野菊花水提物對小鼠的鎮(zhèn)痛作用

吳瓊，馬宏達，孫學惠，胡北，賈輝，陳宇峰

(沈陽軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科，沈陽 110840)

野菊花水提物對小鼠的鎮(zhèn)痛作用

吳瓊，馬宏達，孫學惠，胡北，賈輝，陳宇峰

(沈陽軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科，沈陽 110840)

目的 觀察野菊花水相萃取物(AF)對小鼠的鎮(zhèn)痛作用。方法采用辣椒素致痛小鼠模型,以小鼠舔足時間為指標,觀察小鼠5 min內(nèi)舔足總時間;采用小鼠熱水甩尾法疼痛模型,記錄甩尾潛伏期;進行開場實驗,考察AF對小鼠自主活動和探索行為的影響;對閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠的作用,以翻正反射消失和恢復為指標,記錄小鼠睡眠潛伏期及睡眠時間。結(jié)果AF可顯著減少小鼠舔足時間,使熱水所致小鼠甩尾潛伏期明顯延長,對小鼠自主活動無影響,對小鼠閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠無影響。結(jié)論AF對小鼠有明顯的鎮(zhèn)痛作用,這種鎮(zhèn)痛作用與自主活動和鎮(zhèn)靜作用無關(guān)。

野菊花；戊巴比妥鈉；鎮(zhèn)痛作用；甩尾實驗；開場實驗

野菊花為菊科植物野菊(Chrysanthemum indicumL.)的干燥頭狀花序,其性涼,味苦、辛,歸肝、心經(jīng),具有清熱解毒、瀉火平肝之功效,用于疔瘡癰腫、目赤腫痛、頭痛眩暈[1-3],藥用歷史悠久。研究證明:野菊花具有抗病毒、降壓、清除氧自由基等作用[2],文獻報道野菊花水相萃取物(AF)在實驗中表現(xiàn)出潛在的鎮(zhèn)痛活性[3]。筆者在本研究中通過辣椒素致痛小鼠模型、小鼠熱水甩尾法疼痛模型,開場實驗及閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠實驗考察野菊花鎮(zhèn)痛作用,為探討其藥理作用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 動物 SPF級昆明種小鼠[合格證號:SCXK(遼) 2010-0001,遼寧長生生物技術(shù)有限公司提供],體質(zhì)量(20±2)g,雌雄兼用。自由飲食飲水,適應性飼養(yǎng)3 d后用于實驗。

1.2 藥物及樣品制備 野菊花購自河北省安國市健仁藥材有限公司,產(chǎn)地:湖北,批號:090103,經(jīng)沈陽藥科大學孫啟時教授鑒定為菊科植物野菊(Chrysanthemum indicumL.)的干燥頭狀花序。藥材標本保存于沈陽軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科實驗室。AF的制備:將野菊花的干花和花蕾(3 kg)用75%乙醇在80℃回流提取,將提取液減壓濃縮回收乙醇,得到濃縮稠膏459.4 g,將稠膏先后用石油醚、二氯甲烷、正丁醇和水萃取。將水相萃取液減壓濃縮,得到殘渣100.1 g,用于鎮(zhèn)痛活性測定,即每克水相萃取物相當于野菊花生藥29.97 g。

1.3 試劑 辣椒素(美國SIGMA CHEMICAL公司,批號:123H78341)；地西泮注射液(上海旭東海普藥業(yè)有限公司,規(guī)格:2 mg∶10 mL,批號:AH111101,臨用前用0.9%氯化鈉溶液配成所需濃度)；鹽酸嗎啡注射液(青海制藥廠,規(guī)格:每支0.5 mg,批號:2004-02-19,臨用前溶解在0.9%氯化鈉溶液中)；戊巴比妥鈉(上海西悅生物科技有限公司,批號:20110826)；水為超純水,其他試劑均為分析純。

1.4 儀器 HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市杰瑞爾電器有限公司)。

1.5 對辣椒素致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用 取小鼠50只,雌雄各半,隨機分為5組,每組10只,分組依次灌胃給予AF 75,150,300 mg·kg-1,空白對照組給予等體積的溶媒。于給藥1 h后(陽性藥組于皮下注射嗎啡30 min后,10 mg·kg-1),右足足底注射辣椒素(1.6 μg,25 μL)。記錄每只小鼠在給予足底注射辣椒素后5 min內(nèi)的舔足總時間[4]。

1.6 對小鼠熱水甩尾法疼痛模型的鎮(zhèn)痛作用 在室溫26℃條件下,取小鼠,雌雄兼用,將小鼠尾端3 cm浸入(54±1)℃恒溫水浴中,以甩尾潛伏期為指標,給藥前潛伏期測3次,間隔為25 min。求其平均值,取潛伏期≤4 s為合格鼠。取合格小鼠50只,隨機分為5組,每組10只,分組依次灌胃給予AF 75,150, 300 mg·kg-1,空白對照組給予等體積的溶媒。于給藥1 h后(嗎啡陽性藥組于皮下注射30 min后, 10 mg·kg-1)進行正式測試,記錄甩尾潛伏期,為了盡量減少組織損傷截止時間為8 s[5-8]。

1.7 開場實驗 考察AF對自主活動和探索行為的影響,進行開場實驗,參照TSUDA等[9]方法,記錄動物5 min內(nèi)直立次數(shù),由底面中心開始走動的穿越格數(shù),及不動的總時間。取小鼠50只,雌雄各半,隨機分為5組,每組10只,分別給予AF 75,150, 300 mg·kg-1,空白對照組給予等體積的溶媒。于給藥1 h后(陽性藥組于腹腔注射地西泮30 min后, 1 mg·kg-1)進行實驗[5,9-10]。

1.8 對閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠的作用 取小鼠50只,雌雄各半,隨機分為5組,每組10只,分組依次灌胃給予AF 75,150,300 mg·kg-1,空白對照組給予等體積的溶媒。于給藥1 h后(陽性藥組于腹腔注射地西泮30 min后,1 mg·kg-1)腹腔注射戊巴比妥鈉45 mg·kg-1,以翻正反射消失和恢復為指標,記錄小鼠睡眠潛伏期及睡眠時間(翻正反射消失達1 min以上者確定為陽性,即已入睡)[5,11-12]。

1.9 統(tǒng)計學方法 實驗數(shù)據(jù)采用SPSS17.0版軟件統(tǒng)計分析,各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(±s)表示,組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 AF對辣椒素致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用 結(jié)果顯示,對辣椒素引起的傷害性刺激,AF各劑量組及嗎啡組均可顯著減少小鼠舔足時間。說明AF對辣椒素致痛小鼠有一定的鎮(zhèn)痛作用。見表1。

表1 AF對辣椒素致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用Tab.1 Analgesic activity of AF on capsaicin-induced pain in mice ±s

表1 AF對辣椒素致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用Tab.1 Analgesic activity of AF on capsaicin-induced pain in mice ±s

與空白對照組比較,*1P＜0.001Compared with blank control group,*1P＜0.001

組別小鼠/只劑量/(mg·kg-1)舔足時間/s AF低劑量組107569.9±11.8*1中劑量組1015066.7±5.4*1高劑量組1030045.3±4.7*1嗎啡組1010 2.9±1.2*1空白對照組100105.8±12.3

2.2 AF對小鼠熱水甩尾法疼痛模型的鎮(zhèn)痛作用 結(jié)果顯示,與空白對照組比較,AF中、高劑量組及嗎啡組可延長傷害性刺激小鼠的甩尾反應時間(P＜0.01)。說明AF對小鼠熱水甩尾法疼痛模型有鎮(zhèn)痛作用。見表2。

表2 AF對小鼠熱水甩尾法疼痛的影響Tab.2 Analgesic activity of AF on hot water-induced tail-flick in mice ±s

表2 AF對小鼠熱水甩尾法疼痛的影響Tab.2 Analgesic activity of AF on hot water-induced tail-flick in mice ±s

與空白對照組比較,*1P＜0.001Compared with blank control group,*1P＜0.001

組別小鼠/只劑量/(mg·kg-1)甩尾潛伏期/s AF低劑量組10753.35±0.18中劑量組101506.19±0.22*1高劑量組103004.32±0.27*1嗎啡組10106.98±0.21*1空白對照組1003.17±0.30

2.3 AF對小鼠開場實驗的影響 結(jié)果顯示,AF各劑量組小鼠自主活動未受影響,5 min內(nèi)直立次數(shù),由底面中心開始走動的穿越格數(shù),及不動的總時間與空白對照組比較差異無統(tǒng)計學意義。陽性藥地西泮(1 mg·kg-1)組與空白對照組比較,顯著影響小鼠自主活動。說明AF對小鼠自主活動無影響。

2.4 AF對閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠的作用 結(jié)果表明,AF各劑量組對閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠的睡眠潛伏期和睡眠時間與空白對照組比較無統(tǒng)計學意義,僅地西泮組睡眠潛伏期明顯短于空白對照組,且睡眠時間顯著延長(P＜0.001)。說明AF對小鼠閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠無影響。見表3。

表3 AF對小鼠閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠的作用Tab.3 Synergism of AF on sleeping time induced by pentobarbital sodium of subthreshold dose ±s

表3 AF對小鼠閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠的作用Tab.3 Synergism of AF on sleeping time induced by pentobarbital sodium of subthreshold dose ±s

與空白對照組比較,*1P＜0.001Compared with blank control group,*1P＜0.001

組別小鼠/只劑量/(mg·kg-1)睡眠潛伏期睡眠時間min AF低劑量組10755.48±0.6059.36±7.34中劑量組101505.46±0.5059.97±9.00高劑量組103005.58±0.4655.00±4.39地西泮組1013.44±0.22*1142.17±11.65*1空白對照組1005.38±0.7553.81±4.94

3 討論

野菊花作為一種傳統(tǒng)的抗炎中藥已被許多古代醫(yī)書記載?，F(xiàn)代藥理研究表明,野菊花的乙醇提取物可以減少一氧化氮(NO)和前列腺素在炎性組織中的合成[13]。野菊花的抗炎特性已被廣泛研究,但其鎮(zhèn)痛活性可能被忽視了,因此,筆者研究野菊花的乙醇提取物的鎮(zhèn)痛活性,并先后用石油醚、二氯甲烷、正丁醇和水萃取,收集萃取液,分別研究其鎮(zhèn)痛活性。

本研究通過兩種經(jīng)典的疼痛模型觀察AF的鎮(zhèn)痛作用。其中熱水浴甩尾致痛為中樞鎮(zhèn)痛模型,辣椒素致痛為外周鎮(zhèn)痛模型。中樞鎮(zhèn)痛模型實驗結(jié)果表明, AF在150,300 mg·kg-1劑量可延長傷害性刺激小鼠的甩尾反應時間。在外周鎮(zhèn)痛模型實驗中,AF75, 150,300 mg·kg-1組可顯著減少小鼠舔足時間。提示AF的鎮(zhèn)痛作用可能通過中樞及外周發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。開場實驗和戊巴比妥鈉誘導的睡眠時間的測試表明, AF對小鼠的自主活動等行為沒有顯著影響。

研究表明,從野菊花的乙醇提取物中分離出來的大量的類黃酮苷和酚苷類有顯著的抗炎特性[14],這些化學物很容易地分布在野菊花的水相萃取物中。野菊花的水相萃取物能抑制炎性因子的釋放和增強痛閾值,這可能與抗炎和鎮(zhèn)痛作用有關(guān)。因此,該研究表明,鎮(zhèn)痛活性可能與黃酮苷類化合物和酚苷有關(guān)。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:292.

[2] 吳釘紅,楊立偉,蘇薇薇.野菊花化學成分及藥理研究進展[J].中藥材,2004,27(2):142-144.

[3] 黃勇,蘇韞,陳麗.野菊花顆?？寡?、鎮(zhèn)痛作用的實驗研究[J].甘肅中醫(yī)學院學報,2009,26(5):5-6.

[4] 咸云淑,徐納新,趙恒蘭.氯胺酮對辣椒素致敏大鼠的超前鎮(zhèn)痛作用[J].吉林醫(yī)學,2004,25(2):29-30.

[5] 魏偉,吳希美,李元建.藥理實驗方法學[M].4版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2010:770-774,635-636.

[6] 官清,張珩.祛風濕單味中藥抗炎和鎮(zhèn)痛作用分析[J].臨床合理用藥,2012,5(7A):6-7.

[7] 黃禮德,郭立強,潘廷啟,等.半邊蓮不同提取物鎮(zhèn)痛抗炎作用[J].醫(yī)藥導報,2012,31(8):982-985.

[8] 楊中良,楊秀云,曲曉璐,等.金威消石顆粒對小鼠的鎮(zhèn)痛作用[J].醫(yī)藥導報,2013,32(2):166-167.

[9] TSUDA M,SUZUKI T,MISAWA M,et al.Involvement of the opioid system in the anxiolytic effect of diazepam in mice[J].Eur J Pharmacol,1966,307(1):7-14.

[10] 孫進平,錢坤.大豆苷元對慢性應激抑郁大鼠行為學及海馬部腦源性神經(jīng)生長因子表達的影響[J].醫(yī)藥導報, 2011,30(4):446-449.

[11] 王德才,高允生,李同德.杭白芷香豆素在戊巴比妥鈉及巴比妥鈉對小鼠催眠作用中的影響[J].醫(yī)藥導報, 2004,23(2):75-76.

[12] 黃寶康,黃流清,趙忠新.國產(chǎn)纈草屬4種藥用植物鎮(zhèn)靜催眠作用的比較研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2008,19 (11):2710-2711.

[13] LEE D Y,CHOI G,YOON T,et al.Anti-inflammatory activity of Chrysanthemum indicum extract in acute and chronic cutaneous inflammation[J].J Ethnopharmacol, 2009,123(1):149-154.

[14] CHENG W,LI J,YOU T,et al.Anti-inflammatory and immunomodulatory activities of the extracts from the inflorescence of Chrysanthemum indicum Linne[J].J Ethnopharmacol,2005,101(1-3):334-337.

DOI 10.3870/yydb.2014.04.009

Analgesic Effect of Water Extract from Chrysanthemum Indicum on Mice

WU Qiong,MA Hong-da,SUN Xue-hui,HU Bei,JIA Hui,CHEN Yu-feng
(Department of Pharmacy, General Hospital of Shenyang Military Area Command,Shenyang 110840,China)

Objective To study the analgesic effect of the water extract fromChrysanthemum indicumon mice.MethodsAlgogenic model of mice was induced by injection of capsaicine in the paws.Total time of paws-licking in 5 min after injection of capsaicin was observed from the mice.The analgesic effects of the extract were respectively observed by subplantar capsaicin injection and tail-flick test.The open-field test and pentobarbital sodium-induced sleeping time test were observed.ResultsGiven orally,the extract produced significant inhibition on chemical nociception induced by subplantar capsaicin injection and on thermal nociception in the tail-flick test.In the pentobarbital sodium-induced sleeping time test and the open-field test,the extract neither significantly enhanced the pentobarbital sodium-induced sleeping time nor impaired the motor performance.ConclusionChrysanthemum indicumhas analgesic effects that are unlikely related to sedation or motor abnormality.

Chrysanthemum indicum;Pentobarbital sodium;Analgesic effect;Tail-flick test;Open-field test

R282.71;R285.5

A

1004-0781(2014)04-0446-03

2013-03-29

2013-11-20

吳瓊(1984-),女,黑龍江人,藥師,碩士,研究方向:中藥新藥研發(fā)及中藥藥理。電話:024-28851751,E-mail：wuqiongbaby@gmail.com。

陳宇峰(1978-),男,黑龍江人,主管藥師,博士,研究方向:中藥新藥研發(fā)及中藥藥理。電話:024-28851750,E-mail：yufengchen1978@163.com。