BCRP與P-gp在乳腺癌組織中的表達(dá)及其意義

齊彩霞

（山西大同大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山西大同037009）

乳腺癌由于其發(fā)生部位的特殊性，多數(shù)患者容易做到早發(fā)現(xiàn)、早手術(shù)、早治療，因此在臨床常見(jiàn)的九大惡性腫瘤中，乳腺癌的治療效果以及治愈率一直是比較樂(lè)觀的。但是一部分乳腺癌患者綜合治療效果欠佳，容易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，主要的原因是癌細(xì)胞對(duì)于化療藥物產(chǎn)生耐藥，減弱其治療作用的發(fā)揮，降低了治愈率。目前關(guān)于乳腺癌的多藥耐藥機(jī)制，國(guó)內(nèi)外學(xué)者已做了大量的科學(xué)研究。研究結(jié)果顯示多數(shù)的腫瘤組織中含有大量的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，這些蛋白能夠阻礙化療藥物進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，大幅度削弱化療療效，其中關(guān)于P-糖蛋白（P-gp）和乳腺癌耐藥蛋白（BCRP）的研究較多。P-gp是廣泛存在于人體正常組織及癌組織中的一種藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，它在惡性腫瘤的多藥耐藥機(jī)制中研究的較多。乳腺癌耐藥蛋白（BCRP）是最近幾年來(lái)發(fā)現(xiàn)的與耐藥機(jī)制相關(guān)的一種新的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,其在腫瘤多藥耐藥機(jī)制中發(fā)揮的作用也越來(lái)越重要[1]。本研究采用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)P-gp與BCRP在乳腺癌組織中的表達(dá)，并檢測(cè)其表達(dá)在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者與非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中的不同。

1 材料與方法

1.1 臨床標(biāo)本

收集大同市第五人民醫(yī)院2009-2012年收治的原發(fā)性乳腺癌患者43例，留取新鮮手術(shù)切除的腫瘤組織及淋巴結(jié)標(biāo)本，標(biāo)本經(jīng)病理診斷均為乳腺癌。病理分期為Ⅰ期6例，ⅡA期10例，ⅡB期9例，ⅢA期14例，ⅢB期4例。淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移12例，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者31例。同時(shí)收集24例正常乳腺組織的標(biāo)本。所有標(biāo)本4%甲醛固定，石蠟包埋，制成厚4μm的組織切片。

1.2 試劑與方法

鼠抗人P-gp單克隆抗體，鼠抗人BCRP-21單克隆抗體，S-P染色及DAB顯色試劑盒均購(gòu)自北京中山公司。標(biāo)本均采用S-P法進(jìn)行免疫組化染色，用已知陽(yáng)性的乳腺癌組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 陽(yáng)性結(jié)果判定

根據(jù)腫瘤細(xì)胞被染色的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量及染色的強(qiáng)弱程度來(lái)判定結(jié)果。P-gp結(jié)果判定：按照陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量所占比例為＜15%，染色極淺為陰性（－）；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例＞15%，染色呈淡黃色以及棕黃色均為陽(yáng)性表達(dá)。BCRP結(jié)果判定：按照陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量所占比例為＜20%，染色極淺為陰性（－）；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例＞20%，染色呈淡黃色及棕黃色為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：樣本陽(yáng)性率的比較用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 BCRP與P-gp在乳腺癌組織及正常乳腺組織中的表達(dá)情況

BCRP與P-gp在乳腺癌組織中的表達(dá)均明顯高于正常乳腺組織，見(jiàn)表1。其中BCRP的正常乳腺組織中的陽(yáng)性率為58.3%，乳腺癌組織中為90.7%，二者相比χ2=9.761，P=0.001 8；P-gp在正常乳腺組織中的陽(yáng)性率為41.7%，乳腺癌組織中為83.7%，二者相比χ2=12.659，P=0.000 4。

表1 P-gp與BCRP在乳腺癌組織及正常乳腺組織中的表達(dá)

2.2 BCRP與P-gp的陽(yáng)性表達(dá)率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中BCRP與P-gp的陽(yáng)性表達(dá)率均較不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者為高。其中在不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中BCRP的陽(yáng)性表達(dá)率為75%，在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中的陽(yáng)性率為96.8%，二者相比χ2=4.862，P=0.028；在不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中P-gp的陽(yáng)性表達(dá)率為58.3%，在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中的陽(yáng)性率為93.5%，二者相比χ2=7.872，P=0.005,見(jiàn)表2。

表2 P-gp與BCRP的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

3 討論

BCRP在正常人體的腦、肝臟、胎盤、前列腺、小腸等組織中有較高水平的表達(dá)[2]。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)專家也進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)研究，表明在胃癌、大腸癌、乳腺癌等惡性腫瘤組織中都有BCRP的高度表達(dá)。BCRP與P-gp屬于同一家族，作用相似，也是依賴ATP的一種跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，其作用底物為阿霉素、柔紅霉素等乳腺癌患者的常用藥物。它可以有效地將上述藥物在非常短的時(shí)間內(nèi)從細(xì)胞內(nèi)泵出到細(xì)胞外，降低腫瘤細(xì)胞內(nèi)藥物分子的聚集數(shù)量，使抗腫瘤藥物殺傷腫瘤細(xì)胞的能力在很大的程度上被減弱，因此出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象[2]?？梢哉f(shuō)BCRP在乳腺癌患者的多藥耐藥機(jī)制中發(fā)揮著舉足輕重的作用。Herman等也曾利用PCR的方法對(duì)乳腺癌組織中的BCRP含量進(jìn)行定量檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)BCRP的表達(dá)要明顯高于其他的耐藥相關(guān)蛋白[3]。本研究證明BCRP在乳腺癌組織中有過(guò)度表達(dá)，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者BCRP的表達(dá)要明顯高于沒(méi)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，提示BCRP的表達(dá)程度的高低與腫瘤細(xì)胞的侵襲能力具有一定的相關(guān)性。

P-gp是廣泛存在于人體組織中的一種跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，也是目前研究最全面最深入的耐藥相關(guān)蛋白。它所作用的底物非常廣泛，包括抗生素類藥物、心血管類藥物、抗精神病藥物、以及抗腫瘤藥物[4]。P-gp表達(dá)水平的高低與相應(yīng)的惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi)藥物濃度的高低具有明顯的關(guān)聯(lián)，其作用機(jī)制可能是在ATP的參與下，把已被擴(kuò)散入腫瘤細(xì)胞內(nèi)的藥物分子主動(dòng)運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞外，這樣就使腫瘤細(xì)胞內(nèi)的藥物有效濃度大幅度降低，不能發(fā)揮其殺傷腫瘤細(xì)胞的作用而發(fā)生耐藥[5]。本實(shí)驗(yàn)研究表明P-gp在乳腺癌組織中有高表達(dá)，且在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者的癌組織中表達(dá)明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，這證實(shí)了P-gp不僅參與多藥耐藥機(jī)制，而且與乳腺癌患者的病理分期也有一定的關(guān)系。

總之，BCRP與P-gp與在乳腺癌組織中的過(guò)度表達(dá)，可能與癌細(xì)胞對(duì)藥物的多藥耐藥機(jī)制有關(guān)。要想提高乳腺癌患者的治愈率，就要想辦法降低它們二者的表達(dá)水平，這一課題已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)相關(guān)科研工作者的研究熱點(diǎn)。

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