川崎病患兒血清IL-10、IL-18和TNF-α與冠狀動脈損傷的關(guān)系

劉 霞，王 鷹，何 睛

（桂林市人民醫(yī)院檢驗科，廣西 桂林 541002）

川崎病患兒血清IL-10、IL-18和TNF-α與冠狀動脈損傷的關(guān)系

劉 霞，王 鷹，何 睛

（桂林市人民醫(yī)院檢驗科，廣西 桂林 541002）

目的探討川崎病(KD)患兒外周血血清白細(xì)胞介素-10(IL-10)、白細(xì)胞介素-18(IL-18)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平的動態(tài)改變及其與冠脈損傷的關(guān)系。方法選取我院2009年1月至2012年12月期間住院的KD患兒73例，根據(jù)冠狀動脈損傷情況分為無冠狀動脈損傷組(NCAL組)和伴冠狀動脈損傷組(CAL組)，以同期門診體檢健康兒童30例作為正常對照。采用ELISA法檢測患兒血清IL-10、IL-18和TNF-α水平，并與正常對照組進行比較分析，其中KD患兒分別于急性期和亞急性期各檢測一次。結(jié)果KD患兒急性期和亞急性期的血清IL-10、IL-18和TNF-α水平均顯著高于對照組，KD急性期的IL-10、IL-18和TNF-α水平均顯著高于其亞急性期(P＜0.01)。IL-10水平在NCAL組顯著高于CAL組，CAL組顯著高于對照組；CAL組的IL-18和TNF-α水平顯著高于NCAL組，NCAL組顯著高于對照組(P＜0.01)。結(jié)論IL-10、IL-18和TNF-α可作為KD早期診斷的重要指標(biāo)，動態(tài)觀察其濃度變化具有預(yù)測冠狀動脈損傷的價值。

川崎病；白細(xì)胞介素-10；白細(xì)胞介素-18；腫瘤壞死因子-α；冠狀動脈損傷

川崎病(KD)又稱皮膚黏膜淋巴結(jié)綜合征，是一種急性發(fā)熱性系統(tǒng)性血管炎綜合征，冠脈損傷是最嚴(yán)重的并發(fā)癥，其發(fā)病機制較復(fù)雜，免疫系統(tǒng)的高度活化和免疫損傷性血管炎是KD的顯著性特征。本研究旨在探討白細(xì)胞介素-10(IL-10)、白細(xì)胞介素-18 (IL-18)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)在KD患兒血清中的變化及與冠狀動脈病變的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2009年1月至2012年12月在本院兒科住院的73例川崎病患兒(KD組)，36例為無冠狀動脈損傷組(NCAL組)，37例為伴冠狀動脈損傷組(CAL組)，診斷及冠狀動脈損傷符合《諸福棠實用兒科學(xué)》(第7版)的診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]。其中男性39例，女性34例，發(fā)病時平均年齡為(42±10)個月。選取同期門診體檢健康兒童30例作為正常對照組，其中男性16例，女性14例，平均年齡(40±9)個月。兩組兒童在年齡、性別方面差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 標(biāo)本采集 KD患兒于急性期(0～2周)與亞急性期(2～4周)和正常對照組體檢時采集靜脈血3 ml，以3 000 r/min離心10 min，分離血清置-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 檢測方法 采用ELISA方法檢測，IL-10、IL-18和TNF-α檢測試劑盒由深圳晶美生物工程有限公司提供，其中IL-10試劑批號為20130306，IL-18試劑批號為20130327，TNF-α試劑批號為20130424，嚴(yán)格按說明書進行操作。酶標(biāo)儀為芬蘭Labsystem公司Multiskan MK3型。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，檢測結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，組間分析采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清IL-10、IL-18和TNF-α水平比較 KD急性期三個指標(biāo)顯著高于KD亞急性期，KD亞急性期三個指標(biāo)顯著高于正常對照組(P＜0.01)，見表1。

表1 三組血清IL-10、IL-18和TNF-α水平比較（，pg/ml）

表1 三組血清IL-10、IL-18和TNF-α水平比較（，pg/ml）

注：KD急性期與KD亞急性期比較，aP＜0.01，KD亞急性期與對照組比較，bP＜0.01。

KD組急性期亞急性期正常對照組73 73 30 28.6±7.1a15.3±4.9b6.5±1.8 170.2±51.3a94.5±31.6b 58.2±15.4 15.2±4.6a9.8±2.7b5.9±1.5

2.2 CAL組、NCAL組急性期和正常對照組血清IL-10、IL-18和TNF-α水平比較 IL-10水平NCAL組顯著高于CAL組、CAL組顯著高于正常對照組；IL-18和TNF-α水平CAL組顯著高于NCAL組、NCAL組顯著高于正常對照組(P＜0.01)，見表2。

表2 CAL組、NCAL組急性期和正常對照組血清IL-10、IL-18和TNF-α水平比較（，pg/ml）

表2 CAL組、NCAL組急性期和正常對照組血清IL-10、IL-18和TNF-α水平比較（，pg/ml）

注：CAL組與無CAL組比較，aP＜0.01；NCAL組與對照組比較，bP＜0.01。

組別CAL組NCAL組正常對照組例數(shù)37 36 30 IL-10(pg/ml) 22.4±3.6a34.1±7.7b6.5±1.8 IL-18(pg/ml) 232.8±62.5a124.0±37.3b58.2±15.4 TNF-α(pg/ml) 22.7±5.8a10.5±3.0b5.9±1.5

3 討 論

KD是一種以全身血管炎為主要病變的兒童急性發(fā)熱、出疹性疾病，它常導(dǎo)致發(fā)病患兒冠狀動脈炎、冠狀動脈瘤及血栓形成等臨床表現(xiàn)，對發(fā)病患兒的遠(yuǎn)期生存質(zhì)量有著顯著的影響[2]。KD發(fā)病機理較為復(fù)雜，免疫反應(yīng)及其產(chǎn)生的細(xì)胞因子活性在川崎病的發(fā)生、發(fā)展和冠狀動脈損傷起著關(guān)鍵性作用。近年來，KD的發(fā)病率有逐年上升趨勢，是兒童后天獲得性心臟病最常病因之一，因此，臨床對KD的關(guān)注度越來越高。研究表明，IL-10、IL-18和TNF-α等細(xì)胞因子濃度的變化與KD發(fā)生和發(fā)展相關(guān)。

IL-18是近幾年來新發(fā)現(xiàn)的一種分子量為18～19 KD的多肽類物質(zhì)，其來源主要由單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，其生物學(xué)效應(yīng)為促進T淋巴細(xì)胞增殖及增強CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用，同時還具有強大誘生TNF-α和IFN-γ等細(xì)胞因子的能力，導(dǎo)致其在介導(dǎo)細(xì)胞浸潤、炎性反應(yīng)和組織器官損傷中起到非常重要的作用，因此IL-18是多種免疫性疾病的重要細(xì)胞因子。IL-18在KD發(fā)病機制中所起作用可能是在感染病原體的誘發(fā)下，激活的炎癥細(xì)胞分泌包括IL-18在內(nèi)的多種活性遞質(zhì)，此時若易感染個體出現(xiàn)異常的免疫級聯(lián)反應(yīng)，IL-18過度分泌，并誘導(dǎo)產(chǎn)生大量IFN-γ和TNF-α等細(xì)胞因子，從而造成血管免疫炎性反應(yīng)，最終導(dǎo)致KD的發(fā)生[3]。IL-18在KD急性期水平顯著高于其亞急性期，CAL組水平顯著高于NCAL組(P＜0.01)，證實其與KD的發(fā)生及冠脈的損傷成正相關(guān)，這與張本山等[4]的報道一致。

TNF-α是一種具有廣泛生物活性的多肽調(diào)節(jié)因子，主要由單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，參與機體多種炎性反應(yīng)。它的主要生物學(xué)效應(yīng)為作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，導(dǎo)致血小板活化因子及IL-1的釋放，對炎性細(xì)胞粘附、浸潤及中性粒細(xì)胞脫顆粒，促凝血，在血栓形成、動脈粥樣硬化和DIC等疾病發(fā)病機制中有一定意義[5]。血液循環(huán)系統(tǒng)中持續(xù)釋放的高濃度TNF-α對血管內(nèi)皮細(xì)胞有直接的毒性作用，其機制為通過增強內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞上的粘附分子表達，使血液中白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞之間的粘附作用增強，誘發(fā)機體凝血機制，經(jīng)一系列連鎖反應(yīng)，產(chǎn)生血栓并阻塞血管，引起血管損傷[6]。麥惠玲[7]研究認(rèn)為，TNF-α作為一種主要促炎細(xì)胞因子，參與了川崎病炎癥和免疫反應(yīng)發(fā)生和發(fā)展過程，并與冠狀動脈損傷呈正相關(guān)，在川崎病致冠狀動脈損傷的防治并對病情的預(yù)后作科學(xué)的評估中具有重要循證醫(yī)學(xué)依據(jù)。

IL-10是由Th2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子合成抑制因子，其來源主要為單核/巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞，其功能為主要調(diào)節(jié)T、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等的產(chǎn)生，抑制多種免疫活性細(xì)胞細(xì)胞因子的表達，阻止炎性細(xì)胞因子的分泌，還能抑制細(xì)胞粘附分子的產(chǎn)生，防止血栓形成等，防止心肌缺血、缺血再灌注損傷，保護心肌，對免疫細(xì)胞和免疫分子有雙向調(diào)節(jié)作用[8]。本研究中KD急性期IL-10水平顯著高于其亞急性期、KD亞急性期水平顯著高于正常對照組(P＜0.01)，并且NCAL組水平顯著高于CAL組(P＜0.01)，表明IL-10分泌是機體免疫系統(tǒng)的一種代償性反應(yīng)，在KD全身免疫系統(tǒng)過度活化中起重要的負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用，對KD炎性細(xì)胞因子所介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷具有保護作用。若循環(huán)系統(tǒng)中IL-10水平偏低，其濃度不足以拮抗IL-18、TNF-α等炎性因子的作用而引起冠狀動脈損傷，因此血清中IL-10水平可能與KD是否發(fā)生冠狀動脈損傷或損傷的嚴(yán)重程度有關(guān)[9]。

KD血管損傷的機制較復(fù)雜，有許多重要理論和學(xué)說，免疫炎癥因子是其重要原因之一。血管內(nèi)皮細(xì)胞與血液循環(huán)系統(tǒng)中免疫活性細(xì)胞間相互粘附和聚集是導(dǎo)致炎癥反應(yīng)向血管深層浸潤的初始因素，提示血液粘附分子可能介導(dǎo)KD全身循環(huán)中的免疫效應(yīng)細(xì)胞向血管局部浸潤，在血管損傷的病理生理發(fā)生機制中起重要作用[10-11]。

總之，IL-10、IL-18和TNF-α可作為KD早期診斷的重要實驗室指標(biāo)，作為循證醫(yī)學(xué)證據(jù)，在KD致CAL的預(yù)測和預(yù)后評估中具有重要的臨床價值。

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Association among serum IL-10,IL-18 and TNF-α levels in children with Kawasaki disease and coronary artery lesion.

LIU Xia,WANG Ying,HE Jing.
Department of Clinical Laboratory,People's Hospital of Guilin,Guilin 541002,Guangxi,CHINA

ObjectiveTo explore the changes in serum levels of IL-10、IL-18 and TNF-α in children with Kawasaki disease(KD)and its association with coronary artery lesion.MethodsSerum samples were collected from 73 children with KD from Jan 2009 to Dec 2012,which were divided into non-coronary artery lesion group(NCAL) and coronary artery lesion group(CAL)according to the coronary artery damage.Thirty healthy children underwentoutpatient medical examination at the same period were selected as controls.The levels of serum IL-10,IL-18 and TNF-α were detected by ELISA,and then the results were compared.ResultsThe levels of IL-10,IL-18 and TNF-α in children with acute KD and subacute KD were higher than those in the control group;and those with acute KD were higher in than those with subacute KD(P＜0.01).The level of IL-10 in NCAL group was higher than that in CAL group,which in CAL group was also higher than that in the control group.The levels of IL-18 and TNF-α in CAL group were higher than those in NCAL group,which in NCAL group were higher than that in the control group (P＜0.01).Conclusion IL-10、IL-18 and TNF-α could be important indexes for early diagnosis of KD,and the dynamic observation of their changes could predict the coronary artery lesion.

Kawasaki disease(KD);IL-10;IL-18;TNF-α;Coronary artery lesion

R725.9

A

1003—6350（2014）14—2095—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.14.0811

2013-12-27)

劉 霞。E-mail：zhaoxia1008@163.com