飲用水中的總大腸菌群檢測(cè)

劉鳳偉

摘 要：大腸桿菌是腸道的正常寄生菌，能合成對(duì)人體有利的維生素B、維生素K，但當(dāng)機(jī)體抵抗力下降或大腸桿菌侵入腸外組織或器官時(shí)，則會(huì)成為條件致病菌，可引起腸外感染[1]。因而GB5749-2006《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，每任意100mL水樣不得檢出總大腸菌群。本論文通過(guò)濾膜法實(shí)驗(yàn)檢測(cè)自來(lái)水中的總大腸菌群數(shù)是否符合國(guó)家飲用水標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞：濾膜法；品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基；大腸桿菌

引言

飲水水質(zhì)的好壞直接關(guān)系到人民的身體健康，也是反映一個(gè)國(guó)家文明程度的重要指標(biāo)之一[2]?！渡铒嬘盟l(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（TJ20-76）和《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB5749-85）中規(guī)定細(xì)菌總數(shù)不超過(guò)100個(gè)/mL，總大腸菌群不超過(guò)3個(gè)/L；而2001年《生活飲用水水質(zhì)衛(wèi)生規(guī)范》要求更加嚴(yán)格，規(guī)定飲用水中總大腸菌群每100mL水樣不得檢出。國(guó)內(nèi)檢測(cè)總大腸菌群的方法主要是多管發(fā)酵法和濾膜法。多管發(fā)酵法可適用于各種水樣，但操作繁瑣，所需時(shí)間較長(zhǎng)，而濾膜法主要適用于雜質(zhì)較少的水樣，操作簡(jiǎn)單快捷。本論文即采用濾膜法檢驗(yàn)自來(lái)水中總大腸菌群數(shù)，用濾膜過(guò)濾器過(guò)濾水樣，將水中含有的細(xì)菌截留在濾膜上，然后將濾膜放在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，計(jì)數(shù)大腸菌群菌落數(shù)，算出每100mL水樣中含有的大腸菌群數(shù)。從而判定自來(lái)水中的大腸菌群數(shù)是否符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

1.材料與方法

1.1該實(shí)驗(yàn)于2013年7月2日、3日在大連經(jīng)濟(jì)技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)自來(lái)水公司水質(zhì)管理中心微生物室完成。

1.2材料

1.2.1實(shí)驗(yàn)材料 自來(lái)水（灣里高區(qū)水、灣里低區(qū)水）及其原水

1.2.2實(shí)驗(yàn)試劑 品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基

1.2.3實(shí)驗(yàn)儀器 培養(yǎng)箱：36℃±1℃、冰箱0℃-4℃、天平、藥匙、平皿：直徑90mm、刻度吸管、錐形瓶、量筒、玻璃棒、酒精燈、濾器、孔徑0.45μm濾膜、抽濾設(shè)備、無(wú)齒鑷子。

1.3檢驗(yàn)步驟

（1）將酒精棉球點(diǎn)燃，用其火焰滅菌抽濾器，用已在酒精燈上灼燒過(guò)并降至室溫的鑷子夾取已滅菌濾膜的邊緣部分，放在已用點(diǎn)燃的酒精棉火焰滅菌過(guò)，并已降至室溫的濾床上，將濾器固定好，并向?yàn)V器中注入100mL水樣，打開(kāi)抽濾閥門(mén)，在-5.07×104Pa（負(fù)0.5大氣壓）下抽濾水樣。

（2）水樣濾完后，再繼續(xù)抽氣約5秒鐘，關(guān)上濾器閥門(mén)，將濾器取下來(lái)，用在酒精燈上灼燒過(guò)且溫度已降至室溫的鑷子夾取濾膜邊緣部分，移放到品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，使濾膜截留細(xì)菌面朝上，濾膜與培養(yǎng)基完全貼緊，中間沒(méi)有氣泡，然后倒置平皿，放入37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h±2h。

2.結(jié)果觀察與分析

2.1結(jié)果

水樣菌落照片及相應(yīng)數(shù)據(jù)表

（3）結(jié)果計(jì)算。100mL水樣中的總大腸菌群菌落數(shù)=數(shù)出的總大腸菌群菌落數(shù)×100/過(guò)濾的水樣體積（mL），即自來(lái)水中每100mL水樣中未檢出大腸菌群。

2.2分析。檢測(cè)結(jié)果表明，兩個(gè)原水樣中均存在大腸菌群，而數(shù)個(gè)自來(lái)水水樣中都沒(méi)有大腸菌群生長(zhǎng)，說(shuō)明對(duì)原水的處理效果很好，自來(lái)水沒(méi)有受到污染，符合國(guó)家飲用水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)。

3、討論

因?yàn)閿?shù)個(gè)自來(lái)水水樣中沒(méi)有大腸菌群及其疑似菌生長(zhǎng)，所以不需要做革蘭氏染色與鏡檢檢測(cè)。

試驗(yàn)中需要注意：①鑷子每次夾取濾膜前必須滅菌，以防感染雜菌。②培養(yǎng)基不能過(guò)久保存，若培養(yǎng)基由淡粉色變?yōu)樯罴t色，則不能再用。③將濾膜的細(xì)菌截留面朝上，放到品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，濾膜與培養(yǎng)基之間不要留有空隙。④配制品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基時(shí)要注意PH值的調(diào)節(jié)，一定要將其PH值調(diào)至7.2-7.4之間。⑤分裝品紅亞硫酸鈉儲(chǔ)備培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)每瓶裝入固定量的儲(chǔ)備培養(yǎng)基（例如200mL），因?yàn)殇伷矫髸r(shí)，要根據(jù)品紅亞硫酸鈉儲(chǔ)備培養(yǎng)基的量，計(jì)算出應(yīng)加入的無(wú)水亞硫酸鈉與堿性品紅乙醇溶液的量。⑥濾膜放入品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基后，必須先倒置平皿，再放入恒溫培養(yǎng)箱中。因?yàn)檫@樣可以防止冷凝水從蓋上滴落，引起菌落蔓延，使該處菌落生長(zhǎng)不均，也可以防止水分蒸發(fā)，使得培養(yǎng)基內(nèi)水分過(guò)少而影響菌落生長(zhǎng)。

4、結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)將自來(lái)水（灣里高區(qū)水、灣里低區(qū)水）分別進(jìn)行平行樣檢測(cè)（見(jiàn)圖一、表一與圖二、表二），均未檢出大腸菌群，而100mL原水中有平均29個(gè)大腸菌群生長(zhǎng)（見(jiàn)圖三、表三與圖四、表四），且圖三、表三與圖四、表四是將原水與自來(lái)水（灣里高區(qū)水、灣里低區(qū)水）放在同一個(gè)品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，都只有原水長(zhǎng)出大腸菌，說(shuō)明培養(yǎng)基及操作手法均沒(méi)有問(wèn)題，結(jié)果可信，自來(lái)水中的總大腸菌群數(shù)符合國(guó)家飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。（作者單位：大連經(jīng)濟(jì)技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)自來(lái)水公司水質(zhì)管理中心）

參考文獻(xiàn)：

[1] 李素玉 主編.環(huán)境微生物分類與檢測(cè)技術(shù).北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.8

[2] 彭文啟 張祥偉等.現(xiàn)代水環(huán)境質(zhì)量評(píng)價(jià)理論與方法.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005

[3] 金銀龍 鄂學(xué)禮等.GB5749-2006《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》. 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社出版，2007.5