安乃近注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)方法的建立

黃 洋* 趙志龍

（1遼寧省錦州市食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧 錦州 121000；2遼寧省食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧 沈陽(yáng) 110023）

安乃近注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)方法的建立

黃 洋1* 趙志龍2

（1遼寧省錦州市食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧 錦州 121000；2遼寧省食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧 沈陽(yáng) 110023）

目的 建立安乃近注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。方法 按《中國(guó)藥典》2005年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，對(duì)不同廠家的樣品進(jìn)行了干擾試驗(yàn)和細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。結(jié)果 高濃度安乃近注射液對(duì)TAL與細(xì)菌內(nèi)毒素的凝集反應(yīng)有干擾作用，經(jīng)稀釋后可排除干擾。結(jié)論 本品不干擾濃度為稀釋至10 mg/mL可采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法進(jìn)行質(zhì)量控制。

安乃近注射液；細(xì)菌內(nèi)毒素；鱟試劑；干擾試驗(yàn)

安乃近注射液主要成分為安乃近，臨床主要用于肌內(nèi)注射，主治高熱時(shí)的解熱、偏頭痛、肌肉痛、關(guān)節(jié)痛、痛經(jīng)等，最大用量為500毫克/次。本品所用原、輔料藥均為化學(xué)合成，結(jié)構(gòu)清楚，為《中國(guó)藥典》或國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)收載的品種，生產(chǎn)過(guò)程中本品除可能污染細(xì)菌內(nèi)毒素外，無(wú)污染其他引起人體不良反應(yīng)雜質(zhì)的可能。《美國(guó)藥典》、《英國(guó)藥典》、《歐洲藥典》以及《日本藥局方》中均未收載此品種。根據(jù)《中國(guó)藥典》2005版二部附錄ⅪE中細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，擬定安乃近注射液限值，進(jìn)行方法學(xué)研究。為《中國(guó)藥典》2010版安乃近注射液增加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查提供了依據(jù)。提供樣品和有關(guān)資料的9個(gè)廠家分別為：天津藥業(yè)焦作有限公司、神威藥業(yè)有限公司、漯河市方匯藥業(yè)有限公司、廣西南寧百合藥業(yè)集團(tuán)有限公司、重慶迪康長(zhǎng)江制藥有限公司、西南藥業(yè)股份有限公司、江蘇漣水制藥有限公司、金陵藥業(yè)股份有限公司浙江天峰制藥廠和金陵藥業(yè)股份有限公司南京金陵制藥廠。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

HH-1型恒溫水浴鍋，ZH-2 型自動(dòng)漩渦混合器。

1.2 鱟試劑

①生產(chǎn)單位：湛江博康海洋生物有限公司，規(guī)格：0.1毫升/支，批號(hào)：0512150，靈敏度：0.125 EU/mL。②生產(chǎn)單位：湛江安度斯生物有限公司：規(guī)格：0.1毫升/支、批號(hào)：0706042、靈敏度：0.25 EU/mL。③生產(chǎn)單位：福州新北生化工業(yè)有限公司：規(guī)格：0.1毫升/支、批號(hào)：05111512、靈敏度：0.25 EU/mL。

1.3 細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品

中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：2006-5，效價(jià)：120 EU/支。

1.4 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水

湛江安度斯生物有限公司：批號(hào)：0706020、規(guī)格：2 mL、批號(hào)：0701190、規(guī)格：25 mL。

1.5 試驗(yàn)條件

溫度：21 ℃，相對(duì)濕度：40%。

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 供試品細(xì)茵內(nèi)毒素限值的確定

公式：L=K/M，M為500 mg/60 kg，K為5 EU/（kg·h）；計(jì)算限值L=0.6 EU/mL，擬定限值為：每1 mg中含細(xì)菌內(nèi)毒素的量應(yīng)＜0.6 EU。

2.2 干擾實(shí)驗(yàn)

按照《中國(guó)藥典》2005年版二部附錄ⅪE中細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法規(guī)定，使用2個(gè)廠家生產(chǎn)的鱟試劑，對(duì)安乃近注射液進(jìn)行了干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)和正式干擾試驗(yàn)。

通過(guò)由干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果可以初步判斷：使用安度斯鱟試劑江蘇漣水制藥有限公司樣品的20 mg/mL稀釋液對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無(wú)干擾作用，其他廠家樣品的20 mg/mL稀釋液均有干擾；所有廠家樣品的10 mg/mL對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查均無(wú)干擾作用。而使用海洋鱟試劑重慶迪康長(zhǎng)江制藥有限公司、金陵藥業(yè)股份有限公司、浙江天峰制藥廠和神威藥業(yè)有限公司的樣品稀釋至20 mg/mL對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無(wú)干擾作用，其余廠家的樣品在該濃度有干擾作用；稀釋至10 mg/mL的安乃近注射液，所有廠家樣品對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查均無(wú)干擾作用。所以選擇對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查均無(wú)干擾的10 mg/mL稀釋液進(jìn)行正式干擾試驗(yàn)。

正式干擾試驗(yàn)表明：確認(rèn)稀釋至10 mg/mL的安乃近注射液，對(duì)使用2個(gè)廠家的鱟試劑進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查均無(wú)干擾作用。正式干擾試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

按《中國(guó)藥典》2005年版二部附錄Ⅺ E中檢查法和擬定限值，對(duì)所有樣品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，結(jié)果各廠家的樣品均符合規(guī)定。檢查結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 安乃近注射液的干擾試 λ=0.25EU/mL

表2 樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果

3 結(jié) 論

①通過(guò)干擾試驗(yàn)，確定本品在稀釋至10 mg/mL時(shí)對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無(wú)干擾。②擬定本品的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)為：取本品，依法檢查，每1 mg安乃近中含內(nèi)毒素的量應(yīng)＜0.6 EU。按此標(biāo)準(zhǔn)對(duì)所有廠家提供的樣品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，結(jié)果均符合規(guī)定，說(shuō)明本方法可行。

R927

：B

：1671-8194（2014）06-0050-02

*通訊作者