使用低營養(yǎng)小鼠模型評(píng)價(jià)中藥右歸丸的補(bǔ)益功效?

周曉靚，樊賽軍，黃海舟，沈 秀，李麗紅，龍 偉，王德芝，周則衛(wèi)△

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所，天津 300192； 2.國家食品藥品監(jiān)督管理局保健食品審評(píng)中心， 北京 100070； 3.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193)

中藥右歸丸是明代著名醫(yī)學(xué)家張景岳為治療腎陽虛證設(shè)立的經(jīng)典方劑，記載于其著作《景岳全書》卷五十一。功能為溫補(bǔ)腎陽、填精止遺，適用于腎陽不足、命門火衰、腰膝酸冷、精神不振、畏寒怕冷、陽痿遺精、大便稀溏、尿頻而清等癥[1]，為后人所傳承應(yīng)用至今，是臨床治療常用的經(jīng)典代表方劑。本方劑由10味中藥配伍組成，所選藥材本身具有多種功效，現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)已將其用于治療多種病證，如腎虛宮冷、低血壓、白細(xì)胞減少癥、痛經(jīng)等[2]。

雖然右歸丸臨床運(yùn)用廣泛，但作為OTC藥品在日常保健中應(yīng)用尚顯不足，原因有多方面。本研究本著中醫(yī)藥“藥食同源”的宗旨，以玉米喂食法建立低營養(yǎng)動(dòng)物模型，結(jié)合已建立的食品BDI-GS評(píng)價(jià)體系[4,5]，對(duì)右歸丸的補(bǔ)益及治療功效進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，以期指導(dǎo)臨床正確用藥，并使其在日常保健中得到更廣泛合理的應(yīng)用。

1 材料

1.1 動(dòng)物

6～8周齡線性生長期健康的SPF級(jí)ICR雄性小白鼠32只，體質(zhì)量18～22 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，飼養(yǎng)環(huán)境為SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房使用許可證號(hào)SYXK(津)2010-0004)。

1.2 藥品、飼料與儀器

對(duì)照組飼料使用本地普通黃玉米粉。右歸丸藥品為河南省宛西制藥股份有限公司生產(chǎn)的水蜜丸(9 g/袋，9袋/盒，批號(hào)121008，國藥準(zhǔn)字Z41022170)。主要儀器：HITACHI 7180型全自動(dòng)生化分析儀(日本株式會(huì)社日立高新技術(shù))，OLYMPUS SZX7-型體視生物顯微鏡(日本東京OLYMPUS公司)，Anke TGL-16G型臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)，1/1000 Mettler PL20三型精密電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)。

2 方法

2.1 飼料的制備

以普通玉米粉制作飼料喂養(yǎng)對(duì)照組，并以普通玉米粉為原料分別摻入0.38%、0.75%和1.5%的右歸丸，制成不同混合飼料喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)各組飼料用1/100電子天平進(jìn)行準(zhǔn)確稱量后打粉并充分混勻，均配制800 g加入適量水制成條狀料，蒸制10～15 min放涼后存入冰箱備用。

2.2 動(dòng)物分組

取ICR小鼠按體質(zhì)量分成4組，每組 8只，分別為對(duì)照組及0.38%、0.75%、1.5%右歸丸給藥組。實(shí)驗(yàn)開始即換成相應(yīng)飼料，自由覓食及飲水，隔天稱取體質(zhì)量1次并添加水和料。于第12天稱取體質(zhì)量后眼球取血，脫臼處死解剖，完整剖取心、肺、胸腺、脾、胰腺、肝、雙腎、性腺精囊、股骨等9項(xiàng)臟器組織，裸目結(jié)合體視顯微鏡下觀察無組織病理學(xué)改變后稱取濕重，股骨為80℃烘干4 h后稱取干重[6]。血液經(jīng)6000 r/min離心5 min 2次，取上層血清用全自動(dòng)生化分析儀檢測生化指標(biāo)。

2.3 BDI-GS評(píng)價(jià)方法[4,5]

損益指數(shù)(BDI)=受試物實(shí)驗(yàn)指標(biāo)統(tǒng)計(jì)均值結(jié)果/對(duì)照組對(duì)應(yīng)指標(biāo)均值結(jié)果。通過損益指數(shù)(Benefit-Damage Index, BDI)直觀表示受試物對(duì)臟器組織的損益及程度。BDI又分為質(zhì)量BDI代表受試物補(bǔ)益功效評(píng)價(jià)指標(biāo)，以及系數(shù)BDI代表健康、治療功效及可能存在副效應(yīng)的評(píng)價(jià)指標(biāo)。以BDI值為依據(jù)，通過累計(jì)積分(GS General Score)，作為整體綜合補(bǔ)益及健康效應(yīng)評(píng)價(jià)指標(biāo)。累計(jì)GS值越大說明該受試物對(duì)機(jī)體的綜合功效越高。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，配對(duì)樣本采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 從體質(zhì)量變化評(píng)價(jià)補(bǔ)益效應(yīng)

圖1顯示，右歸丸實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)各組小鼠的體質(zhì)量圍繞初始體質(zhì)量波動(dòng)，0.38%和1.5%給藥組的體質(zhì)量與空白組小鼠有所增加，但增加并不明顯；而0.75%給藥組小鼠體質(zhì)量還有所降低，說明右歸丸對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠體質(zhì)量的影響輕微。

3.2 從質(zhì)量BDI及累計(jì)GSW評(píng)價(jià)補(bǔ)益效應(yīng)

表1顯示，3個(gè)劑量對(duì)所取9項(xiàng)臟器組織中的7項(xiàng)都具有一定的補(bǔ)益效應(yīng)，表明右歸丸的補(bǔ)益功效

是較均衡全面的，其中對(duì)于胸腺、肝臟、腎臟、性腺精囊和股骨質(zhì)量BDI 3個(gè)劑量組均在1.0以上；只有0.75%右歸丸組對(duì)心脾的質(zhì)量BDI<1.0，而其他2劑量組對(duì)心脾的質(zhì)量BDI均>1.0。呈現(xiàn)負(fù)效應(yīng)的組織肺臟和胰腺損傷也很輕，表現(xiàn)在質(zhì)量BDI值均在0.85以上；并且3個(gè)劑量藥物對(duì)9項(xiàng)臟器組織累加GSW均高于9.0。右歸丸對(duì)肝臟的補(bǔ)益效應(yīng)與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)。

圖1 小鼠體質(zhì)量變化趨勢圖

表1 右歸丸補(bǔ)益效應(yīng)評(píng)價(jià)(±s，n=8)

表1 右歸丸補(bǔ)益效應(yīng)評(píng)價(jià)(±s，n=8)

評(píng)價(jià)指標(biāo)(g) 對(duì)照組0.38%右歸丸組0.75%右歸丸組1.5 %右歸丸組質(zhì)量質(zhì)量BDI質(zhì)量 BDI質(zhì)量BDI體質(zhì)量19.46±1.28819.80±1.09919.29±1.63019.80±1.207心 臟 0.136±0.019 0.140±0.0231.030.133±0.014 0.98 0.157±0.0371.16肺 臟 0.163±0.0120.162±0.0230.990.150±0.0180.920.154±0.0100.95胸 腺 0.038±0.015 0.042±0.0141.110.043±0.007 1.12 0.044±0.0091.15脾 臟 0.066±0.0140.070±0.014 1.050.061±0.0110.920.076±0.017 1.15胰 腺0.078±0.021 0.069±0.014 0.88 0.067±0.0170.85 0.068±0.0180.87肝 臟 0.755±0.063 0.846±0.089*1.120.860±0.104*1.14 0.933±0.144**1.24腎 臟0.292±0.0220.316±0.0301.080.302±0.0431.040.326±0.0601.12性 腺0.478±0.108 0.511±0.0731.070.476±0.1091.000.500±0.0721.05股 骨 0.024±0.002 0.024±0.002 1.030.025±0.0021.050.024±0.0021.009項(xiàng)指標(biāo)GSW9.369.019.67

注：與對(duì)照組比較：*P<0.05，**P<0.01

3.3 右歸丸對(duì)各臟器組織健康、治療效應(yīng)評(píng)價(jià)

表2顯示，由于右歸丸對(duì)小鼠體質(zhì)量影響不大，故而系數(shù)BDI與質(zhì)量BDI的表現(xiàn)相近似。從局部而言，除對(duì)胰腺及肺呈現(xiàn)輕微負(fù)效應(yīng)，低劑量右歸丸對(duì)機(jī)體各個(gè)器官的健康均表現(xiàn)出一定的正效應(yīng)，表明其對(duì)各臟器補(bǔ)益功效較均衡。系數(shù)BDI累計(jì)GSI均大于9.0的基本值，表明服用右歸丸對(duì)機(jī)體健康綜合效應(yīng)是正面有益的，具有一定的綜合保健功效。在本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的劑量范圍內(nèi)，右歸丸對(duì)機(jī)體整體的健康效應(yīng)為1.5%>0.38%>0.75%。

表2 右歸丸健康效應(yīng)評(píng)價(jià)(±s，n=8)

表2 右歸丸健康效應(yīng)評(píng)價(jià)(±s，n=8)

評(píng)價(jià)指標(biāo)(mg/g) 對(duì)照組0.38%右歸丸組0.75%右歸丸組1.5 %右歸丸組系數(shù)系數(shù)BDI系數(shù)BDI系數(shù)BDI心 臟 6.962±0.781 7.050±0.8761.016.923±0.573 0.99 7.872±1.4771.13肺 臟 8.402±0.6028.176±1.0410.977.768±0.6200.927.809±0.5150.93胸 腺 1.962±0.772 2.120±0.6181.082.227±0.410 1.13 2.218±0.4541.13脾 臟 3.398±0.5963.525±0.586 1.043.164±0.5260.933.831±0.727 1.13胰 腺3.994±0.853 3.450±0.592 0.86 3.434±0.7010.86 3.535±0.8460.89肝 臟 38.88±3.482 42.81±4.8941.1044.52±4.657*1.15 47.04±5.693**1.21腎 臟15.04±1.18415.97±0.9741.0615.64±1.3381.04 16.43±2.4091.09性 腺24.44±4.672 25.76±3.180 1.0524.53±4.2391.0025.25±3.2781.03股 骨 1.215±0.071 1.225±0.091 1.011.294±0.1031.071.196±0.1140.989項(xiàng)指標(biāo)GSI9.199.109.52

注：與對(duì)照組比較：*P<0.05，**P<0.01

3.4 右歸丸血清生化指標(biāo)的評(píng)價(jià)

表3顯示，3組右歸丸對(duì)肝功能血清標(biāo)志物轉(zhuǎn)氨酶(ALT、AST)的影響輕微，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。代表腎臟健康的尿素氮(BUN)亦各有升降，中劑量尿素氮明顯最低，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；而血肌酐(CREA)各有升降，與空白對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。低劑量右歸丸對(duì)血糖(GLU)與甘油三脂(TG)影響不大，而其他2組均有升高，說明中劑量右歸丸具有顯著升高血糖的作用。值得特別注意的是，高劑量組升高甘油三酯(TG)與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。3組右歸丸對(duì)膽固醇(CHOI)均無明顯影響。此外，血清蛋白指標(biāo)(TP、ALB、GLOB)3組右歸丸各有升降；中劑量白蛋白(ALB)顯著升高(P<0.01)，而3個(gè)劑量右歸丸的球蛋白(GLOB)均有下降，中劑量呈顯著性降低(P<0.05)。

表3 右歸丸的血液生化指標(biāo)評(píng)價(jià)(±s, n=8)

表3 右歸丸的血液生化指標(biāo)評(píng)價(jià)(±s, n=8)

指 標(biāo) 對(duì)照組0.38%右歸丸組0.75%右歸丸組1.5%右歸丸組ALT(U·L-1)240.000±5.03324.880±8.87127.000±7.01025.860±5.242AST(U·L-1)131.300±13.310133.900±22.550135.300±22.980 139.100±20.280TP(g·L-1)35.490±6.864 35.830±4.98935.230±4.511 39.190±4.139ALB(g·L-1)31.000±2.33030.130±2.64234.880±2.588** 32.430±2.573GLOB(g·L-1)8.983±2.8708.667±5.291 3.720±3.486*6.813±3.625GLU(mmol·L-1) 4.338±0.5484.763±1.6117.813±1.247**5.850±3.076BUN(mmol·L-1) 3.713±0.6363.888±1.218 2.875±0.453**3.829±0.706CREA(umol·L-1)18.570±6.63023.000±7.98216.000±3.47219.430±11.300CHOI(mg·dL-1)2.966±0.4592.814±0.3712.961±1.0452.813±1.116TG(mmol·L-1)1.910±0.2392.164±0.272 2.090±0.5022.308±0.387*

注：與對(duì)照組比較：*P<0.05，**P<0.01

4 討論

右歸丸推薦成人服用劑量每次1袋(9 g)水蜜丸，每天1～2袋，但在藥品包裝上缺乏用藥指導(dǎo)及飲食宜忌事項(xiàng)。本研究認(rèn)為，方中使用的中藥附子為辛溫大熱之味，強(qiáng)悍的通行之性具有掣上掣下之功，可以通行十二經(jīng)脈；附子易產(chǎn)生一定的毒副作用，因此飲食上辛苦、酸澀法當(dāng)忌之。服藥期間飲食清淡，對(duì)藥效的正常發(fā)揮和減少不必要的副作用是十分有益的。由于右歸丸具有明確的補(bǔ)肝溫陽作用，肝陽上亢的高血壓人群應(yīng)當(dāng)慎用；同時(shí)，右歸丸對(duì)脾腎陽虛的泄瀉人群有很好的實(shí)大便止瀉功效，因而對(duì)于腸燥便秘的人群以及便秘合并高血壓的人群當(dāng)禁用。另外，夏令時(shí)節(jié)陽氣很盛，體質(zhì)特別虛寒之人為調(diào)節(jié)體質(zhì)、冬病夏治可以應(yīng)用，普通人群夏季容易引起中醫(yī)上火之癥當(dāng)慎用。雖然有言右歸丸源于金匱腎氣丸的改進(jìn)，但其功用、療效遠(yuǎn)非腎氣丸可比，運(yùn)用得當(dāng)可起沉疴，其適用人群不應(yīng)該僅限于右手脈弱之陽氣虛衰人群。

本實(shí)驗(yàn)研究表明，右歸丸組與對(duì)照組小鼠的腎臟、性腺精囊在臟器質(zhì)量和系數(shù)上均有所增加，提示右歸丸對(duì)于提高腎臟生理功能、減少尿蛋白、逆轉(zhuǎn)腎衰進(jìn)程可能會(huì)有一定的功效。實(shí)驗(yàn)期間給藥組小鼠表現(xiàn)十分活躍，提示右歸丸有補(bǔ)益陽氣、提振精神的作用。3個(gè)給藥劑量組的胸腺質(zhì)量和系數(shù)均有所增加，同時(shí)低、高劑量具有一定健脾功效，體現(xiàn)了脾虛則氣虛的生理機(jī)制及補(bǔ)脾則益氣的中醫(yī)理法方藥，表明右歸丸具有一定的增強(qiáng)機(jī)體免疫的功效。右歸丸組小鼠的股骨相對(duì)于空白對(duì)照組，其臟器質(zhì)量和系數(shù)均無損傷甚至有所增加，提示該藥對(duì)于骨質(zhì)疏松癥可能具有一定的對(duì)抗及保健作用，與相關(guān)的臨床報(bào)道一致[7,8]。右歸丸能夠升高機(jī)體血糖水平，與對(duì)胰腺有輕度負(fù)面影響臟器水平的評(píng)價(jià)結(jié)果是一致的，表明右歸丸對(duì)糖尿病人是不適用的。右歸丸輕微升高血脂(TG)水平，表明高血脂人群應(yīng)當(dāng)慎用。

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