麝香接骨膠囊中非法添加松香酸檢測(cè)方法的建立

楊 芳

（湖南省常德市藥品檢驗(yàn)所，湖南 常德 415000）

麝香接骨膠囊中非法添加松香酸檢測(cè)方法的建立

楊 芳

（湖南省常德市藥品檢驗(yàn)所，湖南 常德 415000）

目的 建立麝香接骨膠囊中非法添加松香酸的快速篩選方法。方法 采用薄層色譜法（TCL）結(jié)合高效液相色譜法（HPLC）進(jìn)行篩選分析。結(jié)果 該薄層色譜法（TCL）結(jié)合高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定麝香接骨膠囊中非法添加的松香酸穩(wěn)定性和重復(fù)性好。結(jié)論TCL結(jié)合HPLC的方法簡(jiǎn)便、可靠、快速、重現(xiàn)性好，能有效地檢查麝香接骨膠囊中是否摻有松香酸。

麝香接骨膠囊；松香酸；薄層色譜法；反相高效液相色譜法；含量測(cè)定

麝香接骨膠囊主要由血竭、赤芍、麻黃（蜜制）等22味中藥組成。處方中未含有松香及含松香酸成分的物質(zhì)。但在檢驗(yàn)過程中常常檢出松香酸。因不法分子為了牟取暴利常在加工過程中加入松香來代替血竭造假。松香中的松香酸對(duì)局部組織有刺激性，大量?jī)?nèi)服吸收后中樞神經(jīng)先興奮后麻醉，對(duì)身體造成極大的損害。而現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中沒有松香酸的檢查。為了維護(hù)患者用藥安全有效，提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，筆者采用薄層色譜法（TCL）結(jié)合高效液相色譜法（HPLC）建立了麝香接骨膠囊中非法添加的松香酸的快速檢驗(yàn)方法，為更好打擊不法行為提供可靠的技術(shù)保障，為完善該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waterse2695高效液相色譜儀（包括Waters2489紫外檢測(cè)器、四元梯度泵、在線脫氣裝置、柱溫箱、EMPOWER色譜工作站；溶劑過濾系統(tǒng)），梅特勒一托利多AG135型天平（德國Sartorius），KQ2200E型超聲波清洗器。所用儀器和量具均進(jìn)行校正和檢定。

1.2 試劑

水為一級(jí)水，乙腈為色譜純，甲醇、石油醚、乙酸乙酯、冰醋酸均為分析純；松香酸對(duì)照品（批號(hào)：110805-200306），購于中國藥品生物制品檢定所。

圖2 對(duì)照品溶液（A），未檢出松香酸的樣品溶液（B），陰性樣品溶液（C）、檢出松香酸（陽性）樣品溶液（D）的HPLC色譜圖

1.3 試藥

供試品：市場(chǎng)上銷售的10批麝香接骨膠囊；參照樣品粉末：按標(biāo)準(zhǔn)中提供的處方及制法制備。陰性樣品粉末：按標(biāo)準(zhǔn)中提供的處方，去血竭后依法制備。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC法

分別取樣品的內(nèi)容物、陰性樣品、2.0 g，置錐形瓶中，加石油醚（60～90 ℃）20 mL，超聲處理30 min，濾過，取濾液置水浴蒸干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為供試品溶液。另取松香酸對(duì)照品適量，加石油醚（60～90 ℃）制成每1mL含松香酸1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗(yàn)，吸取供試品溶液5 μL，對(duì)照品溶液5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254 薄層板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯-冰醋酸（28∶5∶1）為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外光燈（254 nm）下檢視。見圖1。

圖1 麝香接骨膠囊的TLC圖

3 HPLC法檢查

3.1 供試液的制備

3.1.1 對(duì)照品溶液的配制

精密稱定松香酸對(duì)照品10.00 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為儲(chǔ)備液；精密量取1 mL置20 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。

3.1.2 樣品溶液的制備

取裝量差異項(xiàng)下的樣品內(nèi)容物，研細(xì)，稱取1.000 g，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加甲醇20 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.1.3 陰性樣品溶液的制備

取陰性樣品粉末（除血竭藥材外，將其他藥按處方中藥味的比例）0.5 g，再按樣品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。

3.1.4 參照樣品溶液的制備

取參照樣品粉末（按標(biāo)準(zhǔn)中提供的處方）0.5 g，再按樣品溶液的制備方法制成參照樣品溶液。

3.1.5 陽性樣品溶液的制備

取陰性樣品粉末0.5 g，加松香酸對(duì)照品5.00 mg，混勻，按樣品溶液的制備方法制成陽性樣品溶液。

3.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：十八烷基硅烷健合硅膠為填充柱（ODS-2 Hypersil C18，250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%甲酸溶液（75∶25）；流速：1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：241 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。采用外標(biāo)法定量。理論板數(shù)按松香酸計(jì)算應(yīng)不低于5000[1]。見圖2。

3.3 線性關(guān)系考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：分別精密吸取松香酸對(duì)照品儲(chǔ)備溶液1、5、10、15、25 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，分別進(jìn)樣10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積與進(jìn)樣量，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。得松香酸對(duì)照品的回歸方程分別為Y=2506X+5469，r=0.9998；結(jié)果松香酸線性范圍為8～200 μg/mL。

3.4 精密度試驗(yàn)

分別精密吸取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)連續(xù)進(jìn)樣6次。分別測(cè)定峰面積值，結(jié)果松香酸峰面積的RSD為0.9%（n=6），表明此儀器精密度良好。

3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取取同一樣品溶液，分別于0、5、10、20、30、48 h，分別進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖，結(jié)果松香酸峰面積的RSD為1.3%（n=5），表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品6份，依法制備供試品溶液，以峰面積外標(biāo)法測(cè)定。結(jié)果松香酸峰面積的RSD分別為1.0%，表明該方法重復(fù)性好。

3.7 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取上述含松香酸的供試品9份（0.200 mg/g），分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。分別精密量取3、3、3、5、5、5、10、10、10 mL，置20 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理30分鐘，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，配制高、中、低3組濃度的溶液，每一濃度3份，上述色譜條件測(cè)定，松香酸平均回收率為100.0%；（n=9）。試驗(yàn)結(jié)果見表1?；厥章?（測(cè)得含量-樣品含量）/加入量×100%。

3.8 樣品含量測(cè)定

取麝香接骨膠囊樣品，按“3.1”項(xiàng)下方法制備溶液，按“3.2”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，并用外標(biāo)法計(jì)算松香酸的含量，測(cè)定少部分檢出了松香酸。

4 討 論

4.1 供試液的制備過程中參考文獻(xiàn)[1-9]分別對(duì)提取方法進(jìn)行了考察，以甲醇超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30、60 min進(jìn)行考察，結(jié)果表明：超聲處理30 min和60 min松香酸含量相差不大，故選擇超聲處理30 min。

表1 松香酸回收率測(cè)定結(jié)果（n=9）

4.2 供試液的制備過程中參考文獻(xiàn)[1-9]分別對(duì)提取方法進(jìn)行了考察，分別選擇乙酸乙酯、乙醇、甲醇作為提取溶劑進(jìn)行考察，結(jié)果以甲醇魏提取溶劑提取效果最好。

4.3 本實(shí)驗(yàn)在選擇流動(dòng)相時(shí)，分別選用了乙腈與0.05%甲酸，甲醇與0.05%甲酸等不同比例的流動(dòng)相試驗(yàn)。但均不能達(dá)到滿意效果，參考文獻(xiàn)[1-9]采用乙腈一0.1%甲酸溶液（75∶25），各物質(zhì)間分離良好無干擾，保留時(shí)間穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。

4.4 對(duì)于檢出松香酸的樣品，采用LC-MS/MS方法進(jìn)行了進(jìn)一步的驗(yàn)證：色譜條，干燥氣壓力20psi，毛細(xì)管壓力45V，檢測(cè)器壓力1.5KV。結(jié)果樣品的質(zhì)譜圖中，出現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間一致的樣品。

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1671-8194（2014）19-0108-03