鹽酸左旋咪唑中對(duì)甲苯磺酰氯雜質(zhì)測(cè)定方法的建立

邢亞非* 錢小燕

（南京白敬宇制藥有限責(zé)任公司，江蘇 南京 210038）

鹽酸左旋咪唑中對(duì)甲苯磺酰氯雜質(zhì)測(cè)定方法的建立

邢亞非* 錢小燕

（南京白敬宇制藥有限責(zé)任公司，江蘇 南京 210038）

目的 建立鹽酸左旋咪唑中對(duì)甲苯磺酰氯雜質(zhì)測(cè)定方法并對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證。方法 色譜柱：C18（5 μm×4.6 mm×250 mm），流動(dòng)相：水相（1000 mL水中加1 mL磷酸。用二乙胺調(diào)節(jié)pH=4.5）：甲醇=80∶20；檢測(cè)波長(zhǎng)：200 nm；柱溫：30；進(jìn)樣量：10 μL；定量限不得低于400 ppm。結(jié)果 鹽酸左旋咪唑與對(duì)甲苯磺酰氯峰分離度＞1.5，并與相鄰雜質(zhì)峰分離度＞1.5；在定量限與測(cè)定濃度的150%之間呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2≥0.99。結(jié)論 該方法專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，可用于鹽酸左旋咪唑中對(duì)甲苯磺酰氯的定量測(cè)定。

鹽酸左旋咪唑；對(duì)甲苯磺酰氯；高效液相色譜法

分拆劑是鹽酸左旋咪唑生產(chǎn)原料之一，對(duì)甲苯磺酰氯是分拆劑的起始原料這一，生產(chǎn)中對(duì)甲苯磺酰氯可能會(huì)隨著分拆劑進(jìn)入到原料藥中，根據(jù)EMEA基因毒性雜質(zhì)指南[1]和EMA關(guān)于“基因毒性雜質(zhì)限度指南”的問答[2]，該物質(zhì)具有基因毒性警示結(jié)構(gòu)，故在原料藥中需考察是否含有該雜質(zhì)且應(yīng)控制在允許限度范圍內(nèi)。參照HPLC法測(cè)定鹽酸左旋咪唑片的含量及溶出度[2]、復(fù)方甲苯咪唑粉中鹽酸左旋咪唑含量的測(cè)定[3]、HPLC法測(cè)定鹽酸左旋咪唑中有關(guān)物質(zhì)[4]，我們擬訂了鹽酸左旋咪唑中對(duì)甲苯磺酰氯的測(cè)定方法，通過對(duì)該方法進(jìn)行的預(yù)試驗(yàn)，我們確定建立了本文中的測(cè)定方法，參照中國(guó)藥典附錄ⅩⅨA[5]、美國(guó)藥典附錄1226[6]的要求，我們對(duì)該方法進(jìn)行了驗(yàn)證，確認(rèn)擬定的方法能有效的檢出鹽酸左旋咪唑中對(duì)甲苯磺酰氯。

1 試驗(yàn)材料

1.1 檢驗(yàn)儀器：島津LC-20AT高效液相色譜儀（雙檢測(cè)器）、XP205電子分析天平。

1.2 對(duì)照品：試劑見表1。

表1 試劑表

1.3 藥品：鹽酸左旋咪唑 LV12504。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜儀：島津LC-20AT或相當(dāng)?shù)囊合嗌V系統(tǒng)。色譜柱：C18（5 μm×4.6 mm×250 mm）。柱溫：30 ℃。流速：1.0 mL/min。進(jìn)樣量：10 μL。檢測(cè)波長(zhǎng)：200 nm。檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器、DAD檢測(cè)器。流動(dòng)相：水相（1000 mL水中加1 mL磷酸。用二乙胺調(diào)節(jié)pH=4.5）：甲醇=80∶20。

2.2 專屬性/系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

①溶液配制：系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液：精密稱取約10 mg對(duì)甲苯磺酰氯對(duì)照品和鹽酸左旋咪唑?qū)φ掌分?00 mL量瓶中，用2 mL甲醇充分溶解后用流動(dòng)相稀釋至刻度。②專屬性/系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：鹽酸左旋咪唑與對(duì)甲苯磺酰氯峰的分離度為7.82（應(yīng)≥1.5，各相鄰組分峰的分離度應(yīng)＞1.5；對(duì)甲苯磺酰氯的重復(fù)進(jìn)樣的RSD≤2.0%）。見圖1。

2.3 檢測(cè)限與定量限

圖1

2.3.1 試液制備：①預(yù)試液配制：精密稱取約20 mg對(duì)甲苯磺酰氯對(duì)照品置200 mL量瓶中，用2 mL甲醇充分溶解后用流動(dòng)相稀釋至刻度，再取5 mL置10 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度。②稀釋液：精密稱取約100 mg鹽酸左旋咪唑置100 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度（即供試液濃度1 mg/mL）。

2.3.2 檢測(cè)限與定量限：取對(duì)照品溶液逐級(jí)稀釋，定量限濃度為對(duì)甲苯磺酰氯峰信噪比為（10±1）∶1；且定量限濃度時(shí)3針?biāo)玫膶?duì)甲茉磺酰氯的重復(fù)進(jìn)樣的RSD≤2.0%。檢測(cè)限濃度為對(duì)甲苯磺酰氯峰信噪比為（3±1）∶1；檢測(cè)限濃度應(yīng)不＞100 ppm。定時(shí)限濃度為：289.7 ppm，檢測(cè)限濃度為：97.7 ppm。

2.4 線性范圍

定量限至限度的150%。①線性濃度（表2）。②線性結(jié)果：上述各濃度溶液各進(jìn)樣3針，計(jì)算各濃度對(duì)甲苯酰氯的峰面呈積平均值，以濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)甲苯磺酰氯平均峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算對(duì)甲苯磺酰氯濃度與平均峰面積的線性系數(shù)R2為：0.9977。線性范圍：300～600 ppm。

表2 線性濃度表

2.5 精密度

①稀釋劑：精密稱取約30 mg對(duì)甲苯磺酰氯置100 mL量瓶中，先加2 mL甲醇溶解用流動(dòng)相稀釋至刻度，取該溶液1 mL于100 mL量瓶中用流動(dòng)相稀釋至刻度（即供試液濃度0.003 mg/mL）。②供試液：精密稱取供試品100 mg置100 mL量瓶中用上述稀釋劑稀釋至刻度。③精密度結(jié)果：由化驗(yàn)員A平行配制6份用儀器A每份供試液各進(jìn)樣1針，6次所得的對(duì)甲苯酰氯的含量的RSD為0.81%（應(yīng)≤2.0%）。

峰表 檢測(cè)器 A Ch1 200nm

2.6 中間精密度：由化驗(yàn)員B平行按2.4項(xiàng)下精密度配制6份用儀器B每份供試液各進(jìn)樣1針，6次所得的對(duì)甲苯酰氯的含量的RSD為0.33%（應(yīng)≤2.0%）且12份樣的RSD為0.93%（應(yīng)≤2.0%）

2.7 準(zhǔn)確度：分別取定量限濃度、測(cè)定濃度的80%、100%、120%4個(gè)濃度溶液，測(cè)定各濃度樣品中對(duì)甲苯磺酰氯的量的平均值，計(jì)算回收度，每個(gè)濃度的回收率應(yīng)為80%～120%，測(cè)得結(jié)果見表3。

表3 準(zhǔn)確度表

2.8 耐用性

2.8.1 試液制備

①供試液：按檢驗(yàn)方法配制供試液，加入對(duì)甲苯磺酰氯對(duì)照品使其濃度為300 ppm。② 稀釋液：精密稱取約100 mg鹽酸左旋咪唑置100 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度（即供試液濃度1 mg/mL）。

2.8.2 耐用性條件變更信結(jié)果

①耐用性條件變更：柱溫分別由30變更為25、35；流動(dòng)相比例由80：20變更為85∶15、75∶25；色譜柱更換為另一根同廠家的型號(hào)的色譜柱。②耐用性結(jié)果：兩條件下對(duì)甲苯磺酰氯含量所得結(jié)果計(jì)算RSD≤30.0%，兩根色譜柱對(duì)甲苯磺酰氯、鹽酸左旋咪唑保留時(shí)間相對(duì)偏差分別為0.08、0.04。

3 討 論

3.1 流動(dòng)相的選擇：試驗(yàn)通過對(duì)幾種流動(dòng)相的試驗(yàn)比較，結(jié)果以水相（1000 mL水中加1 mL磷酸。用二乙胺調(diào)節(jié)pH=4.5）：甲醇=80∶20，對(duì)甲苯磺酰氯的峰形較好且與鹽酸左旋咪唑峰的分離度也好，故采用其作為試驗(yàn)的流動(dòng)相。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇：利用DAD檢測(cè)器對(duì)對(duì)甲苯磺酰氯和鹽酸左旋咪唑波長(zhǎng)進(jìn)行全波長(zhǎng)分析，對(duì)甲苯磺酰氯在200 nm有最大吸收，鹽酸左旋咪唑在200 nm也有較強(qiáng)吸收，故選200 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

3.3 溶液穩(wěn)定性考察：經(jīng)對(duì)照品溶液穩(wěn)定性考察和供試品溶穩(wěn)定性考察試驗(yàn)，對(duì)照品溶液在2～8 ℃下可貯存4 d；供試品溶液在室溫下可貯存8 h。

[1] 人用藥品委員會(huì).EMEA基因毒性基因雜質(zhì)指南[S].2006-07-28.

[2] 人用藥品委員會(huì).EMA基因毒性基因雜質(zhì)指南問答[S].2010-09-23.

[3] 曾建亭,鐘小燕.HPLC法測(cè)定鹽酸左旋咪唑片的含量及溶出度[J].中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué),2010,10(5):21-22.

[4] 左文霞,李洽,任偉,等.復(fù)方甲苯咪唑粉中鹽酸左旋咪唑含量的測(cè)定飼料研究[J].飼料研究,2011,(8):41-42.

[5] 郭江紅,趙亞萍,吳蔚.HPLC法測(cè)定鹽酸左旋咪唑中有關(guān)物質(zhì)[J].中國(guó)藥師,2012,(4):512-514.

[6] 中國(guó)藥典附錄ⅩⅨ A.藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法指導(dǎo)原則[S].

R927.2

B

1671-8194（2014）19-0107-02

*通訊作者