黃芪注射液聯(lián)合針刺穴位對慢性腎小球腎炎模型大鼠的治療作用

曾明，程櫻

(1.湖北省臨床檢驗中心，武漢 430064；2.湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院，武漢 430064)

黃芪注射液聯(lián)合針刺穴位對慢性腎小球腎炎模型大鼠的治療作用

曾明1，程櫻2

(1.湖北省臨床檢驗中心，武漢 430064；2.湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院，武漢 430064)

目的 探討腹腔注射黃芪注射液結(jié)合針刺足三里穴和腎俞穴對慢性腎小球腎炎模型大鼠的治療作用及其機制。方法雄性SD大鼠50只,隨機分為藥穴結(jié)合組、黃芪組、穴位組、模型組、空白對照組,各10只。除空白對照組外,其余各組均尾靜脈注射陽離子化牛血清清蛋白誘發(fā)大鼠慢性腎小球腎炎模型。藥穴結(jié)合組:每日腹腔注射黃芪注射液1.5 mL(200 g),同時針刺單側(cè)足三里穴、腎俞穴,每穴10 min;黃芪組:每日腹腔注射黃芪注射液1.5 mL(200 g);穴位組:每日針刺單側(cè)足三里穴、腎俞穴,每穴10 min;模型組:每日正常飼養(yǎng)?？瞻讓φ战M:每日腹腔注射滅菌注射用水1.5 mL(200 g);測定各組24 h尿蛋白、血清尿素氮和肌酐含量。結(jié)果3個治療組大鼠的24 h尿蛋白、血清尿素氮和肌酐含量均比同期模型組低(均P<0.05)。結(jié)論3種治療方法均能延緩慢性腎小球腎炎的發(fā)展,保護腎功能;隨著治療時間的延長,藥穴結(jié)合組的治療效果最好,黃芪組的治療效果優(yōu)于穴位組。

黃芪注射液；足三里穴；腎俞穴；腎小球腎炎,慢性

慢性腎小球腎炎(chronic glomerulonephritis)簡稱慢性腎炎,是以蛋白尿、血尿、高血壓、水腫伴緩慢進展的腎功能減退為臨床特點的一組腎小球疾?。?］,預(yù)后較差,隨著時間的遷延,最終將發(fā)展成為慢性腎衰竭。研究表明,腎小球腎炎的發(fā)病原因與免疫復(fù)合物介導(dǎo)相關(guān)［2］。中藥黃芪在《本經(jīng)》中記載:主癰疽,久敗瘡,排膿鎮(zhèn)痛,補虛?！度杖A子本草》中記載黃芪:助氣壯筋骨,長肉補血；具有補氣固表、利尿消腫、脫毒排膿、斂瘡生肌的功效。研究表明黃芪具有免疫調(diào)節(jié)作用,可用于治療自身免疫性疾?。?］。筆者在本研究中觀察黃芪注射液聯(lián)合針刺穴位對慢性腎小球腎炎模型大鼠的治療作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF級雄性SD大鼠50只,體質(zhì)量180～200 g,由湖北省實驗動物研究中心提供［許可證號:SCXK(鄂)2008-0005］。

1.2 實驗試劑 牛血清清蛋白(Amresco,批號: 1128S04)、無水乙二胺(批號:110517)、碳二亞胺(批號:25952-53-8)、黃芪注射液(哈爾濱圣泰制藥股份有限公司,規(guī)格:每支10 m L,相當(dāng)于原藥材20 g,批號:20110609)等。

陽離子化牛血清清蛋白溶液制備:稱取適量的陽離子化牛血清清蛋白干粉溶于0.01 mol·L-1磷酸緩沖液(pH7.4)與不完全弗氏佐劑(1∶1)的混合溶液中,混合均勻即得。

1.3 實驗儀器 AU-400生化分析儀(日本奧林巴斯株式會社)、CELL-DYN3700血細胞分析儀(美國雅培公司)、Scan 100尿分析儀(德國COMBI公司)、AB204-S電子分析天平(瑞士梅特勒儀器公司)等。NOV-14高速臺式離心機(德國Eppendorf公司)。

1.4 實驗動物分組與模型的建立 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機分為5組,每組10只。除空白對照組外,其余4組均用陽離子化牛血清清蛋白造模致炎(在大鼠的雙側(cè)腋下、腹股溝多點皮下注射陽離子化牛血清清蛋白溶液,每只2.5 mL。第2周再次注射,操作同第一次,每只2.0 mL。第3周首次尾靜脈注射陽離子化牛血清清蛋白溶液,每只0.5 m L；隔日尾靜脈注射, 1周3次,連續(xù)3周；空白對照組大鼠同期尾靜脈注射同體積的滅菌注射用水,每只0.5 mL),建立慢性腎小球腎炎模型。

1.5 治療方法 造模1周后,藥穴結(jié)合組:每日腹腔注射黃芪注射液1.5 m L,同時針刺單側(cè)足三里穴、腎俞穴,每穴10 min；黃芪組:每日腹腔注射黃芪注射液1.5 mL；穴位組:每日針刺單側(cè)足三里穴、腎俞穴,每穴10 min；模型組:每日正常飼養(yǎng)；空白對照組:每日腹腔注射滅菌注射用水1.5 mL,治療8周。

1.6 標(biāo)本的采集及測定 在造模前、造模成功后和治療各時間點,采集大鼠24 h尿液,用雙縮脲法測定尿蛋白含量；取大鼠眼眶靜脈血,離心10 min (3 000 r·min-1),吸取上層血清,測定血清尿素氮和肌酐含量。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 實驗數(shù)據(jù)采用SPSS16.0版統(tǒng)計軟件處理,結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較用t檢驗,P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠24h尿蛋白含量的變化 在造模前后和治療各時間點,收集各組大鼠的24 h尿液,測定尿蛋白含量,結(jié)果見表1。

由表1可以看出:模型組大鼠在造模后各時間點的尿蛋白均高于同期空白對照組(P<0.01),說明蛋白隨尿液大量排出體外,大鼠濾過功能受到損害；3種治療方法都能降低慢性腎小球腎炎大鼠的24 h尿蛋白含量；隨著治療時間的延長,藥穴結(jié)合組效果最好,黃芪組的效果優(yōu)于穴位組。

2.2 大鼠血清尿素氮和血清肌酐含量的變化 造模后及治療各時間點,取大鼠眼眶靜脈血,離心10 min (3 000 r·min-1),吸取上層血清,測定血清尿素氮含量,結(jié)果見表2。

由表2可以看出:3個治療組和模型組大鼠的血清尿素氮含量和血清肌酐含量均比同期空白對照組高(P<0.05),說明大鼠的腎功能遭到破壞,造模成功；治療至第8周,模型組大鼠的血清尿素氮含量和血清肌酐含量比同期空白對照組高(P<0.01),說明隨著時間推移,腎功能的損害不斷加重；治療第4周起,3個治療組大鼠的血清尿素氮含量和血清肌酐含量均比同期模型組低(P<0.05),說明這3種方法都能降低慢性腎小球腎炎大鼠血清尿素氮和血清肌酐的含量。

3 討論

3.1 慢性腎小球腎炎大鼠模型的選擇 陽離子抗原廣泛應(yīng)用于腎炎的實驗研究中,其機制是腎小球基底膜具有帶負電荷的硫酸類肝素為主要成分的蛋白聚糖,通過電荷吸引帶正電荷的牛血清清蛋白,將其種植在腎小球基底膜上,陽離子化牛血清清蛋白作為非腎抗原,誘發(fā)大鼠產(chǎn)生與之相應(yīng)的抗體,抗原抗體結(jié)合后形成免疫復(fù)合物沉積于腎臟,激活補體系統(tǒng),引起腎臟的微炎癥反應(yīng),導(dǎo)致腎炎的發(fā)生［4-6］,產(chǎn)生類似人類膜性腎病的病理改變和臨床癥狀［7-9］。

表1 5組大鼠24 h尿蛋白含量變化Tab.1 Changes in 24-hour urine protein con tent in 5 groups of rats mg,±s

表1 5組大鼠24 h尿蛋白含量變化Tab.1 Changes in 24-hour urine protein con tent in 5 groups of rats mg,±s

與空白對照組比較,*1P<0.01;與模型組比較,*2P<0.05;與黃芪組和穴位組比較,*3P<0.05;與穴位組比較,*4P<0.05Compared with the blank control group,*1P<0.01;compared with themodel group,*2P<0.05;compared with the astragalus group and acupuncture group,*3P<0.05;compared with the acupuncture group,*4P<0.05

組別大鼠/只造模前造模后治療2周治療4周治療8周藥穴結(jié)合組10 9.00±0.64 34.12±8.27*116.90±6.03*214.74±7.33*211.08±4.31*2*3黃芪組10 8.57±1.01 31.87±9.99*121.35±6.98*214.67±4.50*212.41±3.67*2*4穴位組10 8.42±0.38 32.98±9.39*128.09±6.31*219.86±4.09*215.70±3.92*2模型組10 8.77±0.98 30.8±9.48*135.8±7.98*134.19±8.09*150.24±9.98*1空白對照組10 8.34±1.11 9.01±0.75 8.90±1.08 8.58±1.05 8.36±0.98

表2 5組大鼠血清尿素氮和肌酐的含量變化Tab.2 Changes in content of serum urea nitrogen and creatinine in 5 groups of rats ±s

表2 5組大鼠血清尿素氮和肌酐的含量變化Tab.2 Changes in content of serum urea nitrogen and creatinine in 5 groups of rats ±s

與空白對照組比較,*1P<0.05,*3P<0.01;與模型組比較,*2P<0.05Compared with the blank control group,*1P<0.01,*3P< 0.01;compared with themodel group,*2P<0.05

組別與時間大鼠/只血清尿素氮/ (mmol·L-1)血清肌酐/ (μmol·L-1)藥穴結(jié)合組造模后10 6.08±1.09*161.63±3.63*1治療2周10 4.78±0.89*259.25±4.55治療4周10 4.98±1.09*255.46±6.73*2治療8周10 5.07±1.24*253.36±9.99*2黃芪組造模后10 6.41±1.12*164.37±4.01*1治療2周10 4.81±0.87*260.04±4.98治療4周10 4.90±1.13*256.35±7.36*2治療8周10 5.13±1.29*250.35±8.38*2穴位組造模后10 6.34±0.98*163.35±2.87*1治療2周10 4.79±1.13*259.35±3.75治療4周10 4.50±1.01*253.35±10.02*2治療8周10 5.26±0.98*256.35±8.36*2模型組造模后10 6.80±1.35*160.98±2.53*1治療2周10 6.04±1.08*161.43±3.84*1治療4周10 7.00±1.48*166.02±9.14*1治療8周10 11.67±2.98*386.35±13.57*3空白對照組造模后10 4.02±0.97 54.43±7.34治療2周10 4.21±0.67 55.34±6.87治療4周10 4.18±1.01 56.34±8.34治療8周10 4.36±1.05 57.38±9.01

3.2 黃芪的藥效分析 黃芪對巨噬細胞T淋巴細胞［10］、B淋巴細胞均有調(diào)節(jié)作用,對細胞因子有誘生作用［11］。臨床廣泛用于治療心腦血管、腎臟及病毒性疾?。?2-13］。

大多數(shù)慢性腎小球腎炎的病因和致病機制是體液和細胞免疫介導(dǎo)的微炎癥損傷。鑒于黃芪免疫調(diào)節(jié)作用,筆者采用黃芪注射液治療慢性腎小球腎炎大鼠,觀察治療效果。

3.3 治療穴位的選擇 中醫(yī)學(xué)針刺穴位治療源遠流長。足三里穴為健脾補虛培元之要穴［14-15］,具有調(diào)脾胃、養(yǎng)氣血、扶正壯陽之功,腎俞穴為治腎之要穴,具有益腎填腰、固精補虛、壯陽利濕之功。臨床用于治療由腎虛引起的各種病癥。

基于黃芪藥效作用和足三里穴、腎俞穴的特點,本研究將黃芪注射液和針刺穴位結(jié)合治療慢性腎小球腎炎模型大鼠。結(jié)果顯示,腹腔注射黃芪注射液結(jié)合針刺足三里穴、腎俞穴治療慢性腎小球腎炎大鼠,可降低慢性腎小球腎炎大鼠的24 h蛋白尿含量、血清尿素氮含量及肌酐含量,取得了較好療效。

［1］葉任高,陸再英.內(nèi)科學(xué)[M].6版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2004:542.

［2］KERJASCHKID,COHEN J J,HARRINGTON J T,et al. Molecular pathogenesis of membranous nephropathy[J]. Kidney Int,1992,41(4):1090-1105.

［3］葉任高,陸再英.內(nèi)科學(xué)[M].5版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:528.

［4］UNER A H,TATUM A H,KNUPP C J,et al.Characteristics of autoanti-idiotypic antibodies reactive with antibodies expressing the pathogenic idiotype,in the FL model for lupus nephritis and its parental strains[J].J Autoimmunity,1998,11(3):233-240.

［5］CORNA D,MORIGIM,FACEHINETTID,et al.Mycophenolate mofetil limits renal damage and prolongs life in murine lupus autoimmune disease[J].Kidney Int,1997,51 (5):1583-1589.

［6］MIHARA M,TAKAGIN,URAKAWA K,et al.Preventive effect of a novel antifolate MX-68 inmurine systemic Lupus erythematosus(SLE)[J].Int J Immunopharmaco,1997,19 (2):67-74.

［7］肖少卿.淺談足三里養(yǎng)生保健的意義與應(yīng)用[J].江蘇中醫(yī),1998,19(7):35.

［8］孫亦農(nóng).《靈樞經(jīng)》中足三里的治療作用[J].南京中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1994,10(6):37.

［9］李蘇,徐海榮,焦健慧.針灸足三里、腎俞穴對中老年人IL-2、NO的影響[J].山東中醫(yī)雜志,2002,21(11):669-670.

［10］卞曉云,曹茂紅.小劑量伊曲康唑治療老年真菌感染療效觀察[J].南通醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2001,21(3):17-18.

［11］董揚.黃芪注射液治療小兒腎病綜合征繼發(fā)性免疫功能低下[J].中國中西醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2001,7(5):309-310.

［12］張娟,陳建宗,張金平,等.黃芪甲苷體外抗乙型肝炎病毒的作用[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2007,28(24):2291-2293.

［13］段亞麗,謝梅冬.黃芪化學(xué)成分及其有效成分黃芪甲苷含量測定的研究現(xiàn)狀[J].中國獸藥雜志,2005,39(3): 35.

［14］李歡民,楊麗,高蒿玲.黃芪注射液與西地蘭聯(lián)用治療小兒肺炎并發(fā)心衰[J].山東醫(yī)藥,2001,41(1):33-34.

［15］苗利軍,李敏,韓慧,等.子午流注取穴法穴位注射黃芪液對荷瘤小鼠免疫功能的影響［J］.中醫(yī)研究,1996,9 (1):19.

DOI 10.3870/yydb.2014.01.007

Therapeutic Effect of Astragalus In jection Combined with Acupuncture Treatment for Rats with Chronic Glomerulonephritis

ZENGMing1,CHENG Ying2
(1.Hubei Center for Clinical Laboratory,Wuhan 430064,China;2.Hubei Institute for Food and Drug Control,Wuhan 430064,China)

Objective To investigate the therapeutic effect and mechanism of intraperitoneal(ip)injection of astragalus combined with acupuncture atzusanliandshenshupoints on ratswith chronic glomerulonephritis.MethodsFifty SD ratswere randomly divided into blank control,combination therapy,astragalus injection alone,acupuncture alone and model groups(n=10).Intravenous injection of cationic bovine serum albumin was performed in all groups except the blank control, resulting in a ratmodel of chronic glomerulonephritis.The combination therapy group received daily ip injection of 1.5 mL astragalus(200 g),with needling atzusanliandshenshupoints on one side,each for 10 min.The astragalus group was injected ip with 1.5 mL astragalus(200 g)daily.The acupuncture group was treated with needling atzusanliandshenshupoints at oneside,each for 10 min.Themodel group received normal feeding.The blank controls were injected ip with 1.5 m L sterile water for.Serum creatinine,blood urea nitrogen,and 24 h urine protein were determined.ResultsAll of the blood indexes were lower in the three treatment groups than those in the model one(P<0.05).ConclusionA ll three therapies can slow the progress of chronic glomerulonephritis and protect kidney function.The combination of acupuncture with astragalus injection has the best effect,and astragalus injection alone shows better effect than acupuncture alone.

Astragalus injection;Zusanlipoint;Shenshu point;Glamerulonephritis,chronic

R286;R285.5

A

1004-0781(2014)01-0024-04

2013-02-22

2013-07-05

曾明(1972-),男,湖北江陵人,副主任技師,碩士,從事臨床檢驗工作。電話：027-87279656,E-mail：zmhm21@yahoo.com.cn。