?；撬徭V對(duì)缺氧／復(fù)氧致大鼠心室肌細(xì)胞鈉離子通道異常的影響

叢恬鈔，張銘慧，何海燕，尹永強(qiáng)，吳 紅，康 毅，婁建石

（天津醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，天津 300070）

心律失常（cardiac arrhythmia）是心血管系統(tǒng)疾病中最為常見也最為嚴(yán)重的病癥之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，中國每年約60萬人死于心源性猝死，其中90%以上由室性心動(dòng)過速、心室或心房顫動(dòng)所致［1］。美國每年約39萬人死于惡性心律失常［2］。心律失常不但會(huì)加重既有的心臟疾病，還可誘發(fā)心源性猝死，嚴(yán)重威脅人類健康。隨著研究的深入，越來越多的心律失常被證實(shí)與心臟離子通道異常有關(guān)［3］，而在心肌細(xì)胞離子通道中，鈉通道作為Ⅰ類抗心律失常藥物的作用靶點(diǎn)，可影響動(dòng)作電位形態(tài)，與早期后除極密切相關(guān)，其異常將會(huì)導(dǎo)致心律失常的發(fā)生［4］。盡管我們對(duì)于心肌鈉通道的臨床、基因以及生理特征進(jìn)行了廣泛的探索，但經(jīng)典的非選擇性鈉通道阻滯劑在臨床上應(yīng)用有限，以鈉通道為靶點(diǎn)的治療手段一直進(jìn)展緩慢［5］。因此，揭示心律失常發(fā)生的深層機(jī)制，探索安全有效的治療藥物是該領(lǐng)域的重點(diǎn)與難點(diǎn)。

?；撬徭V配合物（taurine-magnesium coordination compound，TMCC）是本研究室合成的配合物，既往的實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，其對(duì)多種因素誘發(fā)的實(shí)驗(yàn)性心律失常與觸發(fā)活動(dòng)有確切的防治效果［9］。細(xì)胞水平上的研究［10-15］亦證明，該配合物對(duì)正常狀態(tài)下與藥物誘發(fā)的異常鈉、鉀、鈣電流均有作用，提示該配合物或具有廣泛的抗心律失常作用，但其作用機(jī)制尚有待進(jìn)一步闡明。本實(shí)驗(yàn)通過建立細(xì)胞水平上缺氧／復(fù)氧致心律失常模型，觀察TMCC對(duì)鈉離子通道電流的作用，旨在進(jìn)一步探索其抗心律失常的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康成年Wistar大鼠，♂，體質(zhì)量220～250 g，合格證號(hào)：SCXK（軍）2007-0001。

1.1.2 藥品與試劑 HEPES、EGTA、Mg-ATP、Na2ATP、膠原酶Ⅱ等購自Sigma公司。TMCC由天津醫(yī)科大學(xué)化學(xué)教研室合成。

1.1.3 儀器 膜片鉗儀，MultiClamp 700B，USA；數(shù)-模轉(zhuǎn)換器，DigiData1440A，USA；倒置顯微鏡，IX51，Japan；三維操縱儀，MP-225，USA；微電極拉制儀，P-97，USA；恒流泵，Peri-Star，臺(tái)灣；酸度計(jì)，PHS-3C，上海精密科學(xué)儀器有限公司；Millipore純水系統(tǒng)，USA。

1.1.4 液體的制備 無鈣臺(tái)氏液（mmol·L-1）：NaCl 136，KCl 5.4，MgCl21.0，NaH2PO40.33，HEPES 10，Glucose 10，用 NaOH調(diào) pH至7.4。細(xì)胞保存液（KB液，mmol·L-1）：L-谷氨酸 70，?；撬?15，KCl 30，KH2PO410，MgCl20.5，HEPES 10，EGTA 0.5，Glucose 10，用KOH調(diào)pH至7.4。記錄鈉通道電流（INa）的正常細(xì)胞外液（mmol·L-1）：氯化膽堿 120，NaCl 25，CsOH 4，CaCl20.1，CoCl22，MgCl21，HEPES 10，Glucose 10，用 CsOH調(diào) pH至7.35。記錄鈉通道電流的電極內(nèi)液（mmol·L-1）：CsOH 140，NaCl10，EGTA 5，HEPES 5，Na2ATP 5，用CsOH調(diào)pH至7.3。以上液體使用前通以純氧20 min。記錄鈉通道電流的模擬缺氧細(xì)胞外液（mmol·L-1）：去除 Glucose，其他成分同正常外液，用CsOH結(jié)合鹽酸調(diào)pH至6.8，并通以100%氮?dú)?0 min以上。

1.2 方法

1.2.1 單個(gè)大鼠心肌細(xì)胞的分離 用25%烏拉坦將大鼠麻醉，仰臥位固定于鼠臺(tái)上，迅速剪開胸腔暴露心臟，從主動(dòng)脈根部離斷取出心臟，放入4℃無鈣臺(tái)氏液中，去除脂肪及結(jié)締組織。將主動(dòng)脈逆行插管連接于Langendorff灌流裝置上（恒溫37℃），以無鈣臺(tái)氏液8 ml·min-1連續(xù)灌流5 min，洗去心臟殘血后，改用50 m l含10 mg膠原酶Ⅱ與15 mg牛血清白蛋白的無鈣臺(tái)氏液進(jìn)行循環(huán)灌流。隨著灌流的進(jìn)行，流出液體逐漸變得粘稠，心肌的顏色逐漸變淺、透明，心臟體積逐漸膨大、松軟。此時(shí)將心臟自左心室分段剪去心肌組織，置于裝有KB液的試管中，用吸管輕輕吹打使之分散成單個(gè)細(xì)胞，分裝，置于4℃冰箱中穩(wěn)定2 h待用。

1.2.2 鈉通道電流INa的記錄 應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄單細(xì)胞離子電流。所用微電極用兩步拉制儀拉制而成，微電極充電極液后，電阻在2～4 MΩ之間。電流信號(hào)經(jīng)MultiClamp 700B膜片鉗放大器、DigiData1440A數(shù)-模轉(zhuǎn)換器及Pclamp10.1采集、儲(chǔ)存及分析。將細(xì)胞懸液置于倒置顯微鏡工作平臺(tái)容積為1 ml的浴槽中，待細(xì)胞貼壁后，用鈉外液進(jìn)行灌流，流速1 ml·min-1。選用大小相近、紋理清晰的桿狀細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。待高阻封接后，進(jìn)行電極電容補(bǔ)償。負(fù)壓或高壓脈沖破膜，進(jìn)行膜電容、串聯(lián)電阻及漏電流補(bǔ)償，平衡5 min，待電極內(nèi)鈉內(nèi)液與細(xì)胞內(nèi)液充分交換后，進(jìn)行膜電流記錄。膜電流的大小以電流密度及單位膜電容的膜電流表示。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)分組與造模 實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、缺氧／復(fù)氧模型組（H／R組）、H／R+100μmol·L-1TMCC組、H／R+200μmol·L-1TMCC組、H／R+400μmol·L-1TMCC組、H／R+24.24μmol·L-1胺碘酮組。將分離的細(xì)胞置于浴槽中，待貼壁后，先用記錄鈉電流（INa）的細(xì)胞外液進(jìn)行灌流，封接形成全細(xì)胞記錄模式后，平衡5 min，待電極內(nèi)液與細(xì)胞內(nèi)液充分交換后，進(jìn)行膜電流記錄，定義為正常細(xì)胞INa。然后用缺氧外液沖洗替換浴槽中的正常外液，15 min后再以正常有氧外液沖洗替換缺氧外液，5 min后記錄為缺氧／復(fù)氧組INa。H／R+TMCC組及H／R+胺碘酮組則分別在有氧外液中加入不同濃度的TMCC或胺碘酮進(jìn)行記錄。形成全細(xì)胞構(gòu)型后，在電壓鉗模式下記錄電流。將鉗制電位固定于-120 mV，指令電壓從-120 mV以10 mV為步階逐步躍至+30 mV，脈沖持續(xù)時(shí)間100 ms，可記錄到大鼠心室肌細(xì)胞的INa電流。細(xì)胞外液中加入2 mmol·L-1的CoCl2以阻斷鈣電流，細(xì)胞內(nèi)液中用Cs+代替K+，以去除鉀電流的影響。

1.2.4 穩(wěn)態(tài)激活曲線 以不同電壓水平的INa峰值與相應(yīng)的膜電位作圖，繪制INa電流I-V曲線，將I-V曲線的結(jié)果轉(zhuǎn)化為膜電導(dǎo)（G），對(duì)條件刺激電壓作圖，然后采用 Boltzman方程 G／Gmax＝1／｛1+exp［（V-V1／2）／K］｝進(jìn)行擬合，得到 INa穩(wěn)態(tài)激活曲線。式中Gmax為最大膜電導(dǎo)，V1／2為半數(shù)激活電壓，K為斜率參數(shù)。

1.2.5 穩(wěn)態(tài)失活曲線 采用雙脈沖刺激法測(cè)定穩(wěn)態(tài)失活曲線。保持電位-80 mV施予50 ms，步階10 mV，-150 mV～+30 mV系列條件脈沖刺激，每一條件脈沖后緊跟一固定去極化至-30 mV，25 ms的測(cè)試脈沖。以電流的相對(duì)值（I／Imax）對(duì)條件脈沖電壓作圖，得出INa的失活曲線。用Boltzman方程I／Imax＝1／｛1+exp［（V-V1／2）／K］｝進(jìn)行擬合，得出半數(shù)失活電壓V1／2和失活曲線斜率K，式中I和Imax分別為不同測(cè)試脈沖電壓下電流大小和最大電流。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 在Clampfit10.0軟件中將記錄的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，結(jié)果以表示。運(yùn)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，組間差異用LSD檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2．1 TMCC，胺碘酮對(duì)大鼠心肌細(xì)胞缺氧／復(fù)氧損傷模型INa峰值的影響 形成全細(xì)胞構(gòu)型后，在電壓鉗模式下記錄電流（Fig 2a-2f）。缺氧／復(fù)氧、各濃度TMCC及胺碘酮作用后，鈉電流峰值的變化見Fig 1。以去極化的電位為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的最大電流密度為縱坐標(biāo)繪制鈉電流的I-V曲線（Fig 2g）。結(jié)果表明，缺氧／復(fù)氧使 INa峰值從（56.89±2.07）pA／pF減小至（35.05±1.52）pA／pF（n＝6，P＜0.01），I-V曲線上移，模型制備成功。200、400μmol·L-1TMCC可使 INa峰值部分恢復(fù)（n＝6，P＜0.01），I-V曲線下移，INa電流恢復(fù)，其作用呈濃度依賴性，且強(qiáng)于24.24μmol·L-1胺碘酮。

Fig 1 Effects of TMCC and am iodarone on peak I Na in rat ventricular m yocytes subjected to hypoxia／reoxygenation**P＜0.01 vs control group；##P＜0.01 vs H／R group.

2．2 TMCC，胺碘酮對(duì)大鼠心肌細(xì)胞缺氧／復(fù)氧損傷模型INa穩(wěn)態(tài)激活曲線的影響 與正常對(duì)照組相比，缺氧／復(fù)氧使半數(shù)激活電壓 V1／2減?。‵ig 3a，n＝6，P＜0.05），激活曲線（Fig 3c）右移，激活減慢。各濃度TMCC組及胺碘酮組與模型組相比，V1／2和激活曲線斜率K值差異均無顯著性，給藥組間差異也無顯著性。

2．3 TMCC，胺碘酮對(duì)大鼠心肌細(xì)胞缺氧／復(fù)氧損傷模型INa穩(wěn)態(tài)失活曲線的影響 與正常組相比，缺氧／復(fù)氧模型組使半數(shù)失活電壓 V1／2增大（Fig 3b，n＝6，P＜0.05），失活曲線（Fig 3d）左移，失活加快。200、400μmol·L-1TMCC和 24.24μmol·L-1胺碘酮可使增大的半數(shù)失活電位降低（Fig 3b），對(duì)抗缺氧／復(fù)氧所致的失活提前，使左移的曲線部分恢復(fù)。

3 討論

鈉通道在生理學(xué)的發(fā)展史中占據(jù)著特殊重要的地位。1952年，Hodgkin和Huxley在烏賊神經(jīng)軸突闡明了鈉通道的基本特性，由此引發(fā)現(xiàn)代離子通道病理論［16］。在心肌細(xì)胞中，鈉通道主要存在于細(xì)胞膜上，是心肌細(xì)胞興奮時(shí)第一個(gè)被激活的離子通道，是快速反應(yīng)的基礎(chǔ)，也是其他通道開放或離子流動(dòng)的前提。在哺乳動(dòng)物心肌細(xì)胞中，鈉通道的密度最大，大密度鈉通道的存在對(duì)動(dòng)作電位的快速去激化（即0相）有重要意義，保證了心肌細(xì)胞的正常電活動(dòng)。心肌細(xì)胞的鈉通道由核心α亞基與輔助性β1、β2亞基共同構(gòu)成。Nav1.5是形成電壓門控的心肌鈉通道α亞基孔隙的膜內(nèi)在蛋白，是人類心臟主要的鈉離子通道類型，由SCN5A基因編碼。鈉通道數(shù)量上的減少、SCN5A基因的突變引起的分子結(jié)構(gòu)異常及失活不完全與多種心律失常疾病相關(guān)，包括長QT綜合征、Brugada綜合征、病竇綜合征以及進(jìn)行性心臟傳導(dǎo)阻礙和心房阻滯［16］?？梢?，對(duì)鈉離子通道研究的意義重大。目前，已有學(xué)者將SCN5A導(dǎo)入HEK細(xì)胞（人胚胎腎細(xì)胞），得到純Nav1.5離子流（INa）的各項(xiàng)參數(shù)［18］，而隨著研究的深入，Nav1.5的結(jié)構(gòu)與功能也越來越清晰［19］，以便更深層次的探索。

缺血／再灌注損傷可以刺激心室結(jié)構(gòu)與功能重塑，引起心肌細(xì)胞各種離子通道和離子交換體的激活，導(dǎo)致心肌細(xì)胞離子和能量失衡［21］，從而影響正常心肌細(xì)胞的功能。本實(shí)驗(yàn)采用缺氧液和復(fù)氧液灌注，制備缺氧／復(fù)氧模型，旨在模擬缺血／再灌注這一過程。實(shí)驗(yàn)選用缺氧15 min后復(fù)氧，結(jié)果顯示缺氧時(shí)鈉電流減少，復(fù)氧后鈉電流進(jìn)一步降低。有研究表明［22-25］，隨著模擬缺氧液灌流時(shí)間延長（灌流10 min與20 min），INa減少，通道激活和失活時(shí)間延長，隨再灌注激活時(shí)間恢復(fù)較快，但I(xiàn)Na失活時(shí)間并不立即恢復(fù)。這與本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果一致。

Fig 2 Effects of TMCC and am iodarone on I Na in rat ventricular m yocytes subjected to hypoxia／reoxygenationa：Control；b：H／R；c：H／R+100μmol·L-1；d：H／R+200μmol·L-1；e：H／R+400μmol·L-1；f：H／R+24.24μmol·L-1 Amiodarone；g：I-V curve.

Fig 3 Effects of TMCC（100，200，400μmol·L-1），am iodarone（24．24μmol·L-1）on I Na steady-state activation and inactivation in rat ventricular m yocardiocytes subjected to hypoxia／reoxygenationA：V1／2 and K act of steady-state activation；B：V1／2 and K inact of steady-state inactivation；C：steady-state activation curve；D：steady-state inactivation curve.*P＜0.05，**P＜0.01 vs control group；#P＜0.05，##P＜0.01 vs H／R group.

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，缺氧／復(fù)氧使INa峰值減小，IV曲線上移，TMCC（200、400μmol·L-1）能濃度依賴性地恢復(fù)由缺氧／復(fù)氧損傷引起的INa減小，使I-V曲線下移，且無平行移動(dòng)，基本不改變曲線形狀，仍保持原有的電壓依賴性關(guān)系，提示TMCC在不同膜電位水平對(duì)INa的作用是一致的。INa的動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果顯示，缺氧／復(fù)氧使激活曲線右移，激活減慢；使失活曲線左移，失活加快。TMCC（200、400μmol·L-1）和胺碘酮（24.24μmol·L-1）對(duì)激活的影響差異無顯著性，但可恢復(fù)左移的失活曲線，使鈉通道的穩(wěn)態(tài)失活過程減慢。由此可推斷，TMCC對(duì)抗缺氧／復(fù)氧鈉抑制的作用或與減慢失活有關(guān)。此前有研究發(fā)現(xiàn)TMCC對(duì)正常細(xì)胞的鈉通道有阻滯作用［10］，然而在缺氧／復(fù)氧模型中，TMCC并未加劇損傷對(duì)鈉通道的抑制，反而在一定程度上恢復(fù)了鈉電流，提示TMCC對(duì)鈉通道的作用可能與鈉通道的狀態(tài)有關(guān)，即在鈉通道正常開放時(shí)呈抑制作用，而鈉通道過度抑制時(shí)則表現(xiàn)為興奮作用，使失衡的鈉通道恢復(fù)或接近原有的平衡狀態(tài)。

胺碘酮是目前被認(rèn)為療效較好的廣譜抗心律失常藥物，但其復(fù)雜的毒副作用在一定程度上限制了其應(yīng)用［26］。本實(shí)驗(yàn)中，胺碘酮與TMCC作用一致，可對(duì)抗缺氧／復(fù)氧引起的鈉電流減少，作用與200 μmol·L-1的TMCC相當(dāng)。然而本室前期的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，胺碘酮會(huì)加重哇巴因?qū)︹c通道的抑制，而TMCC則可以恢復(fù)過度抑制的鈉通道［15］。根據(jù)“最佳靶點(diǎn)學(xué)說”，一個(gè)好的抗心律失常藥物應(yīng)對(duì)至少3種以上的心律失常靶點(diǎn)有效，且對(duì)單一通道的作用不過強(qiáng)，以減少致心律失常效應(yīng)。TMCC對(duì)心肌鈉、鉀、鈣離子通道均有一定的作用，能夠使病理?xiàng)l件下的細(xì)胞重獲平衡，利于心律失常的治療且降低致心律失常的風(fēng)險(xiǎn)，符合“最佳靶點(diǎn)學(xué)說”的要求。

在心肌細(xì)胞中，除了主要的快速INa，還存在其他較弱的鈉離子流成分，即Na+晚電流（INaL）。近年來研究顯示，在某些病理情況下，由于鈉通道快速開放后更加不能失活，即引起INaL的增強(qiáng)、心肌復(fù)極儲(chǔ)備能力下降，易引發(fā)早后除極（EAD），導(dǎo)致心律失常。此外，INaL的增強(qiáng)還可通過鈉-鈣交換，使Ca2+內(nèi)流持續(xù)增多，易導(dǎo)致鈣超載，使心臟功能受損。由于INaL對(duì)心律失常的發(fā)生以及藥物抗心律失常作用都有重要意義，抑制INaL已成為心律失常治療的新方向，因而也愈加受到重視［27］。但是，TMCC對(duì)這種晚鈉通道是否有影響及其機(jī)制還亟待探索。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 楊寶峰，蔡本志.心律失常發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展［J］.國際藥學(xué)研究雜志，2010，37（2）：81-8.

［1］ Yang B F，Cai B Z.Advances in the study of arrhythmogenic mechanisms［J］.J Int Pharm Res，2010，37（2）：81-8.

［2］ Go A S，Mozaffarian D，Roger V L，et al.Heart disease and stroke statistics-2014 update：A report from the American Heart Association［J］.Circulation，2014，129（3）：e28-e292.

［3］ Eduardo M.Cardiac channelopathies［J］.Nature，2002，415：213-8.

［4］ Goldin A L，Barchi R L，Caldwell JH，et al.Nomenclature of voltage-gated sodium channels［J］.Neuron，2000，28（2）：365-8.

［5］ Remme C A，Wilde A A.Targeting sodium channels in cardiac arrhythmia［J］.Curr Opin Pharmacol，2014，15：53-60.

［6］ Heijman J，Voiqt N，Dobrey D.New directions in antiarrhythmic drug therapy for arterial fibrillation［J］.Future Cardial，2013，9（1）：71-88.

［7］ 錢慕儀.抗心律失常藥研究新進(jìn)展［J］.當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2010，16（4）：22-4.

［7］ Qian M Y.Progress of researches in antiarrhythmic drugs［J］.Contemporary Med，2010，16（4）：22-4.

［8］ 李曄蕾.抗心律失常藥物治療新進(jìn)展［J］.中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2013，10（31）：159-61.

［8］ Li Y L.Progress of antiarrhythmic drug therapy［J］.Med Innov China，2013，10（31）：159-61.

［9］ 孫 濤，康 毅，婁建石，等.?；撬徭V的合成及對(duì)烏頭堿誘發(fā)心律失常的作用［J］.中國心血管雜志，2003，8（4）：238-9.

［9］ Sun T，Kang Y，Lou JS，etal.Synthesisand effectof arrhythmia induced by aconitine on Taurine-Magnesium coordination compound［J］.Chin JCardiovasc Med，2003，8（4）：238-9.

［10］汪玲芳，尹永強(qiáng)，趙 臨，等.?；撬徭V對(duì)烏頭堿致大鼠心肌細(xì)胞心律失常模型鈉離子通道的影響［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2010，26（5）：611-4.

［10］Wang L F，Yin Y Q，Zhao L，etal.Effectsof taurine-maganesium coordination compound on sodium channel in rat cardiomyocytes of arrhythmia induced by aconitine［J］.Chin Pharmacol Bull，2010，26（5）：611-4.

［11］汪玲芳，尹永強(qiáng)，趙 臨，等.?；撬徭V配合物對(duì)烏頭堿誘發(fā)心律失常大鼠心肌細(xì)胞鈣通道的影響［J］.中國新藥與臨床雜志，2011，30（1）：39-42.

［11］Wang L F，Yin Y Q，Zhao L，etal.Effectsof taurine-maganesium coordination compound on calcium channel in rat cardiomyocytes of arrhythmia induced by aconitine［J］.Chin JNew Drugs Clin Rem，2011，30（1）：39-42.

［12］李宏杰，尹永強(qiáng)，張銘慧，等.?；撬徭V配合物對(duì)缺氧復(fù)氧致大鼠心肌細(xì)胞瞬時(shí)外向鉀離子通道異常的影響［J］.中國新藥與臨床雜志，2012，31（5）：276-80.

［12］Li H J，Yin Y Q，Zhang M H，et al.Effects of taurine-maganesium coordination compound on abnormal transientoutward potassium channel current induced by hypoxia-reoxygenation in cardiomyocytes of rats［J］.Chin JNew Drugs Clin Rem，2012，31（5）：276-80.

［13］何海燕，尹永強(qiáng)，李宏杰，等.?；撬徭V對(duì)缺氧／復(fù)氧致大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)向整流鉀通道異常的影響［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2012，28（12）：1751-6.

［13］He H Y，Yin Y Q，Li H J，et al.Effects of taurine-maganesium coordination compound on abnormal inward rectifier potassium channel current induced by hypoxia-reoxygenation in cardiomyocytes of rats［J］.Chin Pharmacol Bull，2012，28（12）：1751-6.

［14］Yin Y，Wen K，Wu Y，etal.Inhibition of sodium currentby taurinemagnesium coordination compound prevents Cesium Chlorideinduced arrhythmias［J］.Biol Trace Elem Res，2012，146（2）：192-8.

［15］Zhao L，Lou J，Wu H，etal.Effects of taurine-magnesium coordination compound on ionic channels in rat ventricular myocytes of arrhythmia induced by ouabain［J］.Biol Trace Elem Res，2012，147（1-3）：275-84.

［16］CatterallW A.From ionic currents tomolecularmechanisms：The structure and function of voltage-gated sodium channels［J］.Neuron，2000，26（1）：13-25.

［17］Rook M B，Evers M M，Vos M A，Bierhuizen M F.Biology of cardiac sodium channel Nav1.5 expression［J］.Cardiovasc Res，2012，93（1）：12-23.

［18］Berecki G，Wilders R，de Jonge B，etal.Re-evaluation of the action potential upstroke velocity as ameasure of the Na+current in cardiac myocytes at physiological conditions［J］.PLosOne，2010，5（12）：e15772.

［19］Payandeh J，Scheuer T，Zheng N，Catterall W A.The crystal structure of a voltage-gated sodium channel［J］.Nature，2011，475（7356）：353-8.

［20］王天成.心肌離子通道與抗心律失常藥研究進(jìn)展［J］.心血管病學(xué)進(jìn)展，2004，增刊：94-7.

［20］Wang TC.Advance in research ofmyocardial ion channel and anti-arrhythmia drug［J］.Adv Cardiovasc Dis，2004，supplement：94-7.

［21］孫 亮，龍 村，黑飛龍，等.缺血／再灌注處理對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞鈉電流的影響［J］.中國體外循環(huán)雜志，2011，9（1）：28-31.

［21］Sun L，Long C，Hei F L，et al.Effects of ischemia／reperfusion management on sodium current of the cardiocytes from the newborn rats［J］.Chin JE C C，2011，9（1）：28-31.

［22］鄒路蕓，蔣文平.缺血／再灌注對(duì)心室肌細(xì)胞膜離子通道的影響［J］.中國心臟起搏與心電生理雜志，1999，13（4）：230-3.

［22］Zou L Y，JiangW P.Effectof ischemia／reperfusion onmembrane ionic channels of guinea pig ventricularmyocytes［J］.Chin JCard Pac Electrophysiol，1999，13（4）：230-3.

［23］劉曉云，丁 超，張 霞.缺血／再灌注對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞鈉離子電流的影響［J］.中國臨床康復(fù)，2005，9（47）：28-9.

［23］Liu X Y，Ding C，Zhang X.Effect of ischemic-reperfusion on sodium channel current of cardiomyocytes in rats［J］.Chin J Clin Rehabit，2005，9（47）：28-9.

［24］Fr?hlich GM，Meier P，White SK，etal.Myocardial reperfusion injury：looking beyond primary PCI［J］.Eur Heart J，2013，34（23）：1714-22.

［25］Goegelein H，Gautier P，Roccon A，et al.Effects of the novel Amiodarone-like compound SAR114646A on cardiac ion channels and ventricular arrhythmias in rats［J］.Naunyn Schmiedeberg’s Arch Pharmacol，2011，384（3）：231-44.

［26］Mason JW.Amiodarone［J］.N Engl JMed，1987，316（8）：455-66.

［27］衛(wèi)曉紅，吳 林.阻滯延遲鈉電流：治療心律失常的新曙光［J］.心血管病學(xué)進(jìn)展，2013，34（1）：18-22.

［27］Wei X H，Wu L.Inhibition of late sodium current：a novel target to treat cardiac arrhythmias［J］.Adv Cardiovasc Dis，2013，34（1）：18-22.