IL-17+CD4+T(Th17)細(xì)胞和IL-17+CD8+T(Tc17)細(xì)胞在肺癌患者外周血中的表達(dá)水平比較

謝志翔

(達(dá)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗科，四川 達(dá)州 635000)

·論著·

IL-17+CD4+T(Th17)細(xì)胞和IL-17+CD8+T(Tc17)細(xì)胞在肺癌患者外周血中的表達(dá)水平比較

謝志翔

(達(dá)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗科，四川 達(dá)州 635000)

目的對比白細(xì)胞介素(IL)-17+CD4+T(Th17)細(xì)胞和IL-17+CD8+T(Tc17)細(xì)胞在肺癌患者外周血中的表達(dá)水平。方法選擇2010年3月至2013年3月我院接診的70例肺癌患者進(jìn)行研究(肺癌組)，同時選擇40例健康體檢者作為對照組。采用流式細(xì)胞術(shù)對兩組的Th17細(xì)胞和Tcl7細(xì)胞表達(dá)情況進(jìn)行檢測并分析。結(jié)果檢測發(fā)現(xiàn)，腺癌、鱗癌、小細(xì)胞癌三種病理類型患者的Th17細(xì)胞和Tcl7細(xì)胞表達(dá)水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=1.762 1，P=0.179 8；F=0.161 3，P=0.853 0)。表明Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平與肺癌患者的病理類型無關(guān)。不同TNM分期的肺癌患者的Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=5.783 1，P=0.004 8；F=3.751 4，P=0.028 7)，且隨著患者TNM分期的升高，Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平也逐漸增高(P＜0.05)。結(jié)論Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞在不同TNM分期肺癌患者的外周血中的表達(dá)水平不同，Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞在肺癌患者中表達(dá)水平明顯升高。

肺癌；Th17細(xì)胞；Tc17細(xì)胞

臨床研究顯示外周血的免疫狀況與肺癌的發(fā)生有著密切的聯(lián)系[1-2]，而T淋巴細(xì)胞是腫瘤的微環(huán)境的主要效應(yīng)細(xì)胞[3]，最新研究發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg細(xì)胞)和白細(xì)胞介素(IL)-17+CD4+T(Th17)細(xì)胞在傳統(tǒng)CD4+T細(xì)胞的基礎(chǔ)上為腫瘤的免疫機(jī)制提出了新的觀點(diǎn)[4-5]。本文旨在對比分析Th17細(xì)胞和IL-17+CD8+T(Tc17)細(xì)胞在肺癌患者外周血中的表達(dá)水平，現(xiàn)將結(jié)果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2010年3月至2013年3月我院接診的70例肺癌患者進(jìn)行研究，同時選擇40例健康體檢者作為對照組。入選標(biāo)準(zhǔn)：肺癌組患者均經(jīng)肺部組織病理活檢及各項影像學(xué)資料檢查確診為肺癌。兩組均無糖尿病、高血壓、腎臟疾病等臨床基礎(chǔ)疾病，排除合并有肺部及全身重癥疾病的患者。肺癌組70例中男性45例，女性25例，年齡41～88歲，平均(56.4±2.3)歲；其中病理診斷腺癌31例，鱗癌22例，小細(xì)胞癌17例；TNM分期情況：Ⅰ～ⅢA期19例，ⅢB期18例，Ⅳ期33例。健康組40例，其中男性23例，女性17例，年齡43～86歲，平均(55.6±2.5)歲。兩組的年齡、性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法具體的操作方法是流式細(xì)胞術(shù)檢測。步驟為：(1)于清晨，患者在空腹?fàn)顟B(tài)下收集外周靜脈血于真空的采血管中。(2)將收集到的外周血進(jìn)行分離，得到外周血中的單個核細(xì)胞200 μl置于細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)。(3)在平板的細(xì)胞培養(yǎng)板上，加入新生小牛血清RPMI 1640培養(yǎng)液、50 ng/ml的PMA、10 μg/ml的BFA培養(yǎng)，并加以混勻。(4)在平板內(nèi)加入固定劑，并于室溫內(nèi)培養(yǎng)15 min后加入磷酸鹽緩沖液(PBS)進(jìn)行洗滌離心，離心半徑為14.6 cm，1 500 r/min離心5 min，將上清液去除。(5)采用10 μl CD3PreCP和10 μl CD8-APC進(jìn)行混勻，并在避光的室溫內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)20 min。(6)再次采用PBS進(jìn)行洗滌離心，離心半徑為14.6 cm，1 500 r/min離心5 min，將上清液去除。在其中加入10 μl的PE-IL-17單抗，在室溫內(nèi)培養(yǎng)20 min。再次進(jìn)行重復(fù)的離心。(7)對Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞水平進(jìn)行分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，其組間比較采用t檢驗，多組計量資料比較采用F檢驗，計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組的Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平比較通過流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，肺癌組患者的Th17細(xì)胞表達(dá)的比例明顯高于健康組，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=3.265 4，P=0.001 5)，肺癌組患者的Tc17細(xì)胞表達(dá)比例明顯高于健康組，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=3.763 1，P=0.000 3)，見表1。

表1 兩組Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平比較(±s)

表1 兩組Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平比較(±s)

2.2 不同病理類型肺癌患者Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平比較檢測發(fā)現(xiàn)，腺癌、鱗癌、小細(xì)胞癌三種病理類型患者的Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=1.762 1，P=0.179 8；F=0.161 3，P=0.853 0)。表明Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平與肺癌患者的病理類型無關(guān)，見表2。

表2 不同病理類型肺癌患者Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平比較(±s，%)

表2 不同病理類型肺癌患者Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平比較(±s，%)

2.3 不同TNM分期肺癌患者的Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平比較檢測發(fā)現(xiàn)，不同TNM分期的肺癌患者的Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=5.783 1，P=0.004 8；F=3.751 4，P= 0.028 7)，且隨著患者TNM分期的升高，Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平也逐漸增高(P＜0.05)，見表3。

表3 不同TNM分期肺癌患者Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平比較(±s，%)

表3 不同TNM分期肺癌患者Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平比較(±s，%)

3 討論

肺癌是臨床中呼吸科常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率和死亡率增長較快，是威脅人群健康和生命最大的惡性腫瘤之一[6]。肺癌在病理分型上分為腺癌、鱗癌、小細(xì)胞癌三種類型，TNM分期分為I～ⅢA期、ⅢB期、Ⅳ期[7]。多項研究發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤的患者均存在著免疫功能的紊亂，但是腫瘤細(xì)胞也存在逃離免疫系統(tǒng)的攻擊[8-9]。在腫瘤免疫中，以T淋巴細(xì)胞為主的細(xì)胞免疫為主導(dǎo)，地位十分重要。目前，國內(nèi)外對于調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg細(xì)胞)和Th17細(xì)胞的采用成為抗腫瘤治療的一個熱點(diǎn)。尤其是對于Th17細(xì)胞的深入研究發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞介素(IL)-17可能在腫瘤免疫中發(fā)揮著重要的作用，可幫助腫瘤細(xì)胞實(shí)現(xiàn)免疫逃逸和免疫耐受，從而不被體內(nèi)的免疫系統(tǒng)消除[10]。CD4+T細(xì)胞是細(xì)胞免疫中的一種新的細(xì)胞類型，而Th17細(xì)胞以分泌IL-17為主。因此，多項臨床研究發(fā)現(xiàn)肺癌患者外周血中會出現(xiàn)Th17細(xì)胞的明顯升高，從而可用于早期肺癌患者的診斷和檢查。與此同時，有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)CD8+T細(xì)胞也可分泌IL-17，且在產(chǎn)生的過程中與Thl7細(xì)胞有著許多相似的地方。因此，多位學(xué)者探討發(fā)現(xiàn)肺癌患者的Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平存在正相關(guān)關(guān)系[11]。

國內(nèi)外的最新研究也發(fā)現(xiàn)CD8+T細(xì)胞是抗腫瘤免疫的關(guān)鍵淋巴細(xì)胞，可通過識別腫瘤細(xì)胞表面的MHC-I抗原肽，從而激活分化成為細(xì)胞毒性的T細(xì)胞，而且，在對不同分期肺癌患者的體內(nèi)免疫因子的檢測中得到了相同的結(jié)果[12]。綜合多項研究的結(jié)果，均顯示肺癌患者免疫系統(tǒng)中的成分會發(fā)生明顯的改變，患者的Th17、Tc17細(xì)胞表達(dá)會明顯升高，且兩種細(xì)胞數(shù)目上存在正相關(guān)的關(guān)系。對于不同病理類型，不同分期的肺癌患者，均存在著Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)情況的差異，可用于對不同分期的肺癌患者的診斷和鑒別[13]。

本研究中選擇我院接診的70例肺癌患者和40例健康體檢者進(jìn)行研究。采用流式細(xì)胞術(shù)對兩組的Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)情況進(jìn)行檢測分析。結(jié)果顯示，肺癌患者Th17、Tc17細(xì)胞表達(dá)的比例明顯升高。腺癌、鱗癌、小細(xì)胞癌三種病理類型的肺癌患者Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)情況差異無統(tǒng)計學(xué)意義，表明Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平與患者的肺癌病理類型無關(guān)。不同分期的肺癌患者Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義，且隨著患者TNM分期的逐漸升高，Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞表達(dá)水平均呈現(xiàn)逐漸的升高。

綜上所述，Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞在不同TNM分期肺癌患者的外周血中的表達(dá)水平不同，Th17細(xì)胞和Tc17細(xì)胞在肺癌患者中表達(dá)水平明顯升高。

[1]黃建紅,王艷峰,翟晉芳,等.肺癌患者外周血白細(xì)胞介素-17+CD4+T細(xì)胞和白細(xì)胞介素-17+CD8+T細(xì)胞表達(dá)的意義[J].腫瘤研究與臨床,2013,25(7):463-465.

[2]李莎,李巖,梁婧,等.非小細(xì)胞肺癌患者外周血Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和Th17的檢測與臨床意義[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2012,32(7):642-646.

[3]朱海星,周靈,時國朝,等.外周血Th17細(xì)胞及IL-17+FoxP3+T細(xì)胞在非小細(xì)胞肺癌患者的表達(dá)變化[J].內(nèi)科理論與實(shí)踐,2012, 7(2):110-113.

[4]黃秋晗,孫俊寧,王艷峰,等.肺癌患者血清中細(xì)胞因子的檢測及臨床意義[J].中國腫瘤,2012,21(10):779-783.

[5]趙樹強(qiáng),賈春生,王桂琴,等.非小細(xì)胞肺癌患者外周血Th17細(xì)胞比例和血清IL-17水平的檢測及其臨床意義[J].腫瘤研究與臨床,2012,24(9):600-602.

[6]何改平,張彬,張寶文,等.肺癌腦轉(zhuǎn)移患者Th17細(xì)胞和IL-17水平變化的研究[J].中國肺癌雜志,2013,16(9):476-481.

[7]Xu H,Wang X,Liu DX,et al.IL-17-producing innate lymphoid cells are restricted to mucosal tissues and are depleted in SIV-infected macaques[J].Mucosal-Immunol,2012,5(6):658-659.

[8]Li K,Wang Z,Cao Y,et al.The study of the ratio and distribution of Th17 cells and Tc17 cells in asthmatic patients and the mouse model[J].Asian Pac JAllergy Immunol,2013,31(2):125-131.

[9]朱海星,周靈,時國朝,等.非小細(xì)胞肺癌患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和輔助性T細(xì)胞17的平衡表達(dá)特征[J].結(jié)核病與肺部健康雜志,2013,2(2):100-104.

[10]賈慧民,房新志,張國慶,等.白介素17與Foxp3在ⅢA期肺鱗癌和腺癌中的表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系研究[J].中國全科醫(yī)學(xué),2012,15 (12):1345-1349.

[11]Kumawat AK,Strid H,Tysk C,et al.Microscopic colitis patients demonstrate a mixed Th17/Tc17 and Th1/Tc1 mucosal cytokine profile[J].Mol Immunol,2013,55(3-4):355-364.

[12]王建升.Th17細(xì)胞在腫瘤中的研究進(jìn)展[J].中國肺癌雜志,2011, 14(11):885-889.

[13]馬曉梅,張銀華,王曉璐,等.非小細(xì)胞肺癌組織中Th17及CD4+CD25+Treg細(xì)胞的表達(dá)及意義[J].山東醫(yī)藥,2012,52(31):1-3.

Comparison of the expression levels of IL-17+CD4+T(Th17)cells and IL-17+CD8+T(Tc17)cells in the peripheral blood of patients with lung cancer.

XIE Zhi-xiang.Department of Laboratory,Dazhou City Hospital of Integrated Traditional and Western Medicine,Dazhou 635000,Sichuan,CHINA.

ObjectiveTo study the expression levels of Interleukin IL-17+CD4+T(Th17)cells and IL-17+CD8+T(Tc17)cells in the peripheral blood of patients with lung cancer.MethodsSeventy cases of lung cancer from March 2010 to March 2013 in our hospital were studied.And 40 healthy volunteers were selected as the control group.Flow cytometry was used in both groups Th17 cells and Tc17 cell expression were detected and analyzed.ResultsThe difference of expression levels of Th17 and Tc17 cells were not found between adenocarcinoma,squamous cell carcinoma and small cell carcinoma(F=1.762 1,P=0.179 8;F=0.161 3,P=0.853 0).This indicates that the expression levels of Th17 and Tc17 cells is independent of pathological types of lung cancer patients.Statistical significance was found between the expression levels of Th17 and Tc17 cells in different TNM stages of lung cancer(F=5.783 1,P=0.004 8;F=3.751 4,P=0.028 7),and the expression of Th17 and Tc17 cells in patients with advanced disease(stageⅢandⅣ)were significantly higher than in those with stageⅠandⅡ(P＜0.05).ConclusionWe found that the expression levels of Th17 and Tc17 cells in the peripheral blood were different in different TNM stages of lung cancer,and Th17 cells and Tc17 cells in patients with lung cancer were increase significantly.

Lung cancer;Thl7 cells;Tcl7 Cell

R734.2

A

1003—6350(2014)13—1953—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.13.0757

2013-10-26)

謝志翔。E-mail：xiang54126@163.com