祛風止痙散治療支氣管哮喘的細胞免疫機制及相關因素分析

羅建江，王 欣，王 玲

(新疆醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院，新疆烏魯木齊830000)

哮喘具有發(fā)病急、引起患者呼吸困難、治療不及時可能危及生命等特點[1]，目前對于哮喘的西醫(yī)治療主要采用鼻噴糖皮質激素，如布地奈德鼻噴劑等，可以達到治標而不能治本的效果，并且患者的長期醫(yī)療費用負擔相對較重[2]。祖國醫(yī)學認為哮喘以肺脾腎虧虛為本，以風寒濕痰瘀為標，而中醫(yī)藥治療哮喘日益顯示出其巨大的優(yōu)勢。李風森等[3]研究顯示，使用祛風止痙散聯(lián)合激素治療哮喘具有較好的臨床效果，但其作用機制并不明確。本研究探討了祛風止痙散治療中度支氣管哮喘患者的治療效果、肺功能相關指標及 CD3+、CD4+、CD8+表達情況及相關性，對中醫(yī)治療哮喘的免疫學機制進行初步探討，現(xiàn)將研究結果報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2013年1—8月在新疆醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院門診及住院中度支氣管哮喘患者112例，均符合我國第四屆哮喘學術會議通過的《支氣管哮喘防治指南》中明確規(guī)定的診斷標準[4]。排除有其他嚴重并發(fā)癥者;對治療藥物過敏者;近期有重大精神創(chuàng)傷及重癥哮喘者;中途退出研究及需要剔除者;危重支氣管哮喘者。在患者及其家屬知情同意的前提下，按照隨機數(shù)字表將患者分為 2組:治療組50例，男31例，女19例;年齡16～54(35.7±8.6)歲;首發(fā)39例，再發(fā)11例。對照組62例，男40例，女22例;年齡14～62(34.19±8.23)歲;首發(fā)49例，再發(fā)13例。 2組患者年齡、性別、民族、婚姻狀況、文化程度、收入等指標比較均無顯著性差異(P均＞0.05)，具有可比性。

1.2 治療方法

1.2.1 對照組 規(guī)范化使用激素治療，布地奈德粉吸入劑1噴/次，1次/d，急性發(fā)作時可1～2噴;按需使用支氣管舒張劑茶堿緩釋片，1～2片/次，2次/d;不使用其他中藥及中成藥治療。

1.2.2 治療組 在對照組治療基礎上加服自制祛風止痙散(主要由蟬蛻、僵蠶、防風等組成，煎服，1劑/(次·d))，3個月為1個療程，服用1個療程。

1.3 檢測指標及方法

1.3.1 外周血淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+含量檢測 應用美國beckman coulter公司流式細胞儀，以淋巴細胞群設門，以相應的同型對照igg染色的細胞為陰性對照，每份樣品檢測1×105個細胞，使用cell quest軟件進行結果分析。在哮喘穩(wěn)定期，靜脈采血5 mL，乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)抗凝，取 100 μL 全血于 A、B、C、D 4 管，A 管加入FITC－CD3和 PE－CD4各10 μL，B管分別加入 FITCCD3和PE－CD8各10 μL，C管及D管分別加入同型對照各20 μL雙色標記單抗試劑，使用VORTX混勻，避光15 min，加紅細胞(RBC)溶解液1 mL，避光10 min，1000 g離心5 min，棄上清。磷酸鹽緩沖液(PBS，購自美國HYCLONE公司)，洗1次后，用0.5 mL PBS將細胞制成細胞懸液，100目篩網(wǎng)過濾，上機檢測。

1.3.2 肺功能指標檢測 使用日本福田公司的肺功能檢測儀，由專門的醫(yī)生對患者治療12個月后的肺功能指標包括呼氣峰流速(PEF)、第1秒用力呼氣容積(FEV1)、FEV1占用力肺活量(FVC)百分比(FEV1/FVC)進行檢測，評價 2組治療效果。

1.4 療效評價標準 由我院呼吸科3位副主任職稱以上醫(yī)師，按照中華醫(yī)學會呼吸病學分會哮喘學組制定的哮喘治療效果評價標準[5]對所有患者進行療效判定。顯效:患者咳嗽、反復喘息、胸悶、呼吸困難等癥狀消失;有效:患者咳嗽、反復喘息、胸悶、呼吸困難等癥狀減輕;無效:患者咳嗽、反復喘息、胸悶、呼吸困難等癥狀無改善或加重。顯效和有效計為總有效。

1.5 統(tǒng)計學處理 使用SPSS 20.0軟件包進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以率表示，差異比較使用卡方檢驗;計量資料以±s表示，2組之間差異比較使用t檢驗;相關性分析使用pearson相關分析。檢驗水準α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 2組1 a內(nèi)哮喘治療效果比較 治療組總有效率明顯高于對照組(P＜0.05)，見表1。

表1 2組1a內(nèi)哮喘治療效果比較 例(%)

2.2 2組1 a內(nèi)肺功能相關指標比較 治療后治療組FVC、FEV1、FEV1/FVC 均高于對照組(P均 ＜0.05)，見表2。

表2 2組1a內(nèi)肺功能相關指標比較±s)

表2 2組1a內(nèi)肺功能相關指標比較±s)

組別 n FVC/L FEV1/L FEV1/FVC PEF/(L/s)治療組 503.45 ±0.812.06 ±0.810.596 ±0.0815.01 ±1.11對照組 623.07 ±1.061.76 ±0.810.553 ±0.0894.03 ±0.93 t 6.0983.9982.6642.567 P 0.0040.0210.0090.058

2.3 2組外周血淋巴細胞亞群含量比較 治療后治療組CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+均高于對照組(P均 ＜0.05)，對照組CD8+高于治療組(P＜0.05)。見表3。

表3 2組外周血淋巴細胞亞群含量比較±s，%)

表3 2組外周血淋巴細胞亞群含量比較±s，%)

組別 n CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+對照組 6251.23 ±16.8637.13 ±11.7746.43 ±14.190.94±0.56治療組 5069.57 ±4.5263.81 ±9.4938.02±4.671.70 ±0.33 t 7.47412.9864.0138.599 P 0.0100.0010.0210.004

2.4 外周血淋巴細胞亞群比例與治療效果及肺功能之間的相關分析 治療效果(顯效=3，有效=2，無效=1)與CD3+、CD4+以及 CD4+/CD8+呈正相關(P＜0.05)，而與 CD8+呈負相關(P＜0.05)。FVC 與 CD3+、CD4+以及 CD4+/CD8+呈正相關(P＜0.05);FEV1與 CD3+、CD4+呈正相關(P＜0.05);PEF與 CD3+、CD4+以及 CD4+/CD8+呈正相關(P＜0.05)。見表4。

3 討論

隨著環(huán)境污染的增加，哮喘的發(fā)病率逐年增高，對于哮喘的治療目前西醫(yī)上以治標為準，長期使用糖皮質激素治療哮喘可導致患者對糖皮質激素的依賴性。研究證實，中西醫(yī)結合治療哮喘可以起到較好的治療效果，但對于其產(chǎn)生治療效果的機制不明確[6－8]。既往研究發(fā)現(xiàn)，CD3+、CD4+、CD8+在哮喘的發(fā)生及發(fā)展中起著重要的作用[9－11]。

表4 治療效果及肺功能相關指標與外周血淋巴細胞亞群比例相關分析

中醫(yī)認為支氣管哮喘的發(fā)病原因是宿痰內(nèi)伏，當患者因為壓力過大，外感六淫、過度疲倦勞累等時，就會容易發(fā)生支氣管哮喘。中醫(yī)中的主要癥狀為痰阻氣道、肺氣不降等，從而導致肺氣虛弱。并認為風邪為哮喘發(fā)病的最主要原因，因此支氣管哮喘的中醫(yī)治療以祛風為主[3]。本研究所用祛風止痙散方劑中含僵蠶、蟬衣等疏散風熱、息風止痙功效的中草藥成分，輔藥為地龍，可以散風邪、祛痰滯，達到氣通暢、喘自平，恢復肺的宣發(fā)肅降功能，從而改善哮喘的臨床癥狀及預后。本研究結果顯示，祛風止痙散聯(lián)合激素治療支氣管哮喘的顯效率明顯高于對照組，而且FVC、FEV1、FEV1/FVC等肺功能指標改善情況均優(yōu)于單純西醫(yī)治療，提示祛風止痙散聯(lián)合激素治療支氣管哮喘可以很好地緩解患者的癥狀及肺功能。

在哮喘患者中，CD3+細胞的過低表達意味著免疫耐受能力下降，從而變態(tài)反應的可能性就升高。本研究結果顯示，使用中醫(yī)祛風止痙散可以提高哮喘患者穩(wěn)定期CD3+細胞的含量，其可能的機制:祛風止痙散方中含地龍，地龍可以抑制部分免疫因子的分泌，從而達到抑制哮喘的作用[12]。王宏娟[13]報道，不同中醫(yī)分型的患者CD3+細胞的含量不同，肺腎氣虛型患者的CD3+細胞的比例低于肺氣兩虛型以及肺脾氣虛型，從而證實CD3+在中醫(yī)辨證治療中具有重要作用。

本研究還顯示，治療組的CD4+細胞表達高于對照組，CD8+細胞表達低于對照組。薛克營等[14]通過轉移免疫耐受的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞起到了降低變態(tài)反應嚴重程度的作用，提示免疫耐受的CD4+T細胞可以起到控制哮喘嚴重程度的作用。韓淑華等[15]報道，哮喘患者CD8+T細胞對中性粒細胞遞呈抗原產(chǎn)生免疫球蛋白有調(diào)節(jié)作用，而且參與哮喘發(fā)病，其高表達可能與抗原快遞呈遞有關。CD8+細胞的低表達可能與祛風止痙散的治療效果有關。

以上結果證實祛風止痙散治療哮喘可能是通過提高外周血中CD3+、CD4+的含量，以及降低CD8+細胞的含量而達到治療效果的。

治療效果及肺功能相關指標與CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+的相關分析顯示，治療效果與 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+含量呈正比，提示穩(wěn)定期內(nèi)外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+含量相對于治療效果差的哮喘患者而言較高，從而也提示CD3+、CD4+在哮喘發(fā)生及治療中具有重要作用。本研究結果還顯示，CD8+細胞含量與治療效果呈反比，同樣提示CD8+細胞在哮喘治療中具有重要意義。結合本次研究結果，有望將哮喘穩(wěn)定期內(nèi)外周血中的CD3+、CD4+、CD8+細胞的檢測結果作為哮喘治療及控制效果的檢測指標。本次研究還顯示，F(xiàn)VC與CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+指標呈正相關(P＜0.05);FEV1與 CD3+、CD4+呈正相關(P＜0.05);PEF 與CD3+、CD4+以及 CD4+/CD8+呈正相關(P＜0.05)。提示，CD3+、CD4+陽性淋巴細胞在中度哮喘患者肺功能恢復中具有重要作用。楊琳紅等[16]的研究證實，外周血CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+含量降低與肺功能的降低有明顯的相關性。

本研究顯示，祛風止痙散治療哮喘可能是通過提高外周血中CD3+、CD4+的含量，以及降低CD8+的含量而起到治療作用以及改善肺功能的效果。有望將哮喘穩(wěn)定期內(nèi)外周血中的CD3+、CD4+、CD8+的檢測結果作為哮喘治療及控制效果的檢測指標。

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