培養(yǎng)基保存方法的改善

王開校

（新沂市疾病預(yù)防控制中心，江蘇 新沂 221400）

培養(yǎng)基保存方法的改善

王開校

（新沂市疾病預(yù)防控制中心，江蘇 新沂 221400）

目的 探索培養(yǎng)基（液）有效期更長的適宜保存方法。方法 通過細菌生長實驗和培養(yǎng)基（液）稱量實驗對兩種方法進行對比。結(jié)果 塑料袋扎口法保存的培養(yǎng)基（液）有效期更長。結(jié)論 塑料袋扎口法簡單、經(jīng)濟、實用、有效，適合基層疾病預(yù)防控制中心。

培養(yǎng)基；保存；改善

近年來，隨著經(jīng)濟的發(fā)展和國家的重視，尤其自2003年“非典”之后，各級政府加大投入，很多疾病預(yù)防控制中心軟、硬件建設(shè)得到了很大提高。然而，在基層單位，微生物檢驗的軟硬件提高幅度不大。微生物檢驗工作面廣量大、專業(yè)性強、質(zhì)量要求高，并且具有突發(fā)性和臨時性，尤其在進行微生物檢驗最基本的步驟—培養(yǎng)基（液）的配制及保存時極為重要[1]。常規(guī)方法保存時效短，無法解決相對配制量大和實驗利用率小的矛盾。為了解決這個矛盾，結(jié)合基層單位實際，我們在實際工作中用塑料袋扎口法保存平皿和試管類培養(yǎng)基（液），經(jīng)實驗觀察發(fā)現(xiàn)效果良好。

1　實驗結(jié)果

1.1培養(yǎng)基（液）水分濃縮對細菌生長的影響

只要在適宜的溫度下保存，無論何種培養(yǎng)基在一定的時間內(nèi)均可以保持穩(wěn)定的作用。但是，水分的減少改變了培養(yǎng)基內(nèi)各種成分的濃度，這是培養(yǎng)基失效的主要原因[2]。本次實驗，我們選擇最常用的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和SS培養(yǎng)基，通過細菌生長實驗觀察：培養(yǎng)基水分濃縮在5%～10%對實驗細菌生長沒有明顯影響。因此，我們認為，一般情況下，水分濃縮率不超過10%的培養(yǎng)基均有效、可用，見表1。

1.2平皿類培養(yǎng)基塑料袋扎口法與紙包法的比較

首先選擇平皿培養(yǎng)基做實驗，根據(jù)平皿培養(yǎng)基稱量實驗，平皿類培養(yǎng)基常規(guī)保存，水分濃縮率不超過10%，一般為3～7 d[3]；塑料袋扎口法可達到21 d以上。結(jié)合細菌生長要求，我們認為培養(yǎng)基常規(guī)保存有效期為3～7 d；塑料袋扎口法保存平皿類培養(yǎng)基有效期至少為3周。見表2。

表2　SS瓊脂平皿培養(yǎng)基保存效果觀察結(jié)果

1.3試管類培養(yǎng)液塑料袋扎口法與紙包法的比較

對于試管類培養(yǎng)基，同理做水分減少率實驗，試管類培養(yǎng)液，冰箱保存常規(guī)法水分濃縮率不超過10%，一般為7～14 d，而塑料袋扎口法冰箱保存可達50 d以上[4]。結(jié)合細菌生長要求，我們認為試管類培養(yǎng)液，常規(guī)保存有效期為7～14 d；塑料袋扎口法保存有效期至少為50 d，見表3。

表1　培養(yǎng)基水分濃縮對細菌生長的影響

表3　試管類培養(yǎng)液兩種方法保存效果

2　討 論

2.1影響微生物檢驗質(zhì)量因素很多，有原材料、水質(zhì)、滅菌效果、pH及其他。但是，有效的培養(yǎng)基是關(guān)鍵。培養(yǎng)基的配制、保存尤為重要。無論何種培養(yǎng)基（液），水分的改變既改變了各種成分的比例、pH，也改變了其外觀性狀（如固體培養(yǎng)基硬度），從而改變了所需培養(yǎng)的微生物的適宜生長、繁殖必需條件，這是培養(yǎng)基（液）失效的主要原因。因而，在日常工作中，我們只有使用有效期內(nèi)的培養(yǎng)基（液），才能有效、準確地進行微生物的培養(yǎng)、分離、鑒定；才能保證微生物檢驗工作的質(zhì)量。GB/T27405-2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品微生物檢測》[2]中對培養(yǎng)基有很詳細的規(guī)定，我們應(yīng)該將培養(yǎng)基的質(zhì)量控制納入質(zhì)量管理體系進行嚴格管理。

2.2保存培養(yǎng)基（液）的冰箱無法達到無菌和密閉，有一定空氣流通。因而，常規(guī)法保存培養(yǎng)基（液），空氣流通可加速培養(yǎng)基（液）中水分的流失，從而改變各種成分的比例、pH和其外觀性狀（如固體培養(yǎng)基硬度）；也增加空氣中微生物對其污染[5]。塑料袋扎口法，減少了空氣的流通，從而，既減少培養(yǎng)基（液）中水分的流失，也減少空氣中微生物對其污染，保存有效期相對更長[6]。

2.3盡管“非典”以后，國家及各級政府都加大投入，疾病預(yù)防控制機構(gòu)的軟硬件建設(shè)得到一定提高。但是，由于疾病預(yù)防控制工作的性質(zhì)及各種因素的影響，衛(wèi)生檢驗工作受到很大的沖擊。尤其是很多基層單位，在微生物檢驗方面投入甚微。近年來，工作量呈逐年增長趨勢，檢驗人員卻逐年減少，許多需要開展的工作受到了嚴重影響。塑料袋扎口法雖然簡單，但是經(jīng)濟、實用、有效；尤其對基層疾病預(yù)防控制中心來說，既大大節(jié)省了大量重復(fù)勞動量，提高了工作效率，解決了工作量大和相對人員偏少的矛盾；又充分體現(xiàn)小投入大產(chǎn)出，解決了基層疾病預(yù)防控制中心培養(yǎng)基相對配制量多和實際利用少的大矛盾。

[1] 吳清平,孟凡亞,蔡芷荷,等.微生物培養(yǎng)基質(zhì)量控制技術(shù)和標準[J].微生物學(xué)通報,2006,33(6):128-132.

[2] 孫燕萍,凌霞,彭浩,等.1份半固體培養(yǎng)基保存的模擬肛拭樣品鑒定結(jié)果分析[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2009,36(23):4542-4543.

[3] Lopes CAP,dos Santos RR,Celestino JJH,et al.Short-term preservation of canine preantral follicles: Effects of temperature,medium and time[J].Anim Reprod Sci,2009,115(1):201-214.

[4] Onuma K,Urabe K,Naruse K,et al.Cold preservation of rat osteochondral tissues in two types of solid organ preservation solution, culture medium and saline[J].Cell Tissue Bank,2009,10(1):1-9.

[5] Isachenko E,Isachenko V,Nawroth F,et al.Human ovarian tissue preservation: is vitrification acceptable method for assisted reproduction?[J].Cryoletters,2008,29(4):301-314.

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1671-8194（2014）19-0110-02