青陽參中C₂₁甾體成分研究

李祥+張敉+向誠+秦誼+何靜+李寶才+李鵬

[摘要] 該文用硅膠，ODS，MCI柱色譜和半制備型HPLC等方法對(duì)青陽參的氯仿萃取中含有的C₂₁甾體類成分進(jìn)行了系統(tǒng)的分離純化研究，并結(jié)合波譜數(shù)據(jù)對(duì)該類成分進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確認(rèn)。從青陽參氯仿萃取物分離到11個(gè)C₂₁甾體類化合物，分別為青陽參苷乙（1），告達(dá)亭-3-O-β-D-加拿大麻吡喃糖基-（1→4）-β-D-夾竹桃吡喃糖基-（1→4）-β-D-加拿大麻吡喃糖基-（1→4）-β-D-加拿大麻吡喃糖苷（2），告達(dá)亭-3-O-β-D-夾竹桃吡喃糖基-（1→4）-β-D-夾竹桃吡喃糖基-（1→4）-β-D-加拿大麻吡喃糖基-（1→4）-β-D-加拿大麻吡喃糖苷（3），告達(dá)亭-3-O-β-D-夾竹桃吡喃糖基-（1→4）-β-D-毛地黃毒吡喃糖基-（1→4）-β-D-加拿大麻吡喃糖苷（4），青陽參苷O（5），加加明-3-O-β-D-夾竹桃吡喃糖基-（1→4）-β-D-加拿大麻吡喃糖基-（1→4）-β-D-加拿大麻吡喃糖苷（6）， sinomarinoside B（7），mucronatosides C（8），wallicoside J（9），stephanoside H（10），青陽參苷元-3-O-β-D-夾竹桃吡喃糖基-（1→4）-β-D-加拿大麻吡喃糖基-（1→4）-β-D-毛地黃毒吡喃糖苷（11）。 除化合物1，4和5外其他成分均為首次從該植物中分離得到的C₂₁甾體類化合物。

[關(guān)鍵詞] 青陽參； C₂₁甾體；青陽參苷乙

[收稿日期] 2013-10-23

[基金項(xiàng)目] 國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31160065）

[通信作者] 李寶才，教授，博士，研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物開發(fā)利用，E-mail： baocaili@hotmail.com；李鵬，助理教授，博士，研究方向中藥活性評(píng)價(jià)及質(zhì)量控制，E-mail：pli1978@hotmail.com

[作者簡介] 李祥，碩士研究生， E-mail：xiangliam@163.com

青陽參Cynanchum otophyllum Schneid為蘿藦科鵝絨藤屬植物主要分布于我國西南部，是著名的云南民間藥物。其藥用部位為根部，具有祛風(fēng)濕、益腎健脾之功效，主要用于治療風(fēng)濕痹疼、腎虛腰疼、腰肌勞損、蛇犬咬傷等[1]。在云南納西族和白族地區(qū)，青陽參主要用于治療癲癇[2]。目前青陽參的氯仿提取物已開發(fā)成為治療癲癇的上市藥物，其主要有效成分為C₂₁甾體類化合物[3-4]。20世紀(jì)80年代至今，木全章、趙益斌等人先后從青陽參中分離得到40多個(gè)C₂₁甾體類化合物[4-8]。國內(nèi)有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)：青陽參有明顯的抗癲癇作用，且具有作用時(shí)間持久、副作用少，與其他抗驚厥藥聯(lián)用無明顯不良反應(yīng)的特點(diǎn)，對(duì)頑固性癲癇大發(fā)作不失為一個(gè)有前途的新的抗癲癇藥，其中青陽參苷甲和青陽參苷乙是青陽參中抗癲癇的活性成分之一[9]。但總的來說，青陽參植物抗癲癇的活性成分研究仍集中在總提取物或有效部位（如總苷）層面。為進(jìn)一步明確其中單體活性成分，本論文采用多種分離方法從其根部的氯仿萃取物中分離并鑒定出11 個(gè)C₂₁甾體類化合物。除化合物1，4和5外其他成分均為首次從青陽參植物中分離到。

1 材料

BRUKER DRX-500型核磁共振儀內(nèi)標(biāo)物為TMS；柱色譜硅膠（100～200，200～300目）和薄層色譜硅膠GF254均為青島海洋化工廠產(chǎn)品。顯色劑為10%的硫酸-乙醇。半制備HPLC為LC 3000液相色譜儀；半制備柱為Zorbax SB-C₁₈（9.4 mm × 250 mm，0.5 μm）。 青陽參藥材購自昆明市菊花村中藥材市場并由云南省中醫(yī)中藥研究所郭世民研究員鑒定為青陽參C. otophyllum的干燥塊根。

2 提取與分離

青陽參干燥根9.0 kg粉碎后用75%乙醇在80 ℃水浴中回流提取3次每次4 h。濾液濃縮成浸膏加水混懸依次用石油醚脫、氯仿萃取得到氯仿萃取物240.0 g。取氯仿萃取物200.0 g經(jīng)硅膠柱色譜（氯仿-甲醇40∶1～10∶1）得到Fr.1（40.0 g），F(xiàn)r.2（55.0 g），F(xiàn)r.3（62.0 g）和Fr.4（30.0 g）。 Fr.1（6.0 g）經(jīng)MCI柱色譜（甲醇-水85∶15～80∶20）得到Fr.1a，F(xiàn)r.1b，F(xiàn)r.1c和Fr.1d。 Fr.1a經(jīng)半制備HPLC（甲醇-水85∶15）得到3（21.4 mg，t_R=8.5 min）。 Fr.1c經(jīng)ODS柱色譜（甲醇-水83∶17）得到Fr.1c1，F(xiàn)r.1c2和Fr.1c3其中Fr.1c2經(jīng)半制備HPLC（甲醇-水82∶18）得到1（10.5 mg，t_R=16.4 min）和4（14.0 mg，t_R=25.4 min）。 Fr.2（6.0 g）經(jīng)MCI柱色譜（甲醇-水83∶17）得到Fr.2a，F(xiàn)r.2b和Fr.2c。Fr.2a經(jīng)半制備HPLC（甲醇-水81∶19）得到2（30.4 mg，t_R=20.8 min）。Fr.2b經(jīng)ODS柱色譜（甲醇-水81∶19）得到Fr.2b1和Fr.2b2。 Fr.2b1經(jīng)半制備HPLC（甲醇-水81∶19）得到6（12.5 mg，t_R=18.5min）。 Fr.2b2 經(jīng)半制備HPLC（甲醇-水79∶21）得到7（32.5 mg，t_R=32.4 min）和9（8.8 mg，t_R=27.8 min）。 Fr.3（5.0 g）經(jīng)ODS柱色譜（甲醇-水80∶20～75∶25）得到Fr.3a，F(xiàn)r.3b，F(xiàn)r.3c 和 Fr.3d。Fr.3a經(jīng)ODS柱色譜（甲醇-水79∶21）得到Fr.3a1和Fr.3a2。Fr.3a2經(jīng)半制備HPLC（甲醇-水78∶22）得到5（20.6 mg，t_R=29.7 min）。 Fr.3b經(jīng)半制備HPLC（甲醇-水78∶22）得到10（33.6 mg，t_R=35.4 min）。 Fr.3c經(jīng)半制備HPLC（甲醇-水77∶23）得到8（9.6 mg，t_R=27.4 min）和11（30.1 mg，t_R=29.8 min）。endprint

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 白色不定型粉末；¹H-NMR（CDCl₃，500 MHz）δ：3.53（1H，m，H-3），5.35（1H，s，H-6），4.53（1H，m，H-12），1.39（3H，s，H-18），1.11（3H，s，H-19），2.15（3H，s，H-21），5.50（1H，s，H-2′），2.34（1H，m，H-4′），1.05（3H，s，H-5′），1.04（3H，s，H-6′），2.11（3H，s，H-7′），4.83（1H，d，J=9.5 Hz，H-1″），3.80（1H，m，H-3″），3.20（1H，m，H-4″），3.86（1H，m，H-5″），1.20（3H，d，J=4.0 Hz，H-6″），3.43（3H，s，H-7″），4.74（1H，d，J=9.5 Hz，H-1），3.79（1H，m，H-3），3.22（1H，m，H-4），3.84（1H，m，H-5），1.21（3H，d，J= 4.0 Hz，H-6），3.43（3H，s，H-7），4.48（1H，d，J=10.0 Hz，H-1″″），3.17（1H，m，H-3″″），3.12（1H，m，H-4″″），3.28（1H，m，H-5″″），1.30（3H，d，J=4.0 Hz，H-6″″），3.37（3H，s，H-7″″）；¹³C-NMR（CDCl₃，125 MHz）δ： 38.7（C-1），28.8（C-2），77.8（C-3），38.7（C-4），140.6（C-5），117.6（C-6），34.2（C-7），74.2（C-8），43.6（C-9），37.1（C-10），24.2（C-11），71.5（C-12），57.9（C-13），88.0（C-14），33.0（C-15），31.8（C-16），91.5（C-17），9.4（C-18），18.5（C-19），208.9（C-20），27.2（C-21），166.9（C-1′），112.9（C-2′），165.9（C-3′），38.1（C-4′），20.9（C-5′），20.8（C-6′），16.5（C-7′），96.0（C-1″），35.4（C-2″），76.9（C-3″），82.4（C-4″），68.3（C-5″），18.2（C-6″），58.1（C-7″），99.6（C-1），35.3（C-2），76.9（C-3），82.4（C-4），68.3（C-5），18.2（C-6），58.0（C-7），101.4（C-1″″），35.2（C-2″″），80.5（C-3″″），75.3（C-4″″），71.5（C-5″″），18.0（C-6″″），56.3（C-7″″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]對(duì)照鑒定該化合物為青陽參苷元乙。

化合物2 白色不定型粉末；¹H-NMR（CDCl₃，500 MHz）δ：3.56（1H，m，H-3），5.35（1H，s，H-6），4.53（1H，m，H-12），1.36（3H，s，H-18），1.11（3H，s，H-19），2.11（3H，s，H-21），5.50（1H，s，H-2′），2.34（1H，m，H-4′），1.05（3H，s，H-5′），1.04（3H，s，H-6′），2.15（3H，s，H-7′），4.86（1H，d，J=9.5 Hz，H-1″），3.78（1H，m，H-3″），3.21（1H，m，H-4″），3.86（1H，m，H-5″），1.20（3H，d，J= 4.0 Hz，H-6″），3.43（3H，s，H-7″），4.73（1H，d，J= 9.5 Hz，H-1），3.79（1H，m，H-3），3.21（1H，m，H-4），3.85（1H，m，H-5），1.20（3H，d，J= 4.0 Hz，H-6），3.43（3H，s，H-7），4.44（1H，d，J=10.0 Hz，H-1″″），3.26（1H，m，H-3″″），3.15（1H，m，H-4″″），3.35（1H，m，H-5″″），1.28（3H，d，J=4.5 Hz，H-6″″），3.39（3H，s，H-7″″），4.84（1H，d，J=9.5 Hz，H-1″），3.61（1H，m，H-3″），3.20（1H，m，H-4″），3.55（1H，m，H-5″），1.28（3H，d，J=4.0 Hz，H-6″），3.41（3H，s，H-7″）；¹³C-NMR（CDCl₃，125 MHz）δ：38.7（C-1），28.8（C-2），77.8（C-3），38.6（C-4），140.7（C-5），117.6（C-6），34.2（C-7），74.2（C-8），43.6（C-9），37.1（C-10），24.2（C-11），72.3（C-12），57.9（C-13），88.0（C-14），33.0（C-15），31.8（C-16），91.5（C-17），9.4（C-18），18.5（C-19），208.9（C-20），27.2（C-21），166.9（C-1′），112.9（C-2′），165.9（C-3′），38.1（C-4′），21.0（C-5′），20.9（C-6′），16.5（C-7′），96.0（C-1″），35.4（C-2″），77.0（C-3″），82.5（C-4″），68.5（C-5″），18.2（C-6″），58.2（C-7″），99.6（C-1），35.4（C-2），76.9（C-3），82.4（C-4），68.3（C-5），18.2（C-6），58.0（C-7），101.3（C-1″″），36.2（C-2″″），78.8（C-3″″），82.1（C-4″″），71.0（C-5″″），18.2（C-6″″），56.4（C-7″″），98.2（C-1″），33.7（C-2″），77.4（C-3″），71.5（C-4″），71.0（C-5″），18.2（C-6″），57.1（C-7″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]對(duì)照鑒定該化合物為告達(dá)亭-3-O-β-D-加拿大麻吡喃糖基-（1→4）-β-D-夾竹桃吡喃糖基-（1→4）-β-D-加拿大麻吡喃糖基-（1→4）-β-D-加拿大麻吡喃糖苷。endprint

化合物3 白色不定型粉末；¹H-NMR（CDCl₃，500 MHz）δ：3.53（1H，m，H-3），5.33（1H，s，H-6），4.50（1H，m，H-12），1.37（3H，s，H-18），1.09（3H，s，H-19），2.14（3H，s，H-21），5.48（1H，s，H-2′），2.30（1H，m，H-4′），1.03（3H，s，H-5′），1.01（3H，s，H-6′），2.09（3H，s，H-7′），4.80（1H，d，J=10.0 Hz，H-1″），3.77（1H，m，H-3″），3.19（1H，m，H-4″），3.81（1H，m，H-5″），1.18（3H，d，J=4.5 Hz，H-6″），3.41（3H，s，H-7″），4.71（1H，d，J=9.5 Hz，H-1），3.78（1H，m，H-3），3.20（1H，m，H-4），3.83（1H，m，H-5），1.18（3H，d，J=4.0 Hz，H-6），3.40（3H，s，H-7），4.42（1H，d，J=10.0 Hz，H-1″″），3.29（1H，m，H-3″″），3.17（1H，m，H-4″″），3.27（1H，m，H-5″″），1.31（3H，d，J=4.5 Hz，H-6″″），3.36（3H，s，H-7″″），4.68（1H，d，J=9.5 Hz，H-1″），3.16（1H，m，H-3″），3.13（1H，m，H-4″），3.28（1H，m，H-5″），1.35（3H，d，J=4.0 Hz，H-6″），3.36（3H，s，H-7″）；¹³C-NMR（CDCl₃，125 MHz）δ：38.7（C-1），28.8（C-2），77.8（C-3），38.6（C-4），140.5（C-5），117.8（C-6），34.1（C-7），74.2（C-8），43.6（C-9），37.0（C-10），24.2（C-11），71.6（C-12），57.8（C-13），88.0（C-14），33.0（C-15），31.8（C-16），91.4（C-17），9.3（C-18），18.4（C-19），208.9（C-20），27.1（C-21），166.8（C-1′），112.8（C-2′），165.9（C-3′），38.1（C-4′），20.8（C-5′），20.8（C-6′），16.4（C-7′），96.0（C-1″），35.4（C-2″），77.0（C-3″），82.4（C-4″）， 68.2（C-5″），18.1（C-6″），57.9（C-7″），99.6（C-1），35.4（C-2），76.9（C-3），82.3（C-4），68.5（C-5），18.3（C-6），58.1（C-7），101.3（C-1″″），36.1（C-2″″），79.0（C-3″″），82.1（C-4″″），71.9（C-5″″），18.1（C-6″″），56.5（C-7″″），100.1（C-1″），35.4（C-2″），80.0（C-3″），75.3（C-4″），70.9（C-5″），17.9（C-6″），56.3（C-7″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]對(duì)照鑒定該化合物為告達(dá)亭-3-O-β-D-夾竹桃吡喃糖基-（1→4）-β-D-夾竹桃吡喃糖基-（1→4）-β-D-加拿大麻吡喃糖基-（1→4）-β-D-加拿大麻吡喃糖苷。

化合物4 白色不定型粉末；¹H-NMR（CDCl₃，500 MHz）δ：3.57（1H，m，H-3），5.37（1H，s，H-6），4.56（1H，m，H-12），1.42（3H，s，H-18），1.13（3H，s，H-19），2.18（3H，s，H-21），5.53（1H，s，H-2′），2.36（1H，m，H-4′），1.08（3H，s，H-5′），1.06（3H，s，H-6′），2.13（3H，s，H-7′），4.83（1H，d，J=9.5 Hz，H-1″），3.82（1H，m，H-3″），3.23（1H，m，H-4″），3.93（1H，m，H-5″），1.23（3H，d，J=4.0 Hz，H-6″），3.47（3H，s，H-7″），4.93（1H，d，J=10.0 Hz，H-1），4.26（1H，m，H-3），3.18（1H，m，H-4），3.78（1H，m，H-5），1.25（3H，d，J=4.0 Hz，H-6），4.51（1H，d，J=10.0 Hz，H-1″″），3.17（1H，m，H-3″″），3.13（1H，m，H-4″″），3.32（1H，m，H-5″″），1.34（3H，d，J=4.0 Hz，H-6″″），3.40（3H，s，H-7″″）；¹³C-NMR（CDCl₃，125 MHz）δ：38.7（C-1），28.8（C-2），77.8（C-3），38.7（C-4），140.6（C-5），117.6（C-6），34.4（C-7），74.3（C-8），43.6（C-9），37.1（C-10），24.2（C-11），71.5（C-12），57.8（C-13），88.0（C-14），33.0（C-15），31.9（C-16），91.5（C-17），9.4（C-18），18.6（C-19），208.9（C-20），27.5（C-21），166.8（C-1′），112.9（C-2′），165.9（C-3′），38.1（C-4′），20.9（C-5′），20.8（C-6′），16.5（C-7′），95.7（C-1″），35.2（C-2″），76.8（C-3″），82.3（C-4″），68.0（C-5″），18.2（C-6″），58.3（C-7″），98.4（C-1），37.0（C-2），68.6（C-3），82.4（C-4），66.3（C-5），18.2（C-6），101.4（C-1″″），35.4（C-2″″），80.5（C-3″″），75.3（C-4″″），71.5（C-5″″），18.0（C-6″″），56.3（C-7″″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]對(duì)照鑒定該化合物為告達(dá)亭-3-O-β-D-夾竹桃吡喃糖基-（1→4）-β-D-毛地黃毒吡喃糖基-（1→4）-β-D-加拿大麻吡喃糖苷。endprint

化合物5 白色不定型粉末；¹H-NMR（pyridine-d₅，500 MHz）δ：3.84（1H，m，H-3），5.26（1H，s，H-6），5.32（1H，dd，J=4.0，11.5 Hz，H-12），2.08（3H，s，H-18），1.29（3H，s，H-19），2.41（3H，s，H-21），8.28（1H，d，J=8.5 Hz，H-3′），7.26（1H，d，J=8.5 Hz，H-4′），7.26（1H，d，J=8.5 Hz，H-6′），8.28（1H，d，J=8.5 Hz，H-7′），5.28（1H，d，J=9.5 Hz，H-1″），4.08（1H，m，H-3″），3.53（1H，m，H-4″），4.21（1H，m，H-5″），1.38（3H，d，J=6.0 Hz，H-6″），3.61（3H，s，H-7″），5.11（1H，d，J=9.5 Hz，H-1），4.01（1H，m，H-3），3.45（1H，m，H-4），4.17（1H，m，H-5），1.38（3H，d，J=6.0 Hz，H-6），3.56（3H，s，H-7），4.70（1H，d，J=10.0 Hz，H-1″″），3.58（1H，m，H-3″″），3.50（1H，m，H-4″″），3.53（1H，m，H-5″″），1.45（3H，d，J=4.5 Hz，H-6″″），3.47（3H，s，H-7″″），5.26（1H，d，J=9.5 Hz，H-1″），3.78（1H，m，H-3″），3.53（1H，m，H-4″），4.12（1H，m，H-5″），1.54（3H，d，J=5.5 Hz，H-6″），3.47（3H，s，H-7″）；¹³C-NMR（pyridine-d₅，125 MHz）δ： 39.4（C-1），29.9（C-2），77.8（C-3），39.0（C-4），139.5（C-5），119.1（C-6），34.9（C-7），74.5（C-8），44.6（C-9），37.5（C-10），25.2（C-11），73.3（C-12），58.5（C-13），89.7（C-14），34.0（C-15），33.2（C-16），92.6（C-17），10.9（C-18），18.2（C-19），209.4（C-20），27.9（C-21），165.5（C-1′），119.1（C-2′），132.5（C-3′），116.3（C-4′），163.7（C-5′），116.3（C-6′），132.5（C-7′），96.5（C-1″），37.2（C-2″），78.1（C-3″），83.5（C-4″），69.1（C-5″），18.7（C-6″），58.9（C-7″），100.3（C-1），37.0（C-2），77.9（C-3），83.2（C-4），69.0（C-5），18.6（C-6），59.0（C-7），102.0（C-1″″），37.7（C-2″″），79.0（C-3″″），82.8（C-4″″），71.9（C-5″″），18.7（C-6″″），57.4（C-7″″），98.6（C-1″），36.0（C-2″），79.0（C-3″），74.3（C-4″），71.3（C-5″），19.1（C-6″），58.1（C-7″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]對(duì)照鑒定該化合物為青陽參苷O。

化合物6 白色不定型粉末；¹H-NMR（pyridine-d₅，500 MHz）δ：3.84（1H，m，H-3），5.27（1H，s，H-6），5.32（1H，dd，J=4.0，11.5 Hz，H-12），2.10（3H，s，H-18），1.29（3H，s，H-19），5.02（1H，q，J=6.0 Hz，H-20），1.56（3H，d，J=6.0 Hz，H-21），6.53（1H，d，J=16.0 Hz，H-2′），7.85（1H，d，J=16.0 Hz，H-3′），7.42（1H，m，H-5′），7.33（1H，m，H-6′），7.33（1H，m，H-7′），7.33（1H，m，H-8′），7.42（1H，m，H-9′），9.52（1H，s，H-2″），8.27（1H，d，J=8.0 Hz，H-4″），7.16（1H，dd，J=8.0，5.0，Hz，H-5″），8.80（1H，d，J=5.0 Hz，H-6″），5.29（1H，d，J=9.5 Hz，H-1），4.05（1H，m，H-3），3.51（1H，m，H-4），4.20（1H，m，H-5），1.38（3H，d，J=6.0 Hz，H-6），3.56（3H，s，H-7），5.12（1H，d，J=9.5 Hz，H-1″″），4.09（1H，m，H-3″″），3.60（1H，m，H-4″″），4.21（1H，m，H-5″″），1.40（3H，d，J=6.0 Hz，H-6″″），3.58（3H，s，H-7″″），4.76（1H，d，J=9.5 Hz，H-1″），3.58（1H，m，H-3″），3.49（1H，m，H-4″），3.61（1H，m，H-5″），1.58（3H，d，J=5.5 Hz，H-6″），3.45（3H，s，H-7″）；¹³C-NMR（pyridine-d₅，125 MHz）δ：39.2（C-1），29.9（C-2），77.7（C-3），38.8（C-4），139.4（C-5），119.2（C-6），34.9（C-7），74.4（C-8），44.1（C-9），37.3（C-10），25.7（C-11），74.6（C-12），57.1（C-13），88.9（C-14），34.1（C-15），33.1（C-16），87.5（C-17），11.4（C-18），18.0（C-19），76.4（C-20），15.4（C-21），166.9（C-1′），120.3（C-2′），144.0（C-3′），134.9（C-4′），128.5（C-5′），129.2（C-6′），130.5（C-7′），129.2（C-8′），128.5（C-9′），164.6（C-1″），153.8（C-2″），127.0（C-3″），137.3（C-4″），123.0（C-5″），151.4（C-6″），96.4（C-1），37.2（C-2），78.0（C-3），83.4（C-4），69.0（C-5），18.6（C-6），58.9（C-7），100.4（C-1″″），37.3（C-2″″），77.9（C-3″″），83.2（C-4″″），69.1（C-5″″），18.6（C-6″″），58.8（C-7″″），102.0（C-1″），36.9（C-2″），81.4（C-3″），76.3（C-4″），73.0（C-5″）， 18.6（C-6″），57.0（C-7″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14-15]對(duì)照鑒定該化合物為加加明-3-O-β-D-夾竹桃吡喃糖基-（1→4）-β-D-加拿大麻吡喃糖基-（1→4）-β-D-加拿大麻吡喃糖苷。endprint

化合物7 白色不定型粉末；¹H-NMR（pyridine-d₅，500 MHz）δ：3.86（1H，m，H-3），5.26（1H，s，H-6），5.32（1H，dd，J=4.0，11.5 Hz，H-12），2.13（3H，s，H-18），1.33（3H，s，H-19），4.08（1H，q，J=6.0 Hz，H-20），1.30（3H，d，J=6.0 Hz，H-21），6.94（1H，d，J=16.0 Hz，H-2′），8.14（1H，d，J=16.0 Hz，H-3′），7.39（1H，m，H-5′），7.25（1H，m，H-6′），7.25（1H，m，H-7′），7.25（1H，m，H-8′），7.39（1H，m，H-9′），5.26（1H，d，J=9.5 Hz，H-1″），4.02（1H，m，H-3″），3.54（1H，m，H-4″），4.17（1H，m，H-5″），1.35（3H，d，J=6.0 Hz，H-6″），3.57（3H，s，H-7″），5.08（1H，d，J=9.5 Hz，H-1），4.02（1H，m，H-3），3.60（1H，m，H-4），4.19（1H，m，H-5），1.57（3H，d，J=6.0 Hz，H-6），3.52（3H，s，H-7），4.73（1H，d，J=9.5 Hz，H-1″″），3.90（1H，m，H-2″″），3.60（1H，m，H-3″″），3.57（1H，m，H-4″″），3.70（1H，m，H-5″″），1.56（3H，d，J=5.5 Hz，H-6″″），3.86（3H，s，H-7″″）；¹³C-NMR（pyridine-d₅，125 MHz）δ：39.4（C-1），29.9（C-2），77.7（C-3），39.0（C-4），139.2（C-5），119.6（C-6），34.3（C-7），74.3（C-8），44.2（C-9），37.0（C-10），25.7（C-11），74.8（C-12），57.0（C-13），88.9（C-14），34.3（C-15），33.0（C-16），88.6（C-17），11.8（C-18），18.2（C-19），71.0（C-20），19.4（C-21），166.8（C-1′），119.7（C-2′），145.2（C-3′），135.1（C-4′），128.6（C-5′），129.2（C-6′），130.3（C-7′），129.2（C-8′），128.6（C-9′），96.4（C-1″），37.3（C-2″），78.2（C-3″），83.4（C-4″），69.1（C-5″），18.6（C-6″），58.9（C-7″），100.4（C-1），37.3（C-2），78.0（C-3），83.1（C-4），69.4（C-5），18.6（C-6），58.8（C-7），106.0（C-1″″），75.1（C-2″″），87.9（C-3″″），75.9（C-4″″），72.8（C-5″″），18.5（C-6″″），61.0（C-7″″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16-17]對(duì)照鑒定該化合物為sinomarinoside B。

化合物8 白色不定型粉末；¹H-NMR（pyridine-d₅，500 MHz）δ：3.84（1H，m，H-3），5.28（1H，s，H-6），5.20（1H，dd，J=4.0，11.5 Hz，H-12），2.03（3H，s，H-18），1.33（3H，s，H-19），2.49（3H，s，H-21），6.83（1H，d，J=16.0 Hz，H-2′），8.01（1H，d，J=16.0 Hz，H-3′），7.64（1H，m，H-5′），7.33（1H，m，H-6′），7.33（1H，m，H-7′），7.33（1H，m，H-8′），7.64（1H，m，H-9′），5.26（1H，d，J=9.5 Hz，H-1″），4.06（1H，m，H-3″），3.57（1H，m，H-4″），4.21（1H，m，H-5″），1.37（3H，d，J=6.0 Hz，H-6″），3.55（3H，s，H-7″），5.11（1H，d，J=9.5 Hz，H-1），4.06（1H，m，H-3），3.60（1H，m，H-4），4.21（1H，m，H-5），1.57（3H，d，J=6.0 Hz，H-6），3.60（3H，s，H-7），4.76（1H，d，J=10.0 Hz，H-1″″），3.92（1H，m，H-2″″），3.60（1H，m，H-3″″），3.57（1H，m，H-4″″），3.73（1H，m，H-5″″），1.59（3H，d，J=4.5 Hz，H-6″″），3.89（3H，s，H-7″″）；¹³C-NMR（pyridine-d₅，125 MHz）δ：39.3（C-1），29.9（C-2），77.7（C-3），39.0（C-4），139.4（C-5），119.1（C-6），34.8（C-7），74.3（C-8），44.6（C-9），37.4（C-10），25.0（C-11），73.6（C-12），58.1（C-13），89.5（C-14），33.8（C-15），33.1（C-16），92.4（C-17），10.7（C-18），18.2（C-19），209.8（C-20），27.7（C-21），165.8（C-1′），119.2（C-2′），145.0（C-3′），135.1（C-4′），128.6（C-5′），129.2（C-6′），130.6（C-7′），129.2（C-8′），128.6（C-9′），96.4（C-1″），37.3（C-2″），78.2（C-3″），83.4（C-4″），69.4（C-5″），18.6（C-6″），58.8（C-7″），100.4（C-1），37.0（C-2），78.0（C-3），83.1（C-4），69.1（C-5），18.6（C-6），58.9（C-7），106.7（C-1″″），75.1（C-2″″），87.8（C-3″″），75.9（C-4″″），72.8（C-5″″），18.5（C-6″″），60.9（C-7″″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16-18]對(duì)照鑒定該化合物為mucronatosides C。endprint

化合物9 白色不定型粉末；¹H-NMR（pyridine-d₅，500 MHz）δ：3.85（1H，m，H-3），5.28（1H，s，H-6），5.34（1H，dd，J=4.0，11.5 Hz，H-12），2.09（3H，s，H-18），1.30（3H，s，H-19），2.41（3H，s，H-21），8.30（1H，d，J=8.5 Hz，H-3′），7.22（1H，d，J=8.5 Hz，H-4′），7.22（1H，d，J=8.5 Hz，H-6′），8.30（1H，d，J=8.5 Hz，H-7′），5.29（1H，d，J=9.5 Hz，H-1″），4.09（1H，m，H-3″），3.54（1H，m，H-4″），4.17（1H，m，H-5″），1.38（3H，d，J=6.0 Hz，H-6″），3.57（3H，s，H-7″），5.12（1H，d，J=8.5 Hz，H-1），4.03（1H，m，H-3），3.45（1H，m，H-4），4.23（1H，m，H-5），1.38（3H，d，J=6.0 Hz，H-6），3.61（3H，s，H-7），4.70（1H，d，J=10.0 Hz，H-1″″），3.54（1H，m，H-3″″），3.50（1H，m，H-4″″），3.52（1H，m，H-5″″），1.47（3H，d，J=4.5 Hz，H-6″″），3.51（3H，s，H-7″″），4.97（1H，d，J=9.5 Hz，H-1″），3.47（1H，m，H-3″），3.47（1H，m，H-4″），3.59（1H，m，H-5″），1.59（3H，d，J=5.5 Hz，H-6″），3.47（3H，s，H-7″）；¹³C-NMR（pyridine-d₅，125 MHz）δ：39.3（C-1），29.9（C-2），77.7（C-3），38.9（C-4），139.5（C-5），119.1（C-6），34.8（C-7），74.4（C-8），44.5（C-9），37.4（C-10），25.2（C-11），73.4（C-12），58.4（C-13），89.5（C-14），33.9（C-15），33.2（C-16），92.5（C-17），10.8（C-18），18.2（C-19），209.7（C-20），27.8（C-21），165.4（C-1′），122.1（C-2′），132.4（C-3′），116.2（C-4′），163.6（C-5′），116.2（C-6′），132.4（C-7′），96.4（C-1″），37.3（C-2″），78.1（C-3″），83.4（C-4″），68.9（C-5″），18.7（C-6″），58.9（C-7″），100.5（C-1），37.4（C-2），77.8（C-3），83.2（C-4），69.1（C-5），18.7（C-6），58.8（C-7），102.0（C-1″″），37.6（C-2″″），79.1（C-3″″），82.7（C-4″″），71.7（C-5″″），18.6（C-6″″），57.3（C-7″″），100.3（C-1″），37.0（C-2″），81.7（C-3″），76.4（C-4″），73.0（C-5″），18.5（C-6″），57.0（C-7″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]對(duì)照鑒定該化合物為斷節(jié)參苷J(rèn)。

化合物10 白色不定型粉末；¹H-NMR（pyridine-d₅，500 MHz）δ：3.88（1H，m，H-3），5.29（1H，s，H-6），5.33（1H，dd，J=4.0，11.5 Hz，H-12），2.09（3H，s，H-18），1.30（3H，s，H-19），5.04（1H，q，J=6.0 Hz，H-20），1.55（3H，d，J=6.0 Hz，H-21），6.56（1H，d，J=16.0 Hz，H-2′），7.86（1H，d，J=16.0 Hz，H-3′），7.43（1H，m，H-5′），7.35（1H，m，H-6′），7.35（1H，m，H-7′），7.35（1H，m，H-8′），7.43（1H，m，H-9′），9.54（1H，s，H-2″），8.31（1H，d，J=8.0 Hz，H-4″），7.17（1H，dd，J=8.0，5.0 Hz，H-5″），8.82（1H，d，J=5.0 Hz，H-6″），5.27（1H，d，J=9.5 Hz，H-1），4.07（1H，m，H-3），3.59（1H，m，H-4），4.22（1H，m，H-5），1.38（3H，d，J=6.0 Hz，H-6），3.56（3H，s，H-7），5.12（1H，d，J=9.5 Hz，H-1″″），4.07（1H，m，H-3″″），3.63（1H，m，H-4″″），4.22（1H，m，H-5″″），1.57（3H，d，J=6.0 Hz，H-6″″），3.62（3H，s，H-7″″），4.77（1H，d，J=9.5 Hz，H-1″），3.93（1H，m，H-2″），3.61（1H，m，H-3″），3.59（1H，m，H-4″），3.74（1H，m，H-5″），1.60（3H，d，J=6.0 Hz，H-6″），3.91（3H，s，H-7″）；¹³C-NMR（pyridine-d₅，125 MHz）δ： 39.3（C-1），29.9（C-2），77.7（C-3，38.8（C-4），139.4（C-5），119.2（C-6），34.9（C-7），74.4（C-8），44.1（C-9），37.3（C-10），25.7（C-11），74.6（C-12），57.2（C-13），88.9（C-14），34.1（C-15），33.7（C-16），87.5（C-17），11.4（C-18），18.1（C-19），76.4（C-20），15.4（C-21），166.7（C-1′），120.3（C-2′），144.0（C-3′），134.9（C-4′），128.5（C-5′），129.2（C-6′），130.5（C-7′），129.2（C-8′），128.5（C-9′），164.6（C-1″），153.8（C-2″），127.0（C-3″），137.3（C-4″），123.0（C-5″），151.4（C-6″），96.4（C-1），37.3（C-2），78.2（C-3），83.4（C-4），69.4（C-5），18.6（C-6），58.8（C-7），100.4（C-1″″），37.0（C-2″″），78.0（C-3″″），83.2（C-4″″），69.1（C-5″″），18.6（C-6″″），58.9（C-7″″），106.2（C-1″），75.1（C-2″），87.8（C-3″），75.9（C-4″），72.8（C-5″），18.5（C-6″），60.9（C-7″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]對(duì)照鑒定該化合物為stephanoside H。endprint

化合物11 白色不定型粉末；¹H-NMR（pyridine-d₅，500 MHz）δ：3.87（1H，m，H-3），5.27（1H，s，H-6），5.33（1H，dd，J=4.0，11.0 Hz，H-12），2.09（3H，s，H-18），1.30（3H，s，H-19），2.42（3H，s，H-21），8.30（1H，d，J=8.5 Hz，H-3′），7.23（1H，d，J=8.5，H-4′），7.23（1H，d，J=8.5 Hz，H-6′），8.30（1H，d，J=8.5 Hz，H-7′），5.48（1H，d，J=9.5 Hz，H-1″），4.64（1H，m，H-3″），3.51（1H，m，H-4″），4.30（1H，m，H-5″），1.43（3H，d，J=6.0 Hz，H-6″），5.17（1H，d，J=9.5 Hz，H-1），4.05（1H，m，H-3），3.41（1H，m，H-4），4.20（1H，m，H-5），1.35（3H，d，J=6.0 Hz，H-6），3.56（3H，s，H-7），4.75（1H，d，J=10.0 Hz，H-1″″），3.48（1H，m，H-3″″），3.44（1H，m，H-4″″），3.59（1H，m，H-5″″），1.59（3H，d，J=4.5 Hz，H-6″″），3.45（3H，s，H-7″″）；¹³C-NMR（pyridine-d₅，125 MHz）δ： 39.3（C-1），29.9（C-2），77.7（C-3），39.0（C-4），139.6（C-5），118.9（C-6），34.8（C-7），74.4（C-8），44.5（C-9），37.4（C-10），25.2（C-11），73.4（C-12），58.5（C-13），89.6（C-14），33.9（C-15），33.2（C-16），92.5（C-17），10.8（C-18），18.2（C-19），209.7（C-20），27.8（C-21），165.4（C-1′），122.1（C-2′），132.4（C-3′），116.2（C-4′），163.6（C-5′），116.2（C-6′），132.4（C-7′），96.4（C-1″），39.0（C-2″），67.5（C-3″），83.4（C-4″），69.2（C-5″），18.5（C-6″），99.8（C-1），36.8（C-2），77.8（C-3），83.2（C-4），68.6（C-5），18.7（C-6），58.9（C-7），102.2（C-1″″），37.3（C-2″″），81.4（C-3″″），76.3（C-4″″），73.0（C-5″″），18.7（C-6″″），57.1（C-7″″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]對(duì)照鑒定該化合物為青陽參苷元-3-O-β-D-夾竹桃吡喃糖基-（1→4）-β-D-加拿大麻吡喃糖基-（1→4）-β-D-毛地黃毒吡喃糖苷。

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C₂₁steroids from roots of Cynanchum otophyllum

LI Xiang， ZHANG Mi， XIANG Cheng， QIN Yi， HE Jing， LI Bao-cai， LI Peng

（1.Faculty of Life Science and Technology， Kunming University of Science and Technology， Kunming 650500， China；

2. State Key Laboratory of Quality Research in Chinese Medicine， Institute of Chinese Medical Sciences

University of Macau， Macau 000856， China）

[Abstract] Eleven C₂₁steroids were isolated from chloroform extract of roots of Cynanchum otophyllumby silica gel， MCI， ODS columns， and semi-preparative HPLC. Their structures were determined by spectroscopic data analysis as otophylloside B（1）， caudatin-3-O-β-D-cymaropyranosyl-（1→4）-β-D-oleandropyranosyl-（1→4）-β-D-cymaropyranosyl-（1→4）-β-D-cymaropyranoside（2）， caudatin-3-O-β-D-oleandropyranosyl-（1→4）-β-D-oleandropyranosyl-（1→4）-β-D-cymaropyranosyl-（1→4）-β-D-cymaropyranoside（3）， caudatin-3-O-β-D-oleandropyranosyl-（1→4）-β-D-digitoxopyranosyl-（1→4）-β-D-cymaropyranoside（4）， otophylloside O（5）， gagamine-3-O-β-D-oleandropyranosyl-（1→4）-β-D-cymaropyranosyl-（1→4）-β-D-cymaropyranoside（6）， sinomarinoside B（7）， mucronatosides C（8）， wallicoside J（9）， stephanoside H（10）， and qinyangshengenin-3-O-β-D-oleandropyranosyl-（1→4）-β-D-cymaropyranosyl-（1→4）-β-D-digitoxopyranoside（11）. Among them， compounds 2-3， and 6-11 were separated from the roots of this plant for the first time.

[Key words] Cynanchum otophyllum； C₂₁steroids； otophylloside B

doi：10.4268/cjcmm20140818

[責(zé)任編輯 孔晶晶]endprint