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    從竹葉中同步提取多糖、茶多酚和黃酮的研究

    2014-05-14 11:01:30王文淵張航航周振華楊春華張蕓蘭
    應(yīng)用化工 2014年5期
    關(guān)鍵詞:脈沖數(shù)竹葉茶多酚

    王文淵,張航航,周振華,2,楊春華,張蕓蘭

    (1.湖南永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院,湖南永州 425100;2.中南大學(xué) 藥學(xué)院,湖南 長沙 410013)

    竹葉中含有竹葉黃酮、茶多酚、多糖、特種氨基酸以及活性肽、錳、鋅、曬等微量元素。竹葉茶多酚、黃酮和竹葉多糖具有抗氧化、抗衰老、防輻射、抗癌變、增強(qiáng)免疫力、降血脂和膽固醇、抗動脈硬化以及抑菌等多種生理功能和作用[1],是醫(yī)藥、食品、保健品及日化用品等優(yōu)質(zhì)安全的基料或功能性添加劑[2],應(yīng)用前景廣闊,竹葉也因此被國家衛(wèi)生部批準(zhǔn)列入藥食兩用的天然植物名單。

    從竹葉中提取這些活性成分,目前大都采用溶劑浸提、超聲提取或超臨界萃取等方法,但這些方法存在原料利用率低、生產(chǎn)周期長、能耗高或溶劑殘留等問題,妨礙了竹葉中各種功能性成分的高效開發(fā)與利用。高壓脈沖電場技術(shù)作為一種高效節(jié)能的非熱處理技術(shù),通過細(xì)胞膜穿孔效應(yīng)來增大細(xì)胞膜的通透性,從而促進(jìn)生物活性成分的滲出,具有溫升小、能耗低、傳遞快速、均勻、安全等特點。

    本文采用高壓脈沖電場技術(shù),成功地從竹葉中同步提取了竹葉黃酮、竹葉茶多酚和竹葉多糖3種活性成分,為充分利用竹葉中的生物活性成分,實現(xiàn)竹葉資源的綜合利用和效益最大化提供指導(dǎo)。

    1 實驗部分

    1.1 材料與儀器

    竹葉,自采,經(jīng)永州市藥檢所王明榮教授鑒定為楠竹葉,采后漂洗晾干、烘干、粉碎,過250 μm篩后于4℃冷藏備用;蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所);葡萄糖對照品(上海士鋒生物科技公司);其他試劑均為分析純。

    LDT-100/4-25型中藥高壓脈沖電場提取裝置;SY-MU2010超濾/微濾系統(tǒng);FZ-102微型中草藥植物粉碎機(jī);2-16PK高速冷凍離心機(jī);UV1601-PC紫外-可見分光光度計;M-50真空抽濾器。

    1.2 實驗方法

    竹葉中竹葉黃酮、多酚和多糖的提取工藝見圖1。

    圖1 竹葉黃酮、多酚和多糖的提取工藝流程圖Fig.1 Process flow diagram on extraction

    1.3 分析方法

    茶多酚的測定采用 GB 8313—1987方法[3],總黃酮含量的測定按文獻(xiàn)[4]的方法,多糖的測定采用文獻(xiàn)[5]的方法。各提取成分的提取率按下式計算:提取率=(提取成分的質(zhì)量/竹葉粉末質(zhì)量)×100%。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 電場強(qiáng)度對提取率的影響[6]

    在脈沖數(shù)為8,料液比1∶12(g/mL),EDTA緩沖液pH 8.5的條件下,電場強(qiáng)度對竹葉黃酮、茶多酚與多糖提取率的影響見圖2。

    圖2 電場強(qiáng)度對竹葉黃酮、茶多酚和多糖提取率的影響Fig.2 Influence of electric field intensity on extraction

    由圖2可知,當(dāng)脈沖電場強(qiáng)度從12 kV/cm增加到24 kV/cm時,竹葉黃酮、茶多酚和多糖的提取率均逐漸增大,這是因為電場強(qiáng)度增強(qiáng),細(xì)胞膜的通透性提高,活性成分釋放能力增強(qiáng)。電場強(qiáng)度超過24 kV/cm后,黃酮提取率趨于穩(wěn)定,說明細(xì)胞膜、細(xì)胞壁已經(jīng)被不可逆擊穿,黃酮類成分滲出趨于完全,而茶多酚和多糖的提取率開始有所下降。因此電場強(qiáng)度選定24 kV/cm較為適宜。

    2.2 EDTA緩沖液pH對提取率的影響[7]

    在脈沖數(shù)為8,料液比1∶12(g/mL),電場強(qiáng)度24 kV/cm,改變提取介質(zhì)EDTA緩沖液的pH,進(jìn)行高壓脈沖電場提取,測定竹葉黃酮、茶多酚與多糖的提取率,結(jié)果見圖3。

    圖3 緩沖液pH、茶多酚和多糖提取率的影響Fig.3 Influence of buffer solution pH on extraction

    由圖3可知,緩沖液pH從5.0提高至9.0時,竹葉黃酮、茶多酚與多糖的提取率均隨緩沖液pH的增大而增加。竹葉茶多酚和竹葉多糖的提取率分別在pH 8.0和9.0處達(dá)到最大值,竹葉黃酮的提取率在pH 9.0之后仍呈上升趨勢,但增加緩慢。故EDTA緩沖液的pH選擇8.0~9.0。

    2.3 料液比對提取率的影響

    在脈沖數(shù)為8,電場強(qiáng)度24 kV/cm,緩沖液pH 8.5的條件下,料液比對竹葉黃酮、茶多酚與多糖提取率的影響見圖4。

    圖4 料液比對竹葉黃酮、茶多酚和多糖提取率的影響Fig.4 Influence of solid/liquid ratio on extraction

    由圖4可知,竹葉黃酮、茶多酚與多糖的提取率均隨著料液比的增大而提高,料液比超過1∶16,竹葉黃酮與竹葉茶多酚的提取率緩慢攀升;因為竹葉多糖的溶出性能較好,料液比達(dá)到1∶12時,提取率已趨于穩(wěn)定,所以料液比以1∶12~1∶16為宜。

    2.4 脈沖數(shù)對提取率的影響[8]

    在電場強(qiáng)度24 kV/cm,EDTA緩沖液pH 8.5,料液比1∶14(g/mL)的條件下,脈沖數(shù)對竹葉黃酮、茶多酚與多糖提取率的影響見圖5。

    圖5 脈沖數(shù)對竹葉黃酮、茶多酚和多糖提取率的影響Fig.5 Influence of pulse number on extraction

    由圖5可知,脈沖數(shù)由2增至8時,竹葉黃酮的提取率快速提高并達(dá)到最大值,而茶多酚提取率在脈沖數(shù)為10時達(dá)到最大,之后隨著脈沖數(shù)的進(jìn)一步增大,黃酮與茶多酚的提取率都開始減小。這可能是脈沖頻率太大,容易導(dǎo)致被提取物結(jié)構(gòu)的破壞,從而使得提取率降低[9]。但竹葉多糖的提取率一直隨著脈沖數(shù)的增大呈上升趨勢,脈沖數(shù)>10時,提取率提高緩慢。綜合考慮,脈沖數(shù)以8~10個為宜。

    2.5 正交實驗

    根據(jù)單因素實驗的結(jié)果,對電場強(qiáng)度、脈沖數(shù)、緩沖液pH、料液比4個因素進(jìn)行L9(34)正交實驗,水平設(shè)計及實驗結(jié)果見表1。

    表1 正交實驗結(jié)果Table 1 Results of L9(34)orthogonal test

    續(xù)表

    由表1可知,影響黃酮提取率的因素主次為電場強(qiáng)度>料液比>緩沖液pH>脈沖數(shù),提取黃酮的工藝以A3B3C3D3組合最佳;影響多糖提取的各因素主次為電場強(qiáng)度>緩沖液pH>料液比>脈沖數(shù),提取多糖條件以A3B2C3D3組合最佳;影響茶多酚提取的各因素主次順序為電場強(qiáng)度>緩沖液pH>脈沖數(shù)>料液比,提取茶多酚以A3B3C2D3組合工藝最優(yōu);各因素對提取總量的影響大小依次為電場強(qiáng)度>緩沖液pH>料液比>脈沖數(shù),從提取總量出發(fā),提取工藝以A3B2C3D3組合最佳??墒侵袢~黃酮、茶多酚和多糖以及總提取率的最佳提取條件在9個實驗號中都未出現(xiàn),故于各自的最佳組合工藝條件下進(jìn)行3次平行實驗,取平均值,結(jié)果見表2。

    表2 最佳組合工藝條件下的實驗結(jié)果Table 2 Results under optimum condition combination process

    由表2可知,按各自的最佳工藝進(jìn)行提取,竹葉黃酮、多糖和茶多酚的提取率以及總提取率均比正交實驗中最優(yōu)值高。因此,可以確定高壓脈沖電場提取竹葉中各活性成分的最優(yōu)工藝條件。提取黃酮的最優(yōu)工藝是電場強(qiáng)度26 kV/cm,脈沖數(shù)10個,料液比1∶16(g/mL),緩沖液pH 9.0;提取多糖的最優(yōu)工藝是電場強(qiáng)度26 kV/cm,脈沖數(shù)9個,料液比1∶16(g/mL),緩沖液pH 9.0;提取竹葉茶多酚的最優(yōu)工藝是電場強(qiáng)度26 kV/cm,脈沖數(shù)10個,料液比1 ∶14(g/mL),緩沖液 pH 9.0。

    表3 總提取率的方差分析Table 3 Variance analysis for orthogonal test

    由表3可知,電場強(qiáng)度、EDTA緩沖液pH和料液比對總提取率均有顯著影響,而脈沖數(shù)無顯著影響,從能耗和成本考慮,脈沖數(shù)可取B1水平。因此,從提取總量來考慮,最佳提取工藝是A3B1C3D3,即電場強(qiáng)度26 kV/cm,脈沖數(shù)8個,料液比1∶16(g/mL),緩沖液 pH 9.0。

    2.6 與傳統(tǒng)水浸提法的比較

    高壓脈沖電場法與傳統(tǒng)水浸提法單獨(dú)提取竹葉多糖、乙醇超聲浸提茶多酚[10]、微波輔助提取竹葉黃酮[11]比較,竹葉黃酮與竹葉多糖的提取率分別提高了25.1%和31.6%,但竹葉多酚的提取率則降低了2.4%,這與王白娟等[12]的實驗結(jié)果趨于一致,原因是酚酸類成分經(jīng)過高壓脈沖電場處理,部分結(jié)構(gòu)破壞,致使有小部分的損失。

    3 結(jié)論

    高壓脈沖電場法提取竹葉黃酮、竹葉茶多酚與竹葉多糖,各成分提取的最優(yōu)工藝條件是:黃酮:電場強(qiáng)度26 kV/cm,脈沖數(shù)10個,料液比1∶16,緩沖液pH 9.0;多糖:電場強(qiáng)度26 kV/cm,脈沖數(shù)9個,料液比1∶16,緩沖液 pH 9.0;茶多酚:電場強(qiáng)度26 kV/cm,脈沖數(shù)10個,料液比1∶14,緩沖液 pH 9.0;提取總量:電場強(qiáng)度26 kV/cm,脈沖數(shù)8個,料液比1 ∶16,緩沖液pH 9.0。

    [1]李飛躍,喻國光,陳金珠,等.竹葉主要化學(xué)成分分析及其生物活性研究現(xiàn)狀[J].江西林業(yè)科技,2006(4):34-36.

    [2]王文淵,唐守勇,黃光文,等.茶多酚的超濾分離及其在化妝品中的應(yīng)用[J].日用化學(xué)工業(yè),2011,41(2):109-112.

    [3]全國食品工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會.GB 8313—87茶多酚測定[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,1987.

    [4]李建,王四維.楠竹葉中黃酮類化合物分離純化工藝研究[J].糧油食品科技,2009,17(4):29-32.

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    [6]殷涌光,金哲雄,王春利,等.茶葉中茶多糖茶多酚茶咖啡堿的高壓脈沖電場快速提?。跩].食品與機(jī)械,2007,23(2):12-14.

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    [10]王文淵,黃光文,龍紅萍,等.竹葉中茶多酚的提取及其抗氧化性研究[J].香料香精化妝品,2011(2):24-28.

    [11]陳瑛,王文淵.微波輔助提取竹葉黃酮的研究[J].食品工程,2011(1):30-33.

    [12]王白娟,蔣明忠,白玉艷.高壓脈沖電場對普洱茶中茶多酚含量的影響[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報,2013,26(3):1207-1210.

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