人乳頭瘤病毒分型聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)在宮頸病變篩查中的意義

朱園園，程志祥，李兵，趙婷婷，伍嬌

（1.安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院、安徽省立醫(yī)院分子實(shí)驗(yàn)室，合肥 230001；2.安徽省合肥市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科）

人乳頭瘤病毒分型聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)在宮頸病變篩查中的意義

朱園園1，程志祥2，李兵1，趙婷婷1，伍嬌1

（1.安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院、安徽省立醫(yī)院分子實(shí)驗(yàn)室，合肥 230001；2.安徽省合肥市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科）

目的探討人乳頭瘤病毒（HPV）分型聯(lián)合細(xì)胞學(xué)檢測(cè)在子宮頸病變篩查中的意義。方法收集疑似宮頸病變患者408例，分別進(jìn)行細(xì)胞學(xué)和HPV基因芯片分型檢測(cè)，了解各亞型HPV感染率及其與細(xì)胞學(xué)結(jié)果的相關(guān)性，判斷HPV感染與年齡的關(guān)系，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果在高危型感染中居于前3位的分別是HPV 16、58、52。單一高危型HPV感染率隨宮頸病變級(jí)別升高呈增加趨勢(shì)，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r= 0.879，P＜0.05）。高危型HPV感染率在年齡分布上呈兩端高的趨勢(shì)（＜25歲和＞50歲），但各年齡組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論HPV分型檢測(cè)宜聯(lián)合細(xì)胞學(xué)應(yīng)用于宮頸病變的篩查及臨床治療和隨訪。

宮頸疾??；α乳頭狀瘤病毒屬；細(xì)胞學(xué)技術(shù)

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，發(fā)病率僅次于乳腺癌而高居女性惡性腫瘤第二位。已有研究證實(shí)，子宮頸癌是由高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）持續(xù)感染引起的惡性腫瘤，是病因明確的腫瘤之一［1］。在HPV檢測(cè)上早期應(yīng)用較為廣泛的是經(jīng)美國(guó)FDA批準(zhǔn)的二代雜交捕獲（HC-2）試劑盒，它只能檢測(cè)13種高危亞型的有無(wú)，不能判斷具體型別。因此，本課題組采用新興的HPV分型檢測(cè)試劑盒，聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)對(duì)宮頸疾病患者進(jìn)行檢測(cè)，分析本地區(qū)HPV亞型的感染情況以及感染率與宮頸病變程度的相關(guān)性，為臨床上對(duì)于宮頸癌患病風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估和宮頸病變的診斷和治療提供依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

圖1 HPV陽(yáng)性患者各亞型分布

細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞基本特險(xiǎn)及抗月瘤效應(yīng)研究

圖1 體外培養(yǎng)的CIK細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(n=10)

圖3 體外培養(yǎng)21 d后的CIK細(xì)胞對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的殺傷活性

1.1 研究對(duì)象 選取安徽省立醫(yī)院婦科門(mén)診2012年8月至2012年11月收治宮頸疾病患者408例，年齡17～69歲，平均年齡（38.9±9.7）歲。排除孕婦及子宮切除術(shù)后患者。所有患者之前未進(jìn)行宮頸疾病物理或手術(shù)治療，取樣前3天未進(jìn)行陰道沖洗、塞藥或性生活，避開(kāi)月經(jīng)期。

1.2 樣本采集 由醫(yī)生先采集宮頸液基細(xì)胞學(xué)樣本，再采集病毒學(xué)樣本?？稍?4℃保存 2周或-20℃保存3個(gè)月，避免反復(fù)凍融。

1.3 研究方法 宮頸細(xì)胞學(xué)初診采用國(guó)際癌癥協(xié)會(huì)推薦的2001版TBS分類標(biāo)準(zhǔn)，分為：未見(jiàn)上皮內(nèi)病變細(xì)胞或惡性細(xì)胞（NILM）、無(wú)明確診斷意義的不典型鱗狀細(xì)胞（ASCUS）、鱗狀上皮內(nèi)低度病變（LSIL）、鱗狀上皮內(nèi)高度病變（HSIL）和鱗狀細(xì)胞癌（SCC）。腺上皮不正常為意義不明的不典型腺細(xì)胞（AGUS）和腺癌。HPV分型檢測(cè)試劑盒及導(dǎo)流雜交儀由廣東潮州凱普生物有限公司提供，可在一張低密度基因芯片上一次性快速檢出21種常見(jiàn)型別HPV的感染情況。包括15種高危型：HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68和6種低危型：HPV6，11，42，43，44，CP8304（81）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson檢驗(yàn)。對(duì)于多重感染者（除說(shuō)明外），各亞型的陽(yáng)性率重復(fù)計(jì)算。

2 結(jié)果

2.1 不同細(xì)胞學(xué)分組中HPV陽(yáng)性率比較 納入試驗(yàn)共408例患者。單一HR-HPV感染率隨宮頸病變級(jí)別升高呈增加趨勢(shì)（r=0.879，P＜0.05），各組間（除AGC組）均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。但是對(duì)于混合型感染，輕微病變組（ASCUS）感染率最高，達(dá)22.2%。而且混合感染22例僅有1例為低危＋低危，其他21例均含有高危型感染，見(jiàn)表1。

2.2 HPV分型檢測(cè)結(jié)果 408例患者有118例感染HR-HPV，陽(yáng)性率為28.9%；10例感染LR-HPV，感染率為2.5%。其中有18例為雙重感染，4例三重感染。未發(fā)現(xiàn)HPV 35高危亞型和HPV 43低危亞型。在高危型感染中居于前 3位的分別是HPV16、58、52，低危型感染中則以HPV 81和6多見(jiàn)，見(jiàn)圖1。

2.3 各年齡組高危型HPV感染情況 各年齡段間感染率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

表1 不同細(xì)胞學(xué)分組中HPV的感染情況［例（%）］

表2 408例患者各年齡組高危型HPV感染情況

3 討論

3.1 高危型HPV感染率與宮頸病變程度相關(guān)高危型HPV的持續(xù)感染被認(rèn)為是宮頸癌發(fā)生的主要病因［2-3］。本實(shí)驗(yàn)中ASCUS組有48.9%為單一高危型HPV感染，LSIL組檢出率為75.7%，而HSIL組檢出率為90%，說(shuō)明宮頸細(xì)胞學(xué)異常女性的高危型HPV感染率明顯高于正常女性，且隨著病變級(jí)別的遞增，感染率呈現(xiàn)增高趨勢(shì)。但是對(duì)于混合型感染，反而是輕微病變組（ASCUS）感染率最高。這也說(shuō)明病變級(jí)別越高，越表現(xiàn)為單一高危型感染，而混合感染并未加重病情。另外臨床上對(duì)于ASCUS的治療曾經(jīng)存在爭(zhēng)議，現(xiàn)在可以根據(jù)是否同時(shí)感染高危型HPV進(jìn)行不同的處理，既避免了“放虎歸山”又避免了過(guò)度治療。因此，HPV分型檢測(cè)對(duì)評(píng)估宮頸癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)、提示宮頸病變轉(zhuǎn)歸，以便及早干預(yù)，降低宮頸癌的發(fā)病率及死亡率具有重大意義［4］。

3.2 HPV感染亞型的分布特點(diǎn) 世界范圍內(nèi)，HPV 16導(dǎo)致55%～60%的宮頸癌，HPV 18約占10%～15%，余下的25%～35%則由HPV 31、33、45、52和58等另外10種所引起［5-6］。亞洲及中國(guó)以16、58、31、33、52、18型為主［7］。在本實(shí)驗(yàn)中，送檢宮頸疾病人群總體感染率為31.4%，其中高危型為23.8%，低危型為2.2%，混合型為5.4%。高危型中感染率居于前3位的是HPV 16、58、52，占高危型的66.4%，其次為53、18、33、31。與以往文獻(xiàn)相比［8］，主要感染型別基本類似，只是各地亞型的感染率高低有區(qū)別。另外本地檢出中國(guó)常見(jiàn)高危亞型HPV 53、低危亞型HPV 81的感染率略高于其他地區(qū)，分別占高危型的第4位和低危型的第1位。這可能與樣本來(lái)源及樣本量有關(guān)。這對(duì)于本地區(qū)的流行病學(xué)調(diào)查和針對(duì)性疫苗的研發(fā)具有重要意義。

3.3 HPV感染年齡的分布特點(diǎn) 本研究中各年齡段間感染率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是在兩端（≤25歲和≥51歲）感染率偏高，與有關(guān)報(bào)道相符［9-10］。推測(cè)第1個(gè)感染高峰可能與年輕女性性生活早而頻繁，免疫系統(tǒng)未能被致敏，易受HPV感染。大于50歲婦女出現(xiàn)的第2個(gè)感染高峰，也許是隨著年齡增長(zhǎng)其免疫力逐漸下降，容易導(dǎo)致HPV感染。但是近年來(lái)多數(shù)研究認(rèn)為，宮頸癌發(fā)病年齡年輕化很可能與早期感染病毒有關(guān)。由于我國(guó)疆域廣闊，且HPV感染受到多因素的影響（如過(guò)早性行為、性紊亂、早育、多產(chǎn)等），各地區(qū)HPV感染率及宮頸癌的發(fā)生率都有比較明顯的差異。

綜合本研究結(jié)果，認(rèn)為HPV分型可以用于宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，區(qū)分HPV的持續(xù)感染或一過(guò)性感染，避免過(guò)度治療。而與細(xì)胞學(xué)聯(lián)合進(jìn)行宮頸癌篩查時(shí)，則可彌補(bǔ)細(xì)胞學(xué)易漏診的不足，并對(duì)細(xì)胞學(xué)檢測(cè)為ASCUS結(jié)果進(jìn)行針對(duì)性處理，避免了重復(fù)細(xì)胞學(xué)檢測(cè)和陰道鏡下活檢的創(chuàng)傷。在美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)發(fā)布的對(duì)宮頸癌進(jìn)行預(yù)防和早期篩查的最新指南中，也明確指出了HPV檢測(cè)這項(xiàng)新技術(shù)的必要性及適用范圍，使得新的篩查方案更為簡(jiǎn)單，頻次更低，避免了陰道鏡濫用及潛在的風(fēng)險(xiǎn)。

（本文圖1見(jiàn)插圖3-1）

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The combination of Liquid based cytology and human papilloma virus testing for screening cervical lesions

ZHU Yuanyuan*，CHENG Zhiχiang，LI Bing，ZHAO Tingting，WU Jiao
（*Laboratory of Molecular Medicine，Anhui Provincial Hospital Affiliated to Anhui Medical University，Hefei230001，China）

ObjectiveTo evaluate the Liquid based cytology and human papilloma virus test for screening cervical lesions.Methods408 suspected patientswith cervical lesion from our gynecological outpatient service were collected.The liquid-based cytology and human papilloma virus（HPV）testwere used，and the correlation of subtypes of HPV infection with cytology and age were observed.ResultsThe top three HR-HPV genotypes were 16，58，52.The high-risk HPV infection rate increased with lesion grade（r=0.879，P＜0.05）.Conclusions The combination of HPV with liquid-based cytology testing should be applied in the screening，treatment and follow-up of cervical lesions.

Uterine cervical diseases；Alphapapillomavirus；Cytological techniques

R711.74；R446

A

10.3969／J.issn.1672-6790.2014.03.007

2013-06-24）

中華醫(yī)學(xué)會(huì)分子生物學(xué)臨床應(yīng)用研究專項(xiàng)資金（CAMB022010）

朱園園，主管技師，Email：zzyy82＠yeah.net