三種血清學(xué)方法檢測牦牛布魯氏菌病的比較

李金平，郭會玲，薛曉波，薛 晶，吐爾洪·努爾，馬俊杰，易新萍*

（1.新疆維吾爾自治區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所，新疆 烏魯木齊 830063；2.新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所，新疆 烏魯木齊 830000；3.新疆畜牧科學(xué)院科技信息研究所，新疆 烏魯木齊 830000）

三種血清學(xué)方法檢測牦牛布魯氏菌病的比較

李金平1，郭會玲2，薛曉波3，薛 晶2，吐爾洪·努爾2，馬俊杰2，易新萍2*

（1.新疆維吾爾自治區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所，新疆 烏魯木齊 830063；2.新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所，新疆 烏魯木齊 830000；3.新疆畜牧科學(xué)院科技信息研究所，新疆 烏魯木齊 830000）

采集牦牛血清237份,用虎紅平板凝集試驗(RBPT)、試管凝集試驗(SAT)、間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(iELISA)進行布魯氏菌病抗體檢測。結(jié)果表明，RBPT和SAT與iELISA檢測法陽性符合率分別為64.3%和57.1%，但iELISA與SAT和RBPT檢測法總符合率達95%以上。本結(jié)果表明iELISA試劑盒檢測法快速、簡便，敏感性和特異性高于RBPT和SAT法。

布魯氏菌??；牦牛；iELISA；SAT；RBPT

布魯氏菌病（簡稱布?。┦怯刹剪斒暇鸬娜诵蠊不紓魅静。静乐匚：︷B(yǎng)殖業(yè)，并影響人類健康，具有重要的公共衛(wèi)生安全意義。我國農(nóng)業(yè)部將其列為二類動物傳染病，是動物引進和種畜檢疫中必檢的傳染病。對于布魯氏菌病的診斷，相對病原學(xué)方法而言，血清學(xué)方法因其具有快速、簡便、費用低等優(yōu)點，目前仍然是動物布魯氏菌病檢疫最常用的診斷方法。我國用于布病血清學(xué)診斷的國家標準方法主要有：虎紅平板凝集試驗(RBPT)、試管凝集試驗(SAT)和補體結(jié)合試驗(CFT)等傳統(tǒng)布魯氏菌抗體檢測技術(shù)。前兩種方法都會出現(xiàn)一定的假陽性及假陰性，特別是SAT，因其檢測結(jié)果不令人滿意，OIE于2000年宣布不主張將其用于國際貿(mào)易[1]。由于補體結(jié)合試驗(CFT)操作步驟繁瑣、耗時長、重復(fù)性差等缺點，該方法已很少應(yīng)用于日常檢疫中。酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、熒光偏振分析法(FPA)因具有操作簡單、結(jié)果確實等優(yōu)點，被國際獸醫(yī)局（OIE）推薦用于動物進出境布病的檢測；在一些發(fā)達國家，這些方法已廣泛應(yīng)用于牛布魯氏菌病的檢測中[2,3]。

但在夏秋季可能與其它各種家畜在同一草場交錯放牧，為感染布病提供了條件[4]。本實驗應(yīng)用RBPT、SAT、iELISA三種血清學(xué)診斷方法對新疆牦牛進行布病的檢測，并對檢測結(jié)果進行了比對分析，旨在為牦牛布病的血清學(xué)檢測提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑

虎紅平板凝集抗原、試管凝集抗原購自中國CDC疾病控制中心傳染病所。布魯氏菌病間接酶聯(lián)免疫吸附實驗（IELISA）抗體檢測試劑盒由哈爾濱平河生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.2 待檢血清

從新疆溫宿縣采集牦牛血樣237份，均未進行過布病疫苗接種。分離血清置于4℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3 方法

RBPT和SAT按GB／T 18646-2002方法操作。

布病iELISA快速診斷試劑盒操作方法按試劑盒說明書進行實驗。

2 結(jié) 果

2.1 牦牛布病的血清學(xué)檢測

用3種方法對237份牦牛血清樣品進行了檢測。 RBPT法檢出陽性11份，疑似陽性5份，陰性221份，陽性率為5.48%；采用SAT法檢出陽性10份，疑似陽性3份，陰性224份，陽性率為4.22%；采用iELISA檢出陽性14份，陰性223份，陽性率為5.91%（表1）。

表1 三種血清學(xué)方法對牦牛布病的檢測結(jié)果

2.2 iELISA與SAT、RBPT檢查結(jié)果的相關(guān)性

將14份iELISA陽性樣品再用SAT方法檢測，結(jié)果為8份陽性，2份疑似，4份陰性；223份iELISA陰性樣品經(jīng)SAT方法檢測，結(jié)果為2份陽性，1份疑似，220份陰性。14份iELISA陽性樣品經(jīng)RBPT檢測結(jié)果為9份陽性，5份陰性；223份iELISA陰性樣品經(jīng)RBPT檢測結(jié)果為4份陽性，1份疑似，218份陰性。該檢測結(jié)果表明，SAT與iELISA方法陽性符合率為57.1%，陰性符合率為98.6%，總符合率96.2%；RBPT與iELISA方法陽性符合率為64.3%，陰性符合率為97.3%，總符合率95.4%。以上數(shù)據(jù)中陽性率的計算均未計入疑似樣品數(shù)據(jù)。

2.3 iELISA與SAT、RBPT檢測牦牛布病的敏感性和特異性

根據(jù)以上檢測數(shù)據(jù)，按照敏感性=真陽性數(shù)／(真陽性數(shù)+假陰性數(shù))，特異性=真陰性數(shù)／（真陰性數(shù)+假陽性數(shù)）公式計算，SAT方法檢測牦牛布病敏感性為80.0%，特異性為98.2%。RBPT方法檢測牦牛布病敏感性為69.2%，特異性為97.7%。

3 討 論

布魯氏桿菌病的血清學(xué)檢測方法很多且各具特色，但都存在一定局限性。在我國現(xiàn)行的《動物布魯氏菌病診斷技術(shù)》(GB／T18646—2002)規(guī)定的血清學(xué)診斷技術(shù)中，大規(guī)模檢疫可用琥紅平板凝集試驗RBPT作篩選，SAT和CFT作綜合診斷。

RBT與iELISA檢測方法均為OIE指定的國際貿(mào)易中牛布魯氏菌病的檢測試驗，適合于牛布魯氏菌病的初篩[4]。本試驗結(jié)果顯示，RBPT、SAT與iELISA這3種檢測方法用于牦牛布魯氏血清抗體檢測時，RBPT特異性較高（97.7%），但敏感性最低（69.2%）。SAT檢測方法敏感性與特異性都高于RBPT，但與iELISA方法檢測的陽性符合率較低（57.1%）。國內(nèi)外應(yīng)用ELISA檢測牛布病的結(jié)果表明，ELISA和CFT的符合率較高，且陽性檢出率高于CFT和SAT[5,6]，而且iELISA方法相較前兩種方法操作更加精準，對結(jié)果的判定簡捷明了，從而避免了人為的誤判。從本試驗結(jié)果可以看出，iELISA方法的陽性檢出率最高。牛布魯氏菌抗體ELISA方法可克服SAT試驗中操作用時較長，需要準備大量的玻璃儀器，操作工作較繁重等缺點和不便，檢測結(jié)果的敏感性和特異性均高于SAT方法且與RBPT方法相一致[7]。

根據(jù)上述檢測結(jié)果，建議在對牦牛群進行布魯氏菌病血清學(xué)檢疫時，采用RBPT、SAT和ELISA相結(jié)合的監(jiān)測方法，以便對檢疫陽性牛早隔離、早處理，徹底凈化牛群，有效的防止布病的傳播。

[1]范偉興，鐘 旗，何倩倪，等．幾種布魯氏菌病血清學(xué)診斷方法的比較研究[J]．中國動物檢疫，2006，23(6)：31-33.

[2]Jimenez M P，Marin C，BlascoJ M．Effect of antibiotic therapy and strain 19 vaccination on the spread of Brucella melitensis within an infected dairy herd[J]．Prev Med，1991，（11）：17-24．

[3]OIE．Bovine brucellosis[0L]／OIE Terrestrial Manua1 2008：624-659．

[4]蒲敬偉，袁立崗，繆文革，等.野牦牛布魯氏茵病感染情況調(diào)查[J]．中國獸醫(yī)雜志，2007，43（8）：53-54.

[5]Mcgiven J A，Tuker J D，Perrett L L，eta1．Validation of FPA and cELISA for the detection of antibodies to Brucella abortus in cattle sera and comparison to SAT，CFT，and iELISA[J]．J Immunol Methods，2003，278(1-2)：171-178．

[6]劉淑平，郭支喜，王曾良，等．酶聯(lián)免疫吸附雙抗原夾心法檢測人畜布氏菌抗體的研究[J]．中國地方病防治雜志，2002，17(4)：214-216.

[7]刁彩霞,孫福先,桑學(xué)波.奶牛布魯氏菌病檢測的血清學(xué)方法比較[J]．中國畜牧獸醫(yī)文摘，2013，29 （4）：39,54.

Comparison of Yak Brucellosis Detection by SAT、RBPT and iELISA

LI Jin-ping1，GUO Hui-ling2，XUE Xiao-bo3，XUE Jing2，TUERHONG·Nuer2，YI Xin-ping2*
1.Animal Health Epidemic Prevention and Monitoring Station，Xinjiang Uygur Autonomous Region,Urumqi 830063，China；2.Veterinary Research Institute，Xinjiang Academy of Animal Sciences，Urumqi 830000，China; 3.Institute of Science and Technology Information,Xinjiang Academy of Animal Sciences，Urumqi 830000，China）

237 serum samples from yak were detected by Bengal test(RBPT)、tube agglutination test(SAT), indirect enzyme-linked immunosorbent assay (iELISA).Comparison with iELISA of diagnostic method for Brucellosis,the positive rate of RBPT and SAT were 64.3%and 57.1%,respectively.However,the total coincidence rate for Brucellosis were up to 95.0%with iELISA、RBPT and SAT.The results showed that iELISA kit of bovine Brucellosis had the advantages of simple、quick、high sensitivity and specificity,etc.The data suggested that it was an effective way for the serological test of brucellosis for yak by combination of SAT,RBPT and iELISA.

brucellosis；yak；iELISA；SAT;RBPT

S852．5+3

：A

：1003－6377（2014）03－0052-03

2014-03-27

自治區(qū)高技術(shù)研究發(fā)展項目（201311102）

李金平（1962-），高級獸醫(yī)師，從事動物布病監(jiān)測工作。

易新萍（1970-），女，副研究員，從事動物布病診斷技術(shù)與防治研究。