不同電針對SAMP8模型小鼠血清MDA含量、SOD活力及行為學(xué)影響*

陳軒霆 王詩惠 時(shí)素華 周 源 姚海江 宋洪濤 姜 靜 李志剛△（.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 0009；.北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，北京 0009）

不同電針對SAMP8模型小鼠血清MDA含量、SOD活力及行為學(xué)影響*

陳軒霆1王詩惠1時(shí)素華2周 源1姚海江1宋洪濤1姜 靜1李志剛1△
（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，北京 100029）

目的觀察音樂電針和脈沖電針對快速老化小鼠P8亞系（SAMP8）血清MDA含量及SOD活性的影響。方法將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為5組，即模型組、音樂電針組、藥物組、脈沖電針組、空白組。模型組和空白組不予以治療；音樂電針組和脈沖電針都配相同穴位進(jìn)行相應(yīng)針刺治療；藥物組予鹽酸多奈哌齊灌胃。治療15 d后用Morris水迷宮檢測各組小鼠學(xué)習(xí)記憶能力；測定血清SOD活力和MDA含量。結(jié)果模型組的逃避潛伏期時(shí)間大于空白組（P＜0.01）；而兩電針組和藥物組與模型組比較，逃避潛伏期時(shí)間明顯減少（P＜0.01）。模型組血清MDA含量明顯高于空白組（P＜0.01），SOD活力明顯低于空白組（P＜0.01）；而電針組和藥物組MDA含量明顯低于模型組（P＜0.01），SOD活力明顯高于模型組（P＜0.01）。音樂電針組療效優(yōu)于脈沖電針組（P＜0.05）。結(jié)論不同電針均能夠改善 SAMP8小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能，可以升高小鼠血清SOD水平，降低MDA水平，而音樂電針療效略優(yōu)于脈沖電針，提示音樂電針治療效果更好。

快速老化 音樂電針 脈沖電針 抗氧化

阿爾茨海默癥（AD）是嚴(yán)重危害老年人身心健康的重大疾病之一。它是一種好發(fā)于老年群體，以進(jìn)行性認(rèn)知功能損害、記憶能力降低的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退變性疾病。其臨床主要表現(xiàn)為記憶力障礙、意識(shí)障礙、情緒改變、分析判斷能力減退、甚至行為失常。隨著社會(huì)老齡化的到來，易患人群逐漸增多，給社會(huì)和家庭也帶來了沉重的負(fù)擔(dān)。因?yàn)槠浒l(fā)病機(jī)制復(fù)雜，受患者個(gè)人環(huán)境、家庭環(huán)境、以及社會(huì)環(huán)境的影響。尋找有效的AD治療方法已成為當(dāng)今醫(yī)學(xué)界的一個(gè)共同面對的難題。目前有研究表明，針灸對AD的治療效果好，周期短、綠色健康，但其具體的作用機(jī)制比較復(fù)雜，有可能同時(shí)作用于多個(gè)內(nèi)在系統(tǒng)，從而發(fā)揮作用，其確切機(jī)制有待進(jìn)一步研究［1］。

為此，本實(shí)驗(yàn)以快速老化小鼠P8亞系（SAMP8）作為模型，選取相應(yīng)的穴位，以脈沖電針和音樂電針作為治療手法，在觀察行為學(xué)指標(biāo)的同時(shí)測定小鼠大腦血清丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活力變化，比較音樂電針和脈沖電針兩者的療效。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性，8月齡，體質(zhì)量（30±2）g，清潔級(jí)SAMP8、SAMR1小鼠（由天津中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）合格證編號(hào)為SCXK（津）2008-0001。飼養(yǎng)環(huán)境，溫度為（23±1）℃，12 h光照，濕度45％，自由進(jìn)食，單籠飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，排除飲食及環(huán)境等可能對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生的影響。

1.2 分組 隨機(jī)選取24只SAMP8小鼠分為模型組（N）、脈沖電針組（E）、音樂電針組（M）、藥物組（D），以及同背景、同月齡6只SAMR1小鼠作為空白組（C）。

1.3 針具與藥物試劑 華佗牌無菌針灸針，規(guī)格0.30mm× 25 mm；電針用韓式（HANS-202）型電針儀（南京濟(jì)生醫(yī)療科技有限公司）；音樂電針用ZJ-12H治療儀（中國針灸學(xué)會(huì)研制，哈爾濱致厚醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)）；Morris水迷宮（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所）；SOD、MDA試劑盒由南京建成生物工程研究所提供；鹽酸多奈哌齊片［衛(wèi)材（中國）藥業(yè)有限公司制造，批號(hào)H20050978］。

1.4 治療 音樂電針組以1寸毫針點(diǎn)刺小鼠人中穴，向下平刺百會(huì)穴、向上平刺印堂穴（穴位選取參考實(shí)驗(yàn)動(dòng)物針灸穴位圖譜）。進(jìn)針深度為3～5 mm，百會(huì)穴、印堂穴針柄接音樂電針治療儀，頻率為2 Hz，電流強(qiáng)度為1 mA，以此同時(shí)選取節(jié)奏明朗、速度與力度適中的音樂處方—《碧海揚(yáng)帆》，調(diào)節(jié)強(qiáng)度以使動(dòng)物不掙扎嘶叫且保持安靜為度，留針20 min。脈沖電針組針刺穴位步驟以及針刺穴位同音樂電針組，針刺之后針柄連韓式電針儀，頻率、電流強(qiáng)度、以及留針時(shí)間一致。藥物組將由用雙蒸水和鹽酸多奈哌齊配制成1 mg/mL的濃度，按照0.92 mL/kg的劑量灌胃給藥。模型組、空白組只做和音樂電針組治療過程的相同束縛。以上4組進(jìn)行同步實(shí)驗(yàn)，每日進(jìn)行1次，連續(xù)15 d。

1.5 行為學(xué)檢測 各組動(dòng)物在治療結(jié)束后，采用Morris水迷宮測試小鼠定位航行及空間搜索之學(xué)習(xí)記憶能力，同時(shí)記錄各組動(dòng)物到達(dá)站臺(tái)的逃避潛伏期游泳時(shí)間，檢測行為學(xué)指標(biāo)。待行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，摘除小鼠眼球取血，將所得血液迅速放入1 mL的離心管中。低溫離心15 min（4℃，2～4 h，3000 r/min），將離心所得上清液迅速移入離心管，移入低溫冰箱（-20℃），等待檢測。SOD、MDA測定嚴(yán)格按照試劑盒的說明進(jìn)行操作。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。計(jì)量資料以（±s）表示，各組間比較先采用方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠血清MDA含量、SOD活力比較 見表1。與空白組相比，模型組SOD活性降低，MDA含量增加。與模型組相比較，音樂電針組、脈沖電針組和藥物組SOD活性升高（P＜0.01），MDA含量降低（P＜0.01）；與脈沖電針組相比，音樂電針組血清SOD活性有升高趨勢，MDA含量有減少趨勢（P＜0.05）。

表1 各組小鼠血清MDA含量、SOD活力比較（±s）

表1 各組小鼠血清MDA含量、SOD活力比較（±s）

與空白組比較，**P＜0.01；與模型組比較，△△P＜0.01；與藥物組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；與脈沖電針組比較，▲P＜0.05。

組 別 n MDA SOD C組 6 3.38±0.21 98.03±5.24 N組 6 8.39±0.30** 68.91±1.82**D組 6 4.50±0.20△△ 85.72±2.45△△E組 6 4.73±0.32△△ 76.93±3.04△△＃＃M組 6 4.62±0.37△△ 81.53±2.88△△?！?/p>

2.2 音樂電針組與其他組小鼠逃避潛伏期比較 見表2。模型組逃避潛伏期大于空白組（P＜0.01）；兩電針組明顯少于藥物組與模型組（P＜0.01）。

表2 各組小鼠實(shí)隱蔽平臺(tái)實(shí)驗(yàn)逃避潛伏期比較（d，±s）

表2 各組小鼠實(shí)隱蔽平臺(tái)實(shí)驗(yàn)逃避潛伏期比較（d，±s）

與空白組比較，**P＜0.01；與模型組比較，△△P＜0.01。

組別 n 5 d C組 6 28.33±18.36 N組 6 45.86±10.47**D組 6 33.12±13.33△△56.42±5.87 51.09±9.92 47.24±5.69 35.20±12.53△△M組 6 55.08±6.69 48.84±6.61 47.59±3.77 40.50±9.64 32.86±10.02△△1 d 2 d 3 d 4 d 55.19±4.63 49.08±12.61 37.19±7.56 30.34±9.54 56.31±5.74 57.64±3.66 51.05±13.00 47.87±14.24**58.41±2.12 53.88±6.53 46.27±8.30 42.84±10.17 E組 6 29.68±4.29△△

3 討論

SAMP8小鼠是由日本京都大學(xué)竹田俊男教授成功培養(yǎng)的有嚴(yán)重老化病癥的易快速老化系SAMP和生命過程正常的抗快速老化系SAMR。相關(guān)研究表明，SAMP8小鼠相較之正常老化的SAMR1小鼠，在8月齡更容易出現(xiàn)較為明顯的學(xué)習(xí)記憶障［2］。因SAMP8小鼠同時(shí)具有比較典型的老化癥狀和學(xué)習(xí)記憶功能的衰退現(xiàn)象，所以現(xiàn)今被廣泛用于研究評價(jià)有關(guān)老化疾病和改善學(xué)習(xí)記憶能力的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?/p>

目前認(rèn)為，當(dāng)體內(nèi)的生理機(jī)能衰老時(shí)，會(huì)引起體內(nèi)細(xì)胞代謝功能低下、增殖能力下降、酶活性下降，從而導(dǎo)致器官萎縮、認(rèn)知功能低下。換言之，體內(nèi)的細(xì)胞衰老，是生物體衰老的根本原因，也是各種老年病的發(fā)病基礎(chǔ)。在對AD的研究中發(fā)現(xiàn)，海馬是氧化損害最早累及的部位，SOD能夠阻滯由于大量過氧化氫（H2O2）蓄積所導(dǎo)致的神經(jīng)元凋亡的發(fā)生。氧自由基引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，從而推進(jìn)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物（如MDA）的產(chǎn)生，其對細(xì)胞毒性作用增強(qiáng)，使得神經(jīng)元變性壞死，最終導(dǎo)致老年性癡呆的發(fā)生。研究表明，因?yàn)椴±碜兓瘜?dǎo)致抗氧化性酶的減少，會(huì)使得機(jī)體的氧化度增大，從而加快衰老。自由基為機(jī)體正常代謝的產(chǎn)物，自由基的產(chǎn)生會(huì)對細(xì)胞膜、蛋白質(zhì)等進(jìn)行攻擊代謝，從而引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng)并且促進(jìn)分子的交聯(lián)，加快對機(jī)體老化的作用。清除自由基，降低體內(nèi)過氧化脂質(zhì)對延緩衰老和防治癡呆具有重要的作用。生理情況下，機(jī)體內(nèi)存在氧化和抗氧化系統(tǒng)，二者保持平衡，但隨年齡的增大，平衡發(fā)生改變，表現(xiàn)為氧化作用增強(qiáng)，抗氧化能力減弱，自由基產(chǎn)生過多。自由基的產(chǎn)生，能破壞機(jī)體細(xì)胞膜，甚至切斷DNA鏈，從而加速細(xì)胞的衰老，造成機(jī)體衰老［3-4］。SOD和MDA是體內(nèi)非常重要的對抗自由基酶，同時(shí)也是是評價(jià)體內(nèi)抗氧化與氧化的平衡體系的重要指標(biāo)。SOD是機(jī)體內(nèi)能清除自由基的抗氧化物，同時(shí)還具有抗自由基損傷作用。MDA是氧化應(yīng)激反應(yīng)中脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，二者含量的變化，可反映老年癡呆病理情況下和自由基的釋放與清除情況、機(jī)體之間的氧化水平、以及其對組織細(xì)胞損傷的程度［5-6］。張國威等實(shí)驗(yàn)表明，電針治療老年癡呆大鼠，具有改善其腦組織SOD活性，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的作用［7］。

將音樂作為一種治療手段，結(jié)合傳統(tǒng)電針的優(yōu)勢，可達(dá)到促進(jìn)機(jī)體身心健康的治療目的。音樂電針是將世界上臨床運(yùn)用的音樂保健療法與我國傳統(tǒng)的針灸治療法基礎(chǔ)上而改進(jìn)，并且具有典型代表性的中國本土特色的音樂療法相結(jié)合的產(chǎn)物。將參差不齊同時(shí)又和諧的聲波，搭配上針感舒適，結(jié)合針刺局部組織穩(wěn)定，同時(shí)克服了脈沖電針在后期的局部組織跳動(dòng)的缺點(diǎn)。劉剛等研究認(rèn)為，針刺配合音樂療法的效果優(yōu)于單一針刺，說明音樂療法結(jié)合針刺有著更顯著的效果［8］。

本實(shí)驗(yàn)顯示，通過對相應(yīng)穴位的刺激，不同電針的治療可以使得小鼠在Morris水迷宮里面的潛伏期時(shí)間減少，從而改變SAMP8模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。在對血清活性SOD和MDA含量上的改變上，藥物組、音樂電針組和脈沖電針組都能夠升高SOD活性，減少血清MDA含量。但是音樂電針組較脈沖電針組、藥物組的作用更為顯著，提示音樂電針通過改變血清SOD活性以及MDA含量，從而起到抗癡呆作用，療效更顯著，其具體作用機(jī)制尚需進(jìn)一步的研究。

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The Effect of Different Electro-acupuncture Therapies on SOD Activity，Malondialde-hyde Content in Serum of SAMP8 Rats and on Their Behaviors

CHEN Xuanting，WANG Shihui，SHI Suhua，et al.Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China

Objective：To observe the effect of musical and pulse electro-acupuncture therapies on MDA content and SOD activity of SAMP8 rats.Methods：24 8-month-old male rats were randomly divided into four groups：model group（N），musical electro-acupuncture group（M），drug group（D），pulse electro-acupuncture group（E）and blank group（C）.Rats in model group and blank group were not treated；rats in musical electroacupuncture group and pulse electro-acupuncture group were treated with acupuncture at related acupuncture acupoints；rats in drug group were given donepezil hydrochloride gavarage（0.92 milligrams per kilogram）.After 15 days of treatment，use the Morris water maze to test the learning and memory ability of mice in different groups and detect the SOD activity and MDA content in the serum.Results：（1）After treatment，escape latency of rats in model group was longer than that of blank group（P＜0.01），while escape latency of rats in different electroacupuncture groups and drug group were clearly shorter than that of model group（P＜0.01）.（2）In model group，MDA content in serum was significantly higher than that of blank group（P＜0.01），but SOD activity was less powerful than that of blank group（P＜0.01）.MDA content in different electro-acupuncture groups and drug group was less powerful than model group while SOD activity was more powerful than that in model group（P＜0.01）. The effect of musical electro-acupuncture therapy was better than that of pulse electro-acupuncture therapy. Conclusion：Both electro-acupuncture therapies can improve the learning and memory ability of SAMP8 rats，increase SOD activity，and decrease MDA content in serum of SAMP8 rats.But the effect of musical electroacupuncture therapy is better than that of pulse electro-acupuncture therapy.

Rapid aging；Musical electro-acupuncture；Pulse electro-acupuncture；Antioxidant

R245.9+7

A

1004-745X（2014）08-1400-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2014.08.002

2014-04-15）

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No.81273825）；教育部大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目（201210026020）

△通信作者