觀察不同時機運用中醫(yī)補益法協(xié)同化療抗結(jié)腸癌的有效性以及可能的作用機制

崔娜妮 侯瑤 佘俐瑤

【摘要】目的：探究在不同時機運用中醫(yī)補益法協(xié)同化療抗結(jié)腸癌的臨床效果以及其可能的作用機制。方法：對80只裸鼠實施人結(jié)腸癌LoVo細胞移植手術(shù)，建立裸鼠結(jié)腸癌模型。經(jīng)過8天的培養(yǎng)成瘤后，隨機選取移植成功的60只結(jié)腸癌裸鼠，并隨機分為六個不同的組別：模型組，中藥組，化療組，提前干預(yù)組，同步干預(yù)組，延后干預(yù)組。在16~23天給予中藥組補益湯方劑的中藥治療；給予化療組，提前干預(yù)組，同步干預(yù)組，延后干預(yù)組5-Fu腹內(nèi)注射的化療；另外，在8~15天給予提前干預(yù)組補益湯方劑的中藥治療，在16~23天給予同步干預(yù)組化療的同時，給予中藥治療，在24~31天給予延后干預(yù)組中藥治療；同時給予模型組腹內(nèi)注射生理鹽水。用藥結(jié)束后，在第32天，選取所有小組的裸鼠各一半，摘除眼球法處死，分理出體內(nèi)的結(jié)腸腫瘤，測量每組裸鼠腫瘤的平均體積，平均體重，腫瘤組織經(jīng)處理后做免疫組織化學(xué)實驗，觀測其相關(guān)凋亡蛋白Bcl-2和Bax的光密度。剩余的裸鼠繼續(xù)觀察其生命體征，記錄其平均生存期。結(jié)果：腫瘤的平均體積結(jié)果顯示，除了中藥組外，其他組的平均體積都明顯小于模型組，而且有提前干預(yù)組和延后干預(yù)組要明顯小于化療組，p<0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；腫瘤的平均重量比較顯示，除了中藥組外，其他組的平均重量都小于模型組，延后干預(yù)組要明顯小于化療組；各組的生存期比較顯示，除中藥組外，其他各組生存期都長于模型組，以延后干預(yù)組和提前干預(yù)組為最長；對于相關(guān)凋亡蛋白光密度的測定，除中藥組外，其他組的都與模型組有差別，提前干預(yù)組和延后干預(yù)組與化療組和同步干預(yù)組的差異明顯，p<0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：在以化療作為結(jié)腸癌的主要治療手段時，以中醫(yī)補益法在化療前后進行協(xié)同治療能夠抑制腫瘤發(fā)展，延長生存期，其機制可能與中藥治療提高了腫瘤細胞對化療的敏感性，促進細胞凋亡有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】不同時機；醫(yī)補益法；化療；協(xié)同；結(jié)腸癌

【中圖分類號】R730.53 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949(2014)06-0015-01

結(jié)腸癌是一種發(fā)病率很高的疾病，目前其發(fā)病人數(shù)在不斷的增加中，化療作為其主要的治療方式，雖然對癌細胞的擴散有抑制作用，但是其因骨髓抑制，消化道反應(yīng)等給患者帶來的巨大痛苦，往往使治療難以繼續(xù)，因此，其治療方式正在向生物治療，中醫(yī)藥治療方面轉(zhuǎn)變，中醫(yī)補益法正以其減少并發(fā)癥，提高療效，延長患者生存期的優(yōu)越性登上國際舞臺。本文就不同時機中醫(yī)補益法協(xié)同化療抗結(jié)腸癌的效果和作用機制作出探討。

1 一般資料和方法

1.1 裸鼠模型的資料：選取實驗室喂養(yǎng)的80只健康裸鼠，體重為20~25g，平均體重為22.1±0.4g。裸鼠周齡為4~6周，平均周齡為5.1±0.3周。進行結(jié)腸癌LoVo細胞移植后的第8天。隨機選取腫瘤成型好，日常狀態(tài)好的60只裸鼠進行分組實驗。

1.2 方法

1.2.1 結(jié)腸癌LoVo細胞移植建模方法：結(jié)腸癌LoVo細胞系在含有10%胎牛血清的F-12K培養(yǎng)基中培養(yǎng)，至于含5%體積分數(shù)的CO2，溫度為37℃，濕度達到飽和的培養(yǎng)箱中進行隔天換液傳代培養(yǎng)。將處于對數(shù)期的結(jié)腸癌LoVo細胞以0.25%胰酶消化離心后，用生理鹽水稀釋為1×107/ml的溶液，用注射器吸取0.2ml于裸鼠的左側(cè)腋下進行接種。

1.2.2 分組實驗方法：將60只裸鼠隨機分為6個小組：模型組，中藥組，化療組，提前干預(yù)組，同步干預(yù)組，延后干預(yù)組。

模型組給藥：移植后的16~23天以0.15ml/10g的生理鹽水進行進行腹腔灌注。

中藥組給藥：中藥組給予補益湯方劑，生曬參，生黃芪，茯苓，豬苓30g，女貞子，枸杞子15g，先用10倍于藥量的純化水冷浸1h，再用武火煮沸后改文火煮沸1h，用8層的紗布過濾8次后，收集濾液，將濾渣再加8倍水文火煎半個小時，濾過，合并兩次的濾液，濃縮為0.15ml/10g的方劑。在第16~23天，每天以0.15ml/10g的量對裸鼠灌服。

化療組：第16~23天，以0.25mg/10g的5-Fu生理鹽水稀釋液對裸鼠實施腹腔灌注。

提前干預(yù)組：在8~15天給予裸鼠中藥方劑灌注，16~23天給予化療。

同步干預(yù)組：在16~23天同時給予中藥方劑治療和化療。

延后干預(yù)組：16~23天給予化療后在24~31天給予中藥治療。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)方法：本次實驗的數(shù)據(jù)均應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS17.0進行處理、分析，計量資料（體重，周齡等）以X±s表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用χ2檢驗，其中p<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組別平均腫瘤體積的比較：平均體積以腫瘤的平均直徑為代表。從表1可以看出，提前干預(yù)組和延后干預(yù)組的腫瘤平均體積為472.7±6.2和468.5±5.3mm，明顯小于模型組和化療組，p<0.05,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 不同組別平均腫瘤體積的比較

組別 平均體積（mm）模型組 531.6±10.9中藥組 519.2±8.7化療組 500.1±7.3提前干預(yù)組 472.7±6.2同步干預(yù)組 498.6±7.6延后干預(yù)組 468.5±5.32.2 不同組別腫瘤平均重量和腫瘤抑制率的比較：除了中藥組外，其他組的腫瘤平均重量都小于模型組，延后干預(yù)組的腫瘤平均重量為0.49±0.02g，明顯小于模型組和化療組，p<0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。如表2所示。

表2 不同組別腫瘤平均重量和腫瘤抑制率對比

組別 平均重量（g） 抑制率（%）模型組 0.61±0.02 中藥組 0.59±0.03 3.28化療組 0.54±0.01 11.48提前干預(yù)組 0.51±0.04 16.39同步干預(yù)組 0.53±0.07 13.11延后干預(yù)組 0.49±0.02 19.672.3 各組生存期的對比：除中藥組外，其他各組的生存期都明顯長于模型組，以提前干預(yù)組和延后干預(yù)組生存期為最長。P<0.05,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。見表3。

表3 各組生存期的對比

組別 生存期（d）模型組 87.3±9.2中藥組 93.9±10.5化療組 107.4±11.8提前干預(yù)組 137.8±13.1同步干預(yù)組 110.6±10.2延后干預(yù)組 140.2±12.72.4 各組相關(guān)凋亡蛋白的光密度對比：各組相關(guān)凋亡蛋白Bax和Bcl-2的光密度對比情況如表4所示。Bax蛋白是促進細胞凋亡蛋白，呈遞增趨勢，Bcl-2蛋白是抑制細胞凋亡蛋白，呈遞減趨勢。

表4各組相關(guān)凋亡蛋白的光密度對比

分組 Bax Bcl-2模型組 0.193±0.007 0.279±0.006中藥組 0.204±0.009 0.261±0.004化療組 0.211±0.011 0.242±0.011提前干預(yù)組 0.233±0.014 0.219±0.008同步干預(yù)組 0.220±0.007 0.226±0.010延后干預(yù)組 0.248±0.012 0.207±0.0093 討論

從結(jié)果可以看出，中醫(yī)補益法協(xié)同化療抗結(jié)腸癌一定程度上能夠抑制腫瘤發(fā)展，延長生存期，提高臨床療效，但是其效果的發(fā)揮與其應(yīng)用的時機有關(guān)，在化療前期和化療后期的應(yīng)用效果要好于與化療期同步，考慮到主要是因為中醫(yī)以補患者元氣為主，在補益湯的方劑中，不同的藥材起到不同的補氣作用，結(jié)合起來主要以補肺氣，脾胃之氣和肝腎之氣為主，用來抵御外邪，而在化療期間，元氣大傷，不利于中藥的吸收，故起不到相應(yīng)的效果，影響了中藥的協(xié)同作用。另外，有學(xué)者認為，中藥的切入，應(yīng)該以化療的間歇期切入為宜，因此，正符合了延后干預(yù)組的療效好于提前干預(yù)組的結(jié)果。從作用機制來看，可能是因為在中醫(yī)補益的協(xié)同作用下，腫瘤細胞對化療藥物的敏感性增強，耐藥性減弱，因此，加速相關(guān)的凋亡蛋白的作用，起到抗癌作用。

參考文獻

［1］葉曄,阮善明,沈敏鶴,宋巧玲,陳美雪,林紅,任函承. 中醫(yī)補益法優(yōu)化干預(yù)結(jié)腸癌輔助治療階段的實驗研究［J］. 世界中醫(yī)藥,2011,05:440-443.

［2］阮善明,沈敏鶴,林勝友. 中醫(yī)補益法協(xié)同化療治療大腸癌的研究現(xiàn)狀［J］. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2010,01:147-149.

［3］李思運. 中醫(yī)補益法在肺癌化療不良反應(yīng)治療中的運用［D］.南京中醫(yī)藥大學(xué),2013.

［4］阮善明,沈敏鶴,王益,林紅,鄭麗萍,李夢婷,張愷. 中醫(yī)解毒法優(yōu)化干預(yù)對BALB/c結(jié)腸癌小鼠CEA、sCD44的實驗研究［J］. 世界中醫(yī)藥,2013,03:313-317.

［5］阮善明,沈敏鶴,王益,林紅,鄭麗萍,李夢婷,張愷. 中醫(yī)解毒法優(yōu)化干預(yù)對BALB/c結(jié)腸癌小鼠總生存期及Caspase-3、ROCK2、mTOR表達的影響［J］. 中華中醫(yī)藥雜志,2013,06:1714-1718.