獨(dú)一味水提物對大鼠血液凝集參數(shù)的影響

廖應(yīng)瓊，鄧治國，韋會(huì)平

(1.攀鋼集團(tuán)總醫(yī)院藥劑科，四川攀枝花 617023；2.攀枝花學(xué)院醫(yī)學(xué)院，四川攀枝花 617023）

·論著·

獨(dú)一味水提物對大鼠血液凝集參數(shù)的影響

廖應(yīng)瓊1，鄧治國1，韋會(huì)平2

(1.攀鋼集團(tuán)總醫(yī)院藥劑科，四川攀枝花 617023；2.攀枝花學(xué)院醫(yī)學(xué)院，四川攀枝花 617023）

目的研究藏藥獨(dú)一味對凝血作用和血液凝集參數(shù)的影響。方法以云南白藥(0.09 g/kg)為陽性對照組，蒸餾水為空白對照組，獨(dú)一味水提物為試驗(yàn)組，試驗(yàn)組分高(0.3 g/kg)、中(0.15 g/kg)、低(0.075 g/kg)三個(gè)劑量組，給大鼠灌胃給藥14 d后，頸總動(dòng)脈采血測定其凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶時(shí)間(TT)以及纖維蛋白原含量(FIB)。結(jié)果與空白對照組比較，獨(dú)一味水提物的高、中、低劑量組及云南白藥組的TT值分別縮短了25.77%、12.42%、8.60%和24.91%；FIB值分別增加了26.80%、6.38%、20.72%和9.44%；PT、APTT值無明顯變化。結(jié)論獨(dú)一味水提物能增加大鼠纖維蛋白原的含量并能縮短大鼠凝血酶時(shí)間。

獨(dú)一味；水提物；止血；凝血酶時(shí)間；纖維蛋白原

獨(dú)一味[Lamiophlomis rotata(Benth.)Kudo]為唇形科獨(dú)一味屬植物，是我國藏、蒙、納西等民族民間常用藥之一[1]，具有止血、鎮(zhèn)痛消腫、活血化瘀、補(bǔ)髓、行氣、續(xù)筋接骨之功效。1982-1985年間，蘭州醫(yī)學(xué)院梁重棟等[2]首先對其進(jìn)行了基礎(chǔ)與臨床研究，并研制了以獨(dú)一味水提取物為原料的獨(dú)一味片，取得了新藥證書。載入2000版《中國藥典》[3]的獨(dú)一味膠囊，臨床應(yīng)用廣泛，主要用于各種外科手術(shù)后的鎮(zhèn)痛止血及牙科、婦科、關(guān)節(jié)炎等方面的疾病。但獨(dú)一味止血的活性成分及其作用機(jī)理至今沒有得到明確闡述，這極大地阻礙了獨(dú)一味藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定、制劑工藝的優(yōu)化和臨床應(yīng)用的深入研究，限制了這一西北特色中藥的臨床應(yīng)用和市場推廣。我們的前期實(shí)驗(yàn)表明，獨(dú)一味水提物小鼠灌胃能顯著縮短小鼠斷尾出血時(shí)間和毛細(xì)管凝血時(shí)間，并且對小鼠、大鼠的血小板數(shù)量無顯著影響。在此基礎(chǔ)上，我們參考相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[4-5]，設(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)，考察獨(dú)一味水提物大鼠灌胃給藥后是否能夠?qū)Υ笫蟮难耗瘏?shù)和纖維蛋白原的含量產(chǎn)生影響，以進(jìn)一步闡明獨(dú)一味的止血機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 藥材與儀器獨(dú)一味水提取物由實(shí)驗(yàn)室自制，獲得率為23.5%；云南白藥(云南白藥集團(tuán)股份有限公司，批號20130320)；一次性真空采血管(含0.3 ml，0.109 M的枸櫞酸鈉抗凝劑，英國，批號5006641)；ACL 9000全自動(dòng)凝血/纖溶分析儀，Instrumentation Laboratory，USA；SPINCHROMTMDLX離心機(jī)，BECKMAN，USA；戊巴比妥鈉(化學(xué)純)，北京通縣育才精細(xì)化工廠，批號 100427；PT、APTT、TT的試劑盒，Behring Werke，Marburg。

1.2 分組與給藥Wistar大鼠50只隨機(jī)分成5組，每組10只，正常條件飼養(yǎng)，分別設(shè)為空白對照組、陽性對照組(云南白藥0.09 g/kg)、獨(dú)一味水提物高劑量組(0.3 g/kg)、獨(dú)一味水提物中劑量組(0.15 g/kg)和獨(dú)一味水提物低劑量組(0.075 g/kg)?？瞻讓φ战M每天灌胃給予蒸餾水2 ml/200 g，其余各組給予同體積的蒸餾水配制的藥物。共給藥14 d。

1.3 大鼠體重的變化實(shí)驗(yàn)第7天和第14天每只大鼠稱重，并與實(shí)驗(yàn)前體重進(jìn)行比較。

1.4 動(dòng)物采血實(shí)驗(yàn)第14天每組大鼠相隔40 min給藥，給藥后1 h依次腹腔注射3%戊巴比妥鈉溶液0.6 ml麻醉，剝離一側(cè)頸總動(dòng)脈，采血1.7 ml于一次性真空采血管中，輕輕顛倒搖勻。

1.5 凝血酶時(shí)間的測定所取血樣立即置SPINCHROMTMDLX離心機(jī)中離心10 min，去除血小板，分離血漿，取上清400 μl，用ACL9000凝血/纖溶分析儀依次測定凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶時(shí)間(TT)以及纖維蛋白原含量(FIB)。

1.6 TT縮短率和FIB增加率的計(jì)算按下式計(jì)算各組與空白對照組比較TT縮短率和FIB增加率。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)用SPSS10.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，進(jìn)行多個(gè)樣本均數(shù)間的兩兩比較，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 獨(dú)一味口服對大鼠體重的影響各實(shí)驗(yàn)組對大鼠體重的影響測定結(jié)果見表1。獨(dú)一味水提物高、中、低劑量以及云南白藥組大鼠口服給藥14 d后，各組大鼠體重變化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，未見明顯毒性作用。

組別空白對照組陽性對照組組獨(dú)一味高劑量組獨(dú)一味中劑量組獨(dú)一味低劑量組第0天1 9 8 . 0 ± 1 7 . 5 1 9 8 . 8 ± 1 8 . 0 1 9 9 . 8 ± 1 7 . 7 2 0 0 . 0 ± 1 9 . 4 1 9 8 . 6 ± 1 7 . 3第7天2 1 4 . 4 ± 1 9 . 0 2 2 3 . 2 ± 2 4 . 2 2 1 9 . 2 ± 1 8 . 0 2 2 2 . 4 ± 1 9 . 3 2 1 7 . 4 ± 1 5 . 6第1 4天2 2 8 . 2 ± 2 1 . 8 2 3 3 . 0 ± 2 9 . 0 2 2 2 . 4 ± 1 8 . 3 2 2 7 . 0 ± 1 9 . 4 2 2 3 . 4 ± 1 5 . 4

2.2 獨(dú)一味灌胃給藥對大鼠血液凝集參數(shù)和纖維蛋白原的含量的影響各實(shí)驗(yàn)組對大鼠血液凝集參數(shù)和纖維蛋白原的含量的影響測定結(jié)果見表2。獨(dú)一味給藥14 d后，大鼠PT、APTT各組測得數(shù)值差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表2 獨(dú)一味灌胃給藥對大鼠血液凝集參數(shù)和纖維蛋白原的含量影響(±s，n=10)

表2 獨(dú)一味灌胃給藥對大鼠血液凝集參數(shù)和纖維蛋白原的含量影響(±s，n=10)

組別空白對照組陽性對照組獨(dú)一味高劑量組獨(dú)一味中劑量組獨(dú)一味低劑量組PT(s) 16.97±0.95 16.28±0.85 16.06±1.55 16.75±2.49 16.50±0.72 APTT(s) 24.68±1.76 25.99±2.66 26.61±3.99 25.76±5.43 24.20±1.37 TT(s) 26.58±3.51 19.96±4.57 19.73±5.76 23.28±5.77 24.30±6.59 FIB(g/L) 1.567±0.197 1.715±0.099 1.987±0.370 1.667±0.203 1.913±0.173

2.3 各組TT縮短率和FIB增加率比較獨(dú)一味水提物高、中、低劑量組及陽性對照組給藥14 d后大鼠TT分別為(19.73±5.76)s、(23.28±5.77)s、(24.30±6.59)s和(19.96±4.57)s，與空白對照組(26.58±3.51)s比較，分別縮短25.77%、12.42%、8.60%、和24.91%，獨(dú)一味水提物高劑量組、陽性對照組與空白對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。獨(dú)一味水提物高、中、低劑量組以及陽性對照組口服給藥14 d后，各組的大鼠FIB含量分別為(1.987±0.370)g/L、(1.667±0.203)g/L、(1.913±0.173)g/L和(1.715±0.099)g/L，與空白對照組(1.567±0.197)g/L比較，分別增加了26.80%、6.38%，20.72%和9.44%，獨(dú)一味水提物高、低劑量組與空白對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表3

表3 TT縮短率和FIB增加率(±s，n=10)

表3 TT縮短率和FIB增加率(±s，n=10)

組別TT基礎(chǔ)值(s)縮短率(%) FIB基礎(chǔ)值(g/L)增加率(%空白對照組陽性對照組獨(dú)一味高劑量組獨(dú)一味中劑量組獨(dú)一味低劑量組26.58±3.51 19.96±4.57 19.73±5.76 23.28±5.77 24.30±6.59 0.00 24.91 25.77 12.42 8.60 1.567±0.197 1.715±0.099 1.987±0.370 1.667±0.203 1.913±0.173 ) 0.00 9.44 26.80 6.38 20.72

3 討論

3.1 獨(dú)一味的止血、促凝血作用上述結(jié)果表明，獨(dú)一味水提物對大鼠無明顯毒性作用，對大鼠PT、APTT也無顯著影響，但能顯著縮短TT，并顯著增加FIB。PT值反映外源性凝血因子是否異常，APTT值反映內(nèi)源性凝血因子是否異常，TT主要反映凝血共同途徑纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白的過程中，是否存在異常的抗凝現(xiàn)象。低纖維蛋白原血癥患者常見TT延長，而FIB的增加可以縮短TT。由此可見，獨(dú)一味確實(shí)具有較好的止血、促凝血作用。并且可以推測獨(dú)一味止血的機(jī)理，可能主要是影響凝血共同途徑纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白的過程，而對外源性凝血因子和內(nèi)源性凝血因子影響不大。

3.2 采血方法對凝血實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響本實(shí)驗(yàn)研究中我們曾經(jīng)嘗試從大鼠眼眶后靜脈叢采血，但由于采血量難以滿足測定需要，并且采血過程中易帶入眼組織液、毛等極易激活凝血系統(tǒng)的物質(zhì)，使許多樣本出現(xiàn)凝血而干擾測定。經(jīng)大量實(shí)驗(yàn)摸索，我們最終決定從頸總動(dòng)脈采集大鼠動(dòng)脈血。此法采集的血樣不易凝血，對各項(xiàng)凝血指標(biāo)測定的干擾小。

3.3 抗凝劑對凝血實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)用的真空采血管是臨床用于人凝血酶實(shí)驗(yàn)的采血管，內(nèi)含0.109 M的枸櫞酸鈉抗凝劑0.3 ml，每次患者采血2.7 ml。但由于大鼠的血比人類的血具有更高的凝集性，當(dāng)采集2.7 ml大鼠血時(shí)易發(fā)生凝血。我們比較研究了最終抗凝劑含量分別為10%、15%、20%、30%時(shí)所采血樣的凝血狀況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)抗凝劑為15%時(shí)，即采集1.7 ml的大鼠動(dòng)脈血于內(nèi)含0.3 ml、0.109 M的枸櫞酸鈉抗凝劑的真空采血管中時(shí)，抗凝效果最好，且不發(fā)生溶血現(xiàn)象，所測各項(xiàng)指標(biāo)變異較小。

[1]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草[S].7卷.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1999:6074-6075.

[2]梁重棟.藏藥獨(dú)一味的基礎(chǔ)與臨床研究[J].蘭州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 1987,40(2):47-49.

[3]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2000:533-534.

[4]徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:184-186,1270-1275.

[5]杜冠華,李學(xué)軍,張永祥.藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)指南－新藥發(fā)現(xiàn)和藥理學(xué)評價(jià)[M].北京:科學(xué)出版社,2004:219-220.

Effect of Herba Lamiophlomis rotata on blood coagulation parameters of rats.

LIAO Ying-qiong1,DENG Zhi-guo1,WEI Hui-ping2.1.Pharmaceutical Preparation Section，Hospital of Panzhihua Metal Group,Panzhihua 617023,Sichuan,CHINA;2.Medical School,Panzhihua University,Panzhihua 617023,Sichuan,CHINA

ObjectiveTo study the effect of tibet medicine herba lamiophlomis rotata on blood coagulation parameters(PT,APTT,TT)of rats.MethodsYunnan Baiyao powder(0.09 g/kg),distilled water, high dose(0.3 g/kg),middle dose(0.15 g/kg),low dose(0.075 g/kg)of the aqueous extract ofL.rotata,were taken orally by rats for fourteen days.Blood samples were culled from common carotid artery and PT,APTT,TT and FIB of these samples were determined.ResultsCompared to the blank control group,the reduced rates of TT values of the high,middle and low dose groups and Yunnan Baiyao powder group were 25.77%,12.42%,8.60%and 24.91%,respectively.The increased rates of FIB values were 26.80%,6.38%,20.72%and 9.44%,respectively.There were no obvious changes in PT and APTT values between all groups.ConclusionThe aqueous extract ofL.rotatacould increase the content of FIB and shorten TT value.

Lamiophlomis rotata;Aqueous extract;Hemostatic;TT;FIB

R-332

A

1003—6350（2014）11—1561—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.11.0607

2013-11-28)