檸檬無(wú)菌播種試驗(yàn)

麥麗瑤等

摘要

[目的]研究檸檬[Citrus limon （L.） Burm. f.]種子萌發(fā)的適宜處理方法。[方法]以不同種皮剝離程度的檸檬種子（不剝種皮、只剝外種皮、剝除內(nèi)外種皮）為試材，應(yīng)用不同消毒劑[4%（V/V）藍(lán)月亮、0.1%升汞]消毒不同時(shí)間（7、15、23 min），進(jìn)行檸檬播種試驗(yàn)。[結(jié)果]0.1%升汞消毒8 min的效果優(yōu)于4% （V/V）藍(lán)月亮消毒15 min，但差異性不大；種子在剝除內(nèi)、外種皮后萌發(fā)率、生長(zhǎng)勢(shì)情況都好于只剝外種皮和未剝除種皮的。[結(jié)論]考慮到升汞具有致癌變、致突變性等危害，在試驗(yàn)操作中不提倡使用，故以4%（V/V）藍(lán)月亮處理15 min為檸檬種子消毒的最佳方式。該研究可為檸檬組織培養(yǎng)及柑橘無(wú)病毒苗木培育提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞檸檬；無(wú)菌播種；消毒方法；種皮

中圖分類(lèi)號(hào)S666.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）06-01639-02

Abstract[Objective] The aim was to study the suitable treatment method of lemon seeds germination. [Method] Lemon seeds of without stripping the testa， only peeling the episperm， and peeling endotesta and episperm were sterilized by 4% （V/V） blue moon and 0.1% HgCl2 for 7， 15， 23 respectively， and then conducted on its sowing test. [Result] The disinfection effect of 0.1% HgCl2 for 8 min was better than that of 4% （V/V） blue moon for 15 min， but they had no significant difference. The germination rate and growth potential of lemon of peeling endotesta and episperm were superior to those of only peeling the episperm. [Conclusion] HgCl2 dose not advocate using in test process because of its damage of sending canceration and mutagenicity， so the best treatment method of lemon seeds is 4% （V/V） blue moon for 15 min. The study provides a reference basis for tissue culture of lemon and breeding of no virus seedlings of orange.

Key words Lemon； Aseptic sowing； Sterile technique； testa

檸檬[Citrus limon （L.） Burm. f.]為常綠小喬木，原產(chǎn)東南亞，我國(guó)四川、廣西、云南等地均有栽培。檸檬含有豐富的營(yíng)養(yǎng)元素，是營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值極高的水果之一。柑橘苗木的育苗方法有嫁接、壓條、扦插、實(shí)生、組織培養(yǎng)等，通過(guò)無(wú)菌播種人工培養(yǎng)，能夠在短期內(nèi)獲得大量幼小植株，是現(xiàn)階段經(jīng)濟(jì)有效的快速繁殖方法，也是工廠化育苗中莖尖微嫁接脫毒小苗的重要來(lái)源。無(wú)菌播種試驗(yàn)采用的消毒方法多為0.1%升汞消毒10 min，播種方法有撒播法、涂布法和稀釋法。散播法的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單易行，不易染菌，種子萌發(fā)快；涂布法的優(yōu)點(diǎn)是種子在瓶?jī)?nèi)分布較均勻；稀釋法的優(yōu)點(diǎn)是種子經(jīng)稀釋后撒播，密度容易掌握，種子分布均勻，利用率高[1]。至今為止，與無(wú)菌播種相關(guān)的報(bào)道多為蘭科植物和其他觀賞類(lèi)花卉，且多集中于對(duì)適合其生長(zhǎng)的培養(yǎng)基、添加激素或其他天然提取物、培養(yǎng)時(shí)間等方面的研究，而關(guān)于檸檬無(wú)菌播種中最佳消毒時(shí)間、最佳消毒藥劑、內(nèi)外種皮剝離等影響其種子萌發(fā)的因素的研究少有報(bào)道[2-4]。為此，筆者研究檸檬種皮不同剝離程度（不剝種皮、只剝外種皮、剝除內(nèi)外種皮）及不同消毒劑（4%（V/V）藍(lán)月亮、0.1%升汞）消毒不同時(shí)間對(duì)檸檬種子萌發(fā)的影響，探討種子萌發(fā)的適宜處理方法，以期為檸檬組織培養(yǎng)及柑橘無(wú)病毒苗木培育提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 培養(yǎng)基及種子準(zhǔn)備

配制MS培養(yǎng)基（培養(yǎng)基中加入瓊脂8.0 g/L及蔗糖35.0 g/L），用1 mol/L NaOH或HCl溶液把pH調(diào)至5.8，加熱溶解瓊脂后趁熱分裝20～25 ml培養(yǎng)基于規(guī)格為30 mm×150 mm的平底試管中，高壓蒸氣滅菌鍋121 ℃滅菌20 min，冷卻，備用。

檸檬果實(shí)購(gòu)自超市。從新鮮的果實(shí)中剝?nèi)》N子。用1 mol/L NaOH溶液浸泡5 min，以軟化種子表面的果膠，用清水反復(fù)沖洗直至果膠去除干凈，備用。

1.2方法

1.2.1

不同消毒時(shí)間對(duì)檸檬無(wú)菌萌發(fā)的影響。在超凈工作臺(tái)上將剝?nèi)?nèi)外種皮的檸檬種子置于濃度4% （V/V）的藍(lán)月亮溶液中分別浸泡7、15、23 min（記為處理A1、A2、A3），再用無(wú)菌水沖洗4～5次，每次1～2 min。然后播種于MS培養(yǎng)基上，播種時(shí)胚根朝下，種子的1/2插入培養(yǎng)基中，每試管3粒。每處理播種5管，3次重復(fù)。置于溫度為26 ℃、空氣相對(duì)濕度為80%的培養(yǎng)箱中，暗培養(yǎng)15 d，每隔3 d觀察并統(tǒng)計(jì)一次種子的污染率。

1.2.2

不同消毒方法及種皮不同剝離程度對(duì)檸檬種子無(wú)菌萌發(fā)的影響。

設(shè)6個(gè)處理：B1和C1剝除外種皮及內(nèi)種皮；B2和C2僅剝除外種皮；B3和C3不剝種皮。B1、B2和B3處理組用4%（V/V）藍(lán)月亮消毒劑消毒15 min，C1、C2和C3處理組用0.1%升汞消毒劑消毒8 min。在超凈工作臺(tái)上將檸檬種子按照上述要求分類(lèi)處理，然后按上述處理分別置于4% （V/V）的藍(lán)月亮溶液中浸泡15 min和0.1%升汞消毒劑消毒8 min，再用無(wú)菌水沖洗種子4～5次，每次1～2 min。最后將種子播于MS培養(yǎng)基上，播種時(shí)胚根朝下，種子的1/2插入培養(yǎng)基中，每試管3粒。每種處理播種5管，3次重復(fù)。置于溫度為26 ℃、空氣相對(duì)濕度為80%的培養(yǎng)箱中，暗培養(yǎng)15 d，每隔3 d觀察并統(tǒng)計(jì)一次種子污染率。

2 結(jié)果與分析

3結(jié)論與討論

檸檬無(wú)菌播種研究是一項(xiàng)基礎(chǔ)性工作，可以為檸檬的莖尖嫁接、育苗、大批量獲得無(wú)菌黃化苗等研究的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。對(duì)于檸檬種子無(wú)菌播種，消毒劑的選取以及消毒時(shí)間的確定很重要。不同消毒時(shí)間對(duì)檸檬種子萌發(fā)、污染率及長(zhǎng)勢(shì)都有顯著的影響。消毒時(shí)間過(guò)短過(guò)長(zhǎng)都會(huì)影響種子的生長(zhǎng)和發(fā)育。該試驗(yàn)中，4%（V/V）藍(lán)月亮消毒15、23 min，在播種3 d后萌發(fā)率均達(dá)到了1000%；4%（V/V）藍(lán)月亮消毒7 min，播種6 d后萌發(fā)率為93.3%。綜合發(fā)芽勢(shì)、芽長(zhǎng)、根系長(zhǎng)度等因素，4%（V/V）藍(lán)月亮消毒15 min處理為最優(yōu)處理。

最優(yōu)處理，不剝種皮處理種子在MS培養(yǎng)基中極難發(fā)芽，用4%（V/V）藍(lán)月亮消毒15 min和01%升汞消毒8 min，培養(yǎng)15 d的發(fā)芽率僅分別為21.4%和4.4%；而僅剝除外種皮處理發(fā)芽率居中。

因此，建議在研究和生產(chǎn)上進(jìn)行檸檬無(wú)菌播種時(shí)剝除內(nèi)外種皮。

在無(wú)菌條件下研究消毒劑及消毒劑消毒時(shí)間對(duì)檸檬萌發(fā)的影響還未見(jiàn)報(bào)道，該研究對(duì)快速獲得無(wú)菌苗及組織培養(yǎng)材料有重要意義。該試驗(yàn)選取了常用的2種消毒劑0.1%升汞和4%（V/V）藍(lán)月亮。其他消毒劑效果如何，消毒時(shí)間為多少最恰當(dāng)，對(duì)結(jié)果有何影響，如何使種子萌發(fā)效率更高等，還有待于進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]

陳超，王桂蘭，喬永旭，等. 蝴蝶蘭無(wú)菌播種方法的比較研究[J].北方園藝，2006（1）：35-36.

[2] 邵和平，張寧寧，張瓊，等. 卡特蘭的無(wú)菌播種及組培快繁技術(shù)研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（5）： 50-52.

[3] 姚麗娟，陳義增，徐曉薇，等.大花蕙蘭無(wú)菌播種技術(shù)試驗(yàn)[J].浙江林業(yè)科技， 2006，26（2）： 30-33.

[4] 王芬，徐步青，劉幸佳，等.春蘭種子無(wú)菌播種萌發(fā)過(guò)程及其影響因素[J].浙江農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，30（1）： 136-140.