靈敏度為100%、特異度為62.50%、診斷符合率為81.25%；Galectin-3在鑒別診斷甲狀腺良惡性疾病的靈敏度為80.00%、特異度為75.00%、診斷符合率為77.50%。CK19、Galectin-3在甲狀腺癌中的陽性表達(dá)率增強(qiáng)，是甲狀腺良惡性疾病進(jìn)行鑒別診斷的重要輔助指標(biāo)，聯(lián)合檢測可以提高甲狀腺癌的診斷率。

3 討論

在臨床病理工作中，甲狀腺良惡性病變僅僅憑借HE染色進(jìn)行診斷有很大的困難，同時由于甲狀腺癌起病隱匿以及生物學(xué)特性多變，現(xiàn)有的影像學(xué)、病理學(xué)、細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)等等均存在著很高的誤診可能性，因此尋找敏感性、特異性更強(qiáng)的腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行鑒別診斷將很有價值。

CK19是一種分子量約40 KD的低分子量角蛋白，存在于正常上皮以及各種上皮來源的腫瘤中，在單層上皮細(xì)胞和間皮、成人皮膚、肝細(xì)胞和角膜細(xì)胞中呈現(xiàn)陰性表達(dá)，在子宮上皮、羊膜上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞中呈現(xiàn)陽性表達(dá)[2]。CK19基因具有上皮細(xì)胞表達(dá)特異性，其符合上皮組織特異性標(biāo)志物的條件，不同大小的CK代表著不同類型的上皮標(biāo)志，理論上講，大多數(shù)的單層上皮細(xì)胞表達(dá)著低分子量的CK，CK19單克隆抗體分子量大小為40 KD，主要應(yīng)用于腺癌的診斷。

Cheung等[3]報告顯示：CK19彌漫性地存在于甲狀腺乳頭癌中（80.00%， 43/54），僅僅很少甲狀腺腺瘤為彌漫性染色（3%，1/35），也有一定比例的甲狀腺腺瘤呈局灶性染色（17% ，6/35）。Rapheal[4]研究發(fā)現(xiàn)：CK19是區(qū)分乳頭狀和甲狀腺良性病變的一個有用的標(biāo)記物。Baloch等[5]研究發(fā)現(xiàn)：CK19在具有乳頭狀癌核特征的區(qū)域呈現(xiàn)強(qiáng)陽性，在小于1 cm的隱匿性乳頭狀癌或者在甲狀腺微小轉(zhuǎn)移灶也呈現(xiàn)彌漫陽性，而在癌旁甲狀腺組織、腺瘤結(jié)節(jié)性甲狀腺腫乳頭狀增生呈現(xiàn)陰性或者小灶性陽性。因此CK19有助于PTC與甲狀腺組織、濾泡性腺瘤、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、乳頭狀增生的鑒別，同樣也可用于隱匿性乳頭狀癌與甲狀腺良性結(jié)節(jié)的鑒別，同樣也可以判斷甲狀腺組織內(nèi)是否存在微小轉(zhuǎn)移灶。

Galectin-3作為半乳糖凝集素家族中的一種蛋白，廣泛存在于人體的多種正常組織細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中，正常組織細(xì)胞如：巨噬細(xì)胞、血管上皮細(xì)胞、正常的胃腸道黏膜細(xì)胞；腫瘤細(xì)胞如胃腸道惡性腫瘤細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、垂體瘤細(xì)胞等[6-10]。

新近有學(xué)者研究報告顯示：Galectin-3mRNA在甲狀腺癌、良性病變、癌旁組織中的陽性表達(dá)率為78.12%、26.67%、27.78%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；但是在甲狀腺癌中，在甲狀腺乳頭癌、甲狀腺濾泡癌、甲狀腺髓樣癌的陽性表達(dá)率分別為78.26%、80.00%、75.00%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，也就是說在甲狀腺癌中，其表達(dá)與臨床病理分期無關(guān)；通過免疫組化技術(shù)進(jìn)行檢測，其結(jié)果與RT-PCR檢測結(jié)果基本一致[11]。也就是說，該因子在良惡性的鑒別診斷中具有一定的意義，但是在鑒別診斷甲狀腺癌的亞型中意義不大。

本研究通過檢測細(xì)胞角蛋白-19（CK19）、半乳糖凝集素-3（Galectin-3）在甲狀腺良惡性病變中的陽性表達(dá)情況，探討其在診斷甲狀腺癌以及在鑒別診斷甲狀腺良惡性病變中的意義。本實驗的研究結(jié)果顯示細(xì)胞角蛋白 -19（CK19）、半乳糖凝集素-3（Galectin-3）在甲狀腺癌組織中呈現(xiàn)高度的陽性表達(dá)，而在甲狀腺瘤組織中沒有表達(dá)或者呈現(xiàn)僅有微弱的表達(dá)，提示CK19、Galectin-3可能在甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著某種重要作用，推測這兩種因子有可能作為甲狀腺良惡性疾病鑒別診斷的重要輔助指標(biāo)。同時CK19、Galectin-3靈敏度、特異度、診斷符合率均較高，同樣提示可作為甲狀腺癌的輔助診斷指標(biāo)，聯(lián)合檢測可以提高甲狀腺癌的診斷率。

綜上所述，本實驗檢測了CK19、Galectin-3在甲狀腺良惡性腫瘤中的表達(dá)情況，探討兩者在甲狀腺癌診斷中的價值以及與良性病變的鑒別診斷價值。結(jié)合新近一些學(xué)者在甲狀腺腫瘤方面的研究成果，其研究成果顯示了CK19、Galectin-3在甲狀腺癌組織中也有高度的表達(dá)，與本實驗的結(jié)果無明顯不符。因此CK19、Galectin-3有望作為新的指標(biāo)診斷甲狀腺癌以及鑒別診斷甲狀腺良惡性組織，且聯(lián)合檢測可以提高診斷的準(zhǔn)確率。

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