白芍總苷對(duì)非酒精性脂肪性肝病大鼠脂質(zhì)浸潤(rùn)及纖維化的抑制作用*

韓超,鄭琳穎,呂俊華,趙汝霞,周永標(biāo),潘衛(wèi)松

(1.廣州市中醫(yī)醫(yī)院科教信息科,廣州 510130;2.暨南大學(xué)藥學(xué)院,廣州 510632;3.廣州市藥品檢驗(yàn)所,廣州 510160)

白芍總苷對(duì)非酒精性脂肪性肝病大鼠脂質(zhì)浸潤(rùn)及纖維化的抑制作用*

韓超1,鄭琳穎1,呂俊華2,趙汝霞2,周永標(biāo)3,潘衛(wèi)松3

(1.廣州市中醫(yī)醫(yī)院科教信息科,廣州 510130;2.暨南大學(xué)藥學(xué)院,廣州 510632;3.廣州市藥品檢驗(yàn)所,廣州 510160)

目的 研究白芍總苷(TGP)對(duì)果糖-高脂誘導(dǎo)非酒精性脂肪性肝病大鼠(NAFLD)脂質(zhì)浸潤(rùn)及纖維化的作用。方法建立果糖-高脂誘導(dǎo)NAFLD大鼠模型,用藥組分別灌胃給予二甲雙胍(200 mg·kg-1)、TGP大劑量、小劑量(給予TGP 200,100 mg·kg-1);正常對(duì)照組和模型對(duì)照組均灌胃等量純化水(10 mL·kg-1)。4周后,各組大鼠腹主動(dòng)脈取血,檢測(cè)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)活性;空腹血糖(FBG)、三酰甘油(TG)含量;檢測(cè)胰島素(INS)含量,計(jì)算胰島素敏感指數(shù)(ISI)的變化;檢測(cè)游離脂肪酸(FFA),脂肪細(xì)胞因子(Apelin-36)、內(nèi)臟脂肪素(visfatin)、膠原Ⅲ(COLⅢ)及膠原Ⅳ(COLⅣ)的含量;解剖大鼠,取肝臟,測(cè)定肝組織中TG含量,光鏡下觀察肝臟組織病理學(xué)改變。結(jié)果與模型對(duì)照組比較,TGP能有效降低NAFLD大鼠的FBG、Fins含量,提高ISI指數(shù);降低血清和肝組織中TG含量,降低血清ALT、AST活性及FAA、Apelin,visfatin,COLⅢ,COLⅣ含量,結(jié)果均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01);鏡檢顯示TGP能改善NAFLD大鼠肝臟脂質(zhì)浸潤(rùn)及纖維化的病理學(xué)改變。結(jié)論TGP可能通過(guò)改善NAFLD大鼠異常的糖脂代謝及拮抗胰島素抵抗,有效抑制NAFLD大鼠的脂質(zhì)浸潤(rùn)及纖維化。

白芍總苷;果糖;肝病,脂肪性,非酒精性;脂質(zhì)浸潤(rùn);肝纖維化

代謝綜合征(metabolic syndrome,MS)是一組代謝紊亂疾病,其基本特征包括糖代謝異常、胰島素抵抗(insulin resistance,IR)、中心性肥胖、脂代謝紊亂、高血壓等綜合征[1]。大量研究表明,非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)與MS的關(guān)系密切,甚至認(rèn)為NAFLD是MS的一個(gè)臨床特點(diǎn)或肝臟表現(xiàn)[2]。本課題組既往研究顯示,TGP對(duì)IR-脂肪肝有增強(qiáng)胰島素敏感性、降低血脂和保肝的作用[3-4]。大量研究證實(shí),果糖能干擾糖脂代謝,促進(jìn)IR,形成MS;并刺激肝臟脂肪生成,形成NAFLD[5-7]。白芍總苷(total glucosides of paeony,TGP)是從中藥白芍中提取的有效成分。近年藥理研究表明,TGP通過(guò)拮抗氧化應(yīng)激反應(yīng)、調(diào)節(jié)導(dǎo)致疾病產(chǎn)生和發(fā)展的炎癥細(xì)胞因子及影響其相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、調(diào)節(jié)相關(guān)的細(xì)胞凋亡等作用機(jī)制,常用于治療心血管、消化、內(nèi)分泌代謝、皮膚和骨骼系統(tǒng)病變[8]。筆者采用果糖誘導(dǎo)制備NAFLD-MS模型,探討TGP抑制其脂質(zhì)浸潤(rùn)及纖維化的作用及其機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)斯?jié)娎鄹瘛ざ嗬?Sprague Dawley, SD)大鼠,體質(zhì)量150～180 g,6周齡,雌雄各半,購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,生產(chǎn)許可證:SCXK(粵) 2008-0002;使用許可證:SYXK(粵)2008-0084;動(dòng)物飼養(yǎng)于干燥、通風(fēng)、安靜的環(huán)境。

1.2 試藥 白芍總苷膠囊(商品名:帕夫林,寧波立華制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào):H20055058);鹽酸二甲雙胍片(商品名:美迪康,深圳市中聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào):H44024853);果糖(批號(hào):AF10070111-100729-855687,archer daniels midland company);天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)、游離脂肪酸(free fatty acid,FFA)和葡萄糖測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所,批號(hào)分別為20111117, 20111115,20111206,20111222);三酰甘油(triglycerides,TG)測(cè)定試劑盒(北京北化康泰臨床試劑有限公司,批號(hào):20111212);胰島素(INS)放免檢測(cè)試劑盒(北京華英生物技術(shù)研究所,批號(hào):20111227);脂肪細(xì)胞因子(apelin-36),內(nèi)脂素(visfatin),膠原Ⅲ(collagenⅢ,COLⅢ),膠原Ⅵ(collagenⅥ,COLⅥ)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme-linked immuno-sorbent assay, ELISA)試劑盒(美國(guó)Assay公司,批號(hào)分別為R10356-09,E30165,E30458,E30178)。

1.3 儀器 FHS-2A可調(diào)高速組織勻漿機(jī)(金壇市宏華儀器廠);DK-S22型電熱恒溫水浴鍋(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司);TGL-16G型高速冷凍離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);TU-1800紫外-可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器公司);RM2135型切片機(jī)(德國(guó)LEICA公司);NIKON EC30型倒置光學(xué)顯微鏡及COOLPIX99 NIKON數(shù)碼相機(jī)(日本NIKON公司);多功能全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀(美國(guó)BioTelc公司);R-911全自動(dòng)放免計(jì)數(shù)儀(中國(guó)科技大學(xué)實(shí)業(yè)總公司)。

1.4 動(dòng)物造模與分組 取健康SD大鼠60只,雌雄各半,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,按體質(zhì)量隨機(jī)分為正常對(duì)照組和造模組。參考文獻(xiàn)[3-4,9]的方法,并對(duì)方法加以改良,把文獻(xiàn)中飲用10%蔗糖水改為10%果糖水進(jìn)行造模。在造模的第6周末,禁食12 h后,在正常對(duì)照組和造模組各隨機(jī)抽取大鼠2只,取肝臟做病理切片,在光鏡下觀察到正常對(duì)照組肝細(xì)胞、肝索、肝竇均無(wú)明顯的病理變化;造模組肝細(xì)胞明顯腫脹,體積較正常明顯增大,大量肝細(xì)胞出現(xiàn)顆粒、空泡變性,局部肝細(xì)胞出現(xiàn)壞死、核碎裂、溶解,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)充滿大小不等的脂滴,界限不清,肝竇不清,肝索排列絮亂,顯示復(fù)制NAFLD模型成功[10-11]。隨后,把造模組按體質(zhì)量隨機(jī)分為模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(給予二甲雙胍200 mg·kg-1)、白芍總苷大劑量組、小劑量組(給予白芍總苷200,100 mg·kg-1),灌胃給藥,qd,連續(xù)28 d;正常對(duì)照組和模型對(duì)照組均灌胃等容量純化水(10 mL·kg-1)。藥物劑量均根據(jù)藥理試驗(yàn)中動(dòng)物與人體間的等效劑量換算得出。

1.5 標(biāo)本采集及指標(biāo)觀察 用藥第4周末,各組大鼠禁食不禁水12 h,以3%戊巴比妥鈉(20 mg·kg-1)腹腔注射麻醉后,腹主動(dòng)脈取血,3 000 r·min-1(r= 15 cm)離心15 min,分離血清,按照試劑盒說(shuō)明書方法測(cè)定ALT、AST活性;檢測(cè)空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、TG含量;檢測(cè)INS含量,計(jì)算胰島素敏感指數(shù)(insulin-sensitivity index,ISI)的變化;檢測(cè)FAA、apelin和visfatin含量。取新鮮肝左葉用4%甲醛溶液固定,蘇木精-伊紅(hematoxylin and eosin,HE)染色觀察病理組織學(xué)變化。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,計(jì)量資料采用方差分析,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血糖、胰島素及胰島素敏感指數(shù) 與正常對(duì)照組比較,模型對(duì)照組FBG、INS含量顯著升高(P＜0.01), ISI指數(shù)顯著降低(P＜0.01)。與模型對(duì)照組比較,各藥物組均能明顯降低病鼠的FBG和INS(P＜0.01),升高ISI指數(shù)(P＜0.01)。見表1。

2.2 血清和肝組織TG 與正常對(duì)照組比較,模型對(duì)照組血清及肝組織的TG均顯著升高(P＜0.01)。與模型對(duì)照組比較,各藥物組均能明顯降低病鼠的TG (P＜0.05或P＜0.01)。見表2。

2.3 血清相關(guān)酶、細(xì)胞因子及肝指數(shù) 與正常對(duì)照組比較,模型對(duì)照組大鼠血清的ALT,AST水平及FFA、visfatin,COLⅢ,COLⅣ含量均顯著升高(P＜0.01)。與模型對(duì)照組比較,各藥物組均能明顯降低病鼠AST過(guò)高的活性(P＜0.01);降低FFA、Apelin,visfatin,COLⅢ及COLⅣ的含量(P＜0.05或P＜0.01);除白芍總苷小劑量組外,其他藥物組大鼠的ALT活性(P＜0.01)均顯著降低。見表3。

表1 5組大鼠血糖、胰島素及胰島素敏感指數(shù)的測(cè)定結(jié)果Tab.1 Determination results of FBG,INS and ISI in five groups of rats ±s

表1 5組大鼠血糖、胰島素及胰島素敏感指數(shù)的測(cè)定結(jié)果Tab.1 Determination results of FBG,INS and ISI in five groups of rats ±s

與正常對(duì)照組比較,*1P＜0.01;與模型對(duì)照組比較,*2P＜0.01Compared with normal control group,*1P＜0.01;Compared with model control group,*2P＜0.01

ISI正常對(duì)照組10…組別大鼠/只劑量/ (mg·kg-1) FBG/ (mmol·L-1) INS/ (U·L-1) 5.89±1.4911.14±2.10-1.70±0.09模型對(duì)照組10…11.30±2.19*119.32±2.62*1-2.24±0.05*1陽(yáng)性對(duì)照組102005.10±2.00*212.89±2.86*2-1.76±0.09*2白芍總苷大劑量組102004.84±0.82*213.40±3.49*2-1.86±0.12*2小劑量組101005.12±1.23*215.26±3.03*2-2.01±0.11*2

表2 5組大鼠血清和肝組織TG測(cè)定值Tab.2 Determination results of TG in serum and liver tissue in five groups of rats ±s

表2 5組大鼠血清和肝組織TG測(cè)定值Tab.2 Determination results of TG in serum and liver tissue in five groups of rats ±s

與正常對(duì)照組比較,*1P＜0.01;與模型對(duì)照組比較,*2P＜0.01Compared with normal control group,*1P＜0.01;Compared with model control group,*2P＜0.01

組別大鼠/只劑量/ (mg·kg-1)血清TG/ (mmol·L-1)肝組織TG/ (mmol·mg-1)正常對(duì)照組10…0.61±0.120.88±0.13模型對(duì)照組10…0.88±0.09*11.15±0.13*1陽(yáng)性對(duì)照組102000.61±0.32*20.86±0.07*2白芍總苷大劑量組102000.49±0.15*20.78±0.08*2小劑量組101000.58±0.27*20.84±0.04*2

2.4 大鼠肝組織病理學(xué)影響 造模分組后,各組均灌胃給予相應(yīng)藥物干預(yù)治療4周,病理鏡檢顯示:正常對(duì)照組的肝臟結(jié)構(gòu)完整,肝索排列有序,肝索以中央靜脈為中心呈放射狀排列,結(jié)構(gòu)清楚,肝細(xì)胞為單核或雙核,顆粒大小均勻一致,無(wú)明顯的病理變化(圖1A)。模型對(duì)照組肝細(xì)胞明顯腫脹呈圓形,細(xì)胞核被擠向一邊,體積較正常明顯增大,大量肝細(xì)胞出現(xiàn)顆粒、空泡變性,局部肝細(xì)胞出現(xiàn)壞死、核碎裂、溶解,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)充滿大小不等的脂滴,界限不清,肝竇不清,肝索排列紊亂,從中央靜脈向外周方向出現(xiàn)胞質(zhì)淡染,匯管區(qū)有少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)(圖1B)。陽(yáng)性對(duì)照組肝竇清楚,肝索排列較整齊,脂滴減少或消失,匯管區(qū)有少量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(圖1C);白芍總苷大劑量組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)近似于正常對(duì)照組,肝竇清楚,肝索排列較整齊,匯管區(qū)有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(圖1D);白芍總苷小劑量組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)近似于正常對(duì)照組,肝竇清楚,肝索排列較整齊,匯管區(qū)有較多炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(圖1E)。

3 討論

目前,NAFLD的發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚,“二次打擊”是目前廣為接受的關(guān)于NAFLD發(fā)病機(jī)制學(xué)說(shuō)。第一次打擊是指IR,導(dǎo)致大量的FFA和TG在肝臟沉積,形成肝細(xì)胞脂肪變。第二次打擊即氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng),造成肝細(xì)胞損傷和炎癥反應(yīng)[12]。另外, NAFLD意味著內(nèi)臟脂肪的沉積,而內(nèi)臟脂肪被認(rèn)為是內(nèi)分泌器官,能夠分泌多種激素、促炎性細(xì)胞因子和抗炎性因子[13-14],如瘦素、脂聯(lián)素等,均參與了IR的發(fā)生與進(jìn)展。治療NAFLD的首要目標(biāo)是改善IR、糾正代謝紊亂,次要目標(biāo)是減少肝臟脂肪沉積[15]。visfatin是AKBAL等[16]于2005年研究發(fā)現(xiàn)的一種新的具有結(jié)合并激活胰島素受體、發(fā)揮類胰島素樣作用的激素,并通過(guò)旁分泌途徑作用于內(nèi)臟脂肪組織,促進(jìn)脂肪組織的分化合成及積聚;還可誘導(dǎo)多種炎性因子的表達(dá),導(dǎo)致全身或局部炎癥反應(yīng),因此,有研究認(rèn)為,visfatin很可能是一個(gè)重要的前炎性因子。血清visfatin濃度與內(nèi)臟脂肪的數(shù)量有很強(qiáng)的相關(guān)性,但與皮下脂肪關(guān)系不大。還有研究發(fā)現(xiàn),visfatin在NAFLD患者血清中的濃度升高,而在肝硬化患者則含量下降[17],提示降低visfatin可能可阻斷或抑制NAFLD的病情進(jìn)展[18]。

Apelin是孤獨(dú)G蛋白耦聯(lián)受體(APJ)的內(nèi)源性配體,是由脂肪細(xì)胞分泌的一種新的脂肪因子,與IR、肥胖及糖尿病關(guān)系密切[19]。Apelin-APJ系統(tǒng)是具有多種生物學(xué)效應(yīng)生理調(diào)節(jié)肽。Apelin能誘導(dǎo)肥胖大鼠增加肥胖、IR、肝臟氧化應(yīng)激和炎癥的作用,而改善胰島素敏感性后,能恢復(fù)脂肪細(xì)胞Apelin對(duì)胰島素延遲反應(yīng)[20-21]。最近研究結(jié)果表明[22],Apelin含量與NAFLD患者的體質(zhì)量指數(shù)及IR指數(shù)呈正相關(guān)。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)[23],肝臟間質(zhì)的星狀細(xì)胞亦可表達(dá)Apelin,而其受體APJ則由肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞表達(dá)。在肝硬化時(shí),Apelin在肝星狀細(xì)胞表達(dá)明顯增加,提示Apelin在炎癥反應(yīng)和纖維化過(guò)程中發(fā)揮了重要作用[24]。Apelin能促進(jìn)肝硬化動(dòng)脈毛細(xì)血管增殖,而阻斷APJ干預(yù)肝纖維化的進(jìn)程[25-26]。

表3 5組大鼠血清ALT、AST、FFA、Apelin,visfatin,COLⅢ和COLⅣ測(cè)定值Tab.3 Determination results of the serum level of ALT,AST,FFA,Apelin,visfatin,COLⅢand COLⅣin five groups of rats ±s

表3 5組大鼠血清ALT、AST、FFA、Apelin,visfatin,COLⅢ和COLⅣ測(cè)定值Tab.3 Determination results of the serum level of ALT,AST,FFA,Apelin,visfatin,COLⅢand COLⅣin five groups of rats ±s

與正常對(duì)照組比較,*1P＜0.01;與模型對(duì)照組比較,*2P＜0.01,*4P＜0.05;與白芍總苷大劑量組比較,*3P＜0.01Compared with normal control group,*1P＜0.01;Compared with model control group,*2P＜0.01,*4P＜0.05;Compared with high-dose TGP group,*3P＜0.01

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A.正常對(duì)照組;B.模型對(duì)照組;C.陽(yáng)性對(duì)照組;D.白芍總苷大劑量組;E.白芍總苷小劑量組圖1 5組大鼠第10周末肝臟組織病理學(xué)改變(HE,×20)A.normal control group;B.model control group;C.positive control group;D.high-dose TGP group;E.low-dose TGP groupFig.1 Histopathological changes of liver in five groups of rats at the 10thweek(HE,×20)

本課題組前期研究證明,高脂飲食可導(dǎo)致糖脂代謝紊亂、高胰島素血癥、IR、脂肪肝和高血壓[3-4]。果糖代謝不依賴于胰島素,并可致一系列MS疾病,在攝入相同熱量的情況下,攝入果糖更容易導(dǎo)致脂肪沉淀,同時(shí)會(huì)使NAFLD患者肝臟中的果糖激酶和脂肪酸合成酶表達(dá)明顯增加,從而加速果糖的代謝和脂肪酸的合成,促進(jìn)肝臟脂質(zhì)沉積,形成惡性循環(huán)[24,27]。因此,用果糖代替蔗糖進(jìn)行造模,并取得成功。造模結(jié)果顯示,用果糖-高脂誘導(dǎo)造模組大鼠同樣出現(xiàn)糖脂代謝紊亂、高胰島素血癥、IR、肝功能異常和肝脂肪沉積,以及apelin和visfatin含量增高等病變,與高脂、高蔗糖飲食引起的IR、MS疾病及NAFLD的形成類似[10-11,28],而且模型復(fù)制更為明顯和快捷。據(jù)此,筆者認(rèn)為,用果糖代替蔗糖來(lái)造模效果可能更好。目前二甲雙胍是公認(rèn)治療糖尿病的首選藥,臨床上廣泛用于治療NAFLD[29]。二甲雙胍不僅提高胰島素敏感性,通過(guò)直接作用于肝臟胰島素信號(hào),還可通過(guò)改變腸道滲透率和隨后的內(nèi)毒素依賴活化的肝枯否細(xì)胞,干預(yù)果糖誘發(fā)NAFLD,從而保護(hù)肝臟[30]。二甲雙胍還可改善果糖誘發(fā)代謝綜合征大鼠的高血壓病[31]。因此,本組實(shí)驗(yàn)采用二甲雙胍作為NAFLD實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照藥,并證明實(shí)驗(yàn)是成功的。

本研究結(jié)果顯示,白芍總苷和二甲雙胍均可降低NAFLD大鼠的FBG、INS含量,提高ISI,改善胰島素敏感性及異常的糖脂代謝;降低病鼠血清中ALT,AST的活性及FFA、COLⅢ、COLⅣ的含量,降低病鼠血清和肝組織中的TG,從而減輕肝細(xì)胞脂肪沉積,改善肝功能;下調(diào)visfatin和Apelin表達(dá),改善IR、減輕炎癥反應(yīng)、抑制肝纖維化;從肝臟病理組織學(xué)觀察顯示,TGP能減輕肝細(xì)胞炎性細(xì)胞浸潤(rùn),改善脂肪變性,抑制脂質(zhì)浸潤(rùn),有利于肝細(xì)胞和肝組織結(jié)構(gòu)、形態(tài)恢復(fù)正常。由此,筆者推斷,白芍總苷和二甲雙胍抑制果糖-高脂誘導(dǎo)NAFLD大鼠的脂質(zhì)浸潤(rùn)及纖維化作用,可能是藥物通過(guò)改善脂質(zhì)代謝、提高胰島素敏感性、下調(diào)visfatin和Apelin表達(dá),拮抗IR,抑制慢性低度炎癥反應(yīng)等作用的綜合結(jié)果。

[1] FERDER L,FERDER M D,INSERRA F.The role of highfructose corn syrup in metabolic syndrome and hypertension [J].Curr Hypertens Rep,2010,12(2):105-112.

[2] 趙輝,胡濱,于書君,等.代謝綜合征各組分與非酒精性脂肪肝發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2012, 34(6):586-589.

[3] 鄭琳穎,潘競(jìng)鏘,呂俊華.白芍總苷對(duì)脂肪肝大鼠增強(qiáng)胰島素敏感性及抗脂肪肝作用[J].中國(guó)中藥雜志,2008, 33(20):2385-2390.

[4] 馮瑞兒,鄭琳穎,呂俊華,等.白芍總苷對(duì)代謝綜合征-高血壓大鼠改善胰島素敏感性、降壓和抗氧化作用[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2010,15(2):154-159.

[5] LIM J S,MIETUS-SNYDER M,VALENTE A,et al.The role of fructose in the pathogenesis of NAFLD and the metabolic syndrome[J].Nat Rev Gastroenterol Hepatol,2010,7(5): 251-264.

[6] DEKKER M J,SU Q,BAKER C,et al.Fructose:a highly lipogenic nutrient implicated in insulin resistance,hepatic steatosis,and the metabolic syndrome[J].Am J Physiol Endocrinol Metab,2010,299(5):685-694.

[7] YILMAZ Y.Review article:fructose in non-alcoholic fatty liver disease[J].Aliment Pharmcol Ther,2012,35(10): 1135-1144.

[8] 鄭琳穎,潘競(jìng)鏘,呂俊華,等.白芍總苷藥理作用研究[J].廣州醫(yī)藥,2011,42(3):66-69.

[9] SANCHEZ-LOZADA L G,MU W,RONCAL C,et al. Comparison of free fructose and glucose to sucrose in the ability to cause fatty liver[J].Eur J Nutr,2010,49(1):1-9.

[10] 鄭琳穎,潘競(jìng)鏘,楊以琳,等.白芍總苷對(duì)非酒精性脂肪性肝病大鼠Apelin和Visfatin表達(dá)的影響[J].中藥新藥與臨床藥理,2013,24(1):51-54.

[11] 趙汝霞,鄭琳穎,潘競(jìng)鏘,等.白芍總苷對(duì)NAFLD模型大鼠肝臟保護(hù)作用的抗氧化機(jī)制[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào), 2012,28(4):430-434.

[12] 楚藍(lán).非酒精性脂肪肝及其與代謝綜合征關(guān)系的研究進(jìn)展[J].國(guó)外醫(yī)學(xué):衛(wèi)生學(xué)分冊(cè),2009,36(6):383-385.

[13] GNACINSKA M,MALGORZEWICA S,LYSIAK-SZYDLOWSKA W,et al.The serum profile of adipokines in overweightpatientswithmetabolicsyndrome[J]. Endokrynol Pol,2010,61(1):36-41.

[14] WOZNIAK S E,GEE L L,WACHTEL M S,et al.Adipose tissue:the new endocrine organ a review article[J].Dig Dis Sci,2009,54(9):1847-1856.

[15] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組.非酒精性脂肪性肝病診療指南(2010年修訂版)[J].中華肝臟病雜志,2010,18(3):163-166.

[16] AKBAL E,KOCAK E,TAS A,et al.Visfatin levels in nonalcoholic fatty liver disease[J].J Clin Lab Anal,2012, 26(2):115-119.

[17] DE BOER J F,BAHR M J,BOKER K H,et al.Plasma levels of PBEF/Nampt/visfatin are decreased in patients with liver cirrhosis[J].Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2009,296(2):196-201.

[18] CHANG Y C,CHANG T J,LEE W J,et al.The relationship of visfatin/pre-B-cell colony-enhancing factor/nicotinamide phosphoribosyltransferaseinadiposetissuewith inflammation,insulin resistance,and plasma lipids[J]. Metabolism,2010,59(1):93-99.

[19] GARCIA-DIAZ D,CAMPION J,MILAGRO F I,et al. Adiposity dependent apelin gene expression:relationships with oxidative and inflammation markers[J].Mol Cell Biochem,2007,305(1-2):87-94.

[20] GARCIA-DIAZ D F,CAMPION J,ARELLANO A V,et al. Fat intake leads to differential response of rat adipocytes to glucose,insulin and ascorbic acid[J].Exp Biol Med (Maywood),2012,237(4):407-416.

[21] PRINCIPE A,MELGAR-LESMES P,FERNANDEZ-VARO G,et al.The hepatic apelin system:a new therapeutic target for liver disease[J].Hepatology,2008,48(4):1193-1201.

[22] ERCIN C N,DOGRU T,TAPAN S,et al.Plasma apelin levels in subjects with nonalcoholic fatty liver disease[J]. Metabolism,2010,59(7):977-981.

[23] MELGAR-LESMES P,CASALS G,PAUTA M,et al.Apelin mediates the induction of profibrogenic genes in human hepatic stellate cells[J].Endocrinology,2010,151(11): 5306-5314.

[24] SANCHEZ-LOZADA L G,MU W,RONCAL C,et al. Comparison of free fructose and glucose to sucrose in the ability to cause fatty liver[J].Eur J Nutr,2010,49(1):1-9.

[25] YOKOMORI H,ODA M,YOSHIMURA K,et al.Enhanced expressionsofapelinonproliferativehepaticarterial capillaries in human cirrhotic liver[J].Hepatol Res,2012, 42(5):508-514.

[26] REICHENBACH V,ROS J,FERNANDEZ-VARO G,et al. Prevention of fibrosis progression in CCl4-treated rats:role of the hepatic endocannabinoid and apelin systems[J].J Pharmacol Exp Ther,2012,340(3):629-637.

[27] SAMUEL V T.Fructose induced lipogenesis:from sugar to fat to insulin resistance[J].Trends Endocrinol Metab, 2011,22(2):60-65.

[28] LIM J S,MIETUS-SNYDER M,VALENTE A,et al.The role of fructose in the pathogenesis of NAFLD and the metabolic syndrome[J].Nat Rev Gastroenterol Hepatol,2010,7(5): 251-264.

[29] BARBERO-BECERRA V J,SABTIAGO-HERNANDEZ J J, VILLEGAS-LOPEZ F A,et al.Mechanisms involved in the protective effects of metformin against nonalcoholic fatty liver disease[J].Curr Med Chem,2012,19(18):2918-2923.

[30] SPRUSS A,KANURIG,STAHL C,et al.Metformin protects against the development of fructose-induced steatosis in mice:role of the intestinal barrier function[J].Lab Invest, 2012,92(7):1020-1032.

[31] PUYO A M,BORRONI J S,BOUDOU S,et al.Metformin reduces vascular production of vasoconstrictor prostanoids in fructose overloaded rats[J].Auton Autacoid Pharmacol, 2012,32(1 Pt 2):9-14.

DOI 10.3870/yydb.2014.10.010

Inhibitory Effects of Total Glucosides of Paeony on Lipid Infiltration and Fibrosis in NAFLD Rats Induced by Fructose and High-fat Diet

HAN Chao1,ZHENG Lin-ying1,LYU Jun-hua2,ZHAO Ru-xia2,ZHOU Yong-biao3,PAN Wei-song3
(1. Department of Information,Guangzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine,Guangzhou 510130,China;2. Pharmacological College of Jinan University,Guangzhou 510632,China;3.Guangzhou Institute of Drugs Inspection,Guangzhou 510160,China)

ObjectiveTo investigate the effect of total glucosides of paeong(TGP)on the liver lipid infiltration and fibrosis in rats with non-alcoholic fatty liver disease(NAFLD)induced by fructose and high-fat diet.MethodsFructose-highfatty induced NAFLD rat model was established.Metformin(MET,200 mg·kg-1)and TGP(200,100 mg·kg-1)was intragastrically given to the rats in the treatment group,TGP high dose and low dose group,respectively.Normal control group and model control group was intragastrically treated with equivalent distilled water(10 mL·kg-1).At the fourth week after the treatment,all the rats were sacrificed and the indices such as serum fasting blood glucose(FBG),INS,insulin sensitivity index (ISI),triglycerides(TG),apelin-36,visfatin,alanine aminotransferase(ALT),aspartate aminotransferase(AST),free fatty acid (FFA),collagenⅢ(COLⅢ),collagenⅣ(COLⅣ)were determined.Hepatic content of TG was determined and the pathological changes in the liver tissues were observed under the microscope.ResultsAs compared with the model control group,TGP effectively decreased FBG,INS,TG in serum and liver tissues,activity of ALT and AST in serum and content of FAA,Apelin, Visfatin,COLⅢand COLⅣ,with significant differences(P＜0.05 orP＜0.01).TGP alleviated lipid infiltration and fibrosis in rat liver tissues.ConclusionTGP can inhibit effectively lipid infiltration and fibrosis of NAFLD rats,probably through improving glucolipid metabolism and antogonizing insulin resistance.

Total glucosides of paeong;Fructose;Liver disease,fatty,nonalcoholic;Lipid infiltration;Liver fibrosis

R965

A

1004-0781(2014)10-1294-06

2013-10-24

2013-12-24

*廣州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2010Y1-C491);廣州市中醫(yī)藥中西醫(yī)結(jié)合科技項(xiàng)目(2009-A-10)

韓超(1973-),女,海南文昌人,副主任藥師,學(xué)士,研究方向:從事中藥學(xué)及實(shí)驗(yàn)藥理學(xué)研究。電話:020-81226220,E-mail:wendyhan@163.com。