滋腎降糖顆粒的質(zhì)量控制研究

胡雪峰 劉紀(jì)青

（深圳市中醫(yī)院，廣東 深圳 518033）

滋腎降糖顆粒的質(zhì)量控制研究

胡雪峰 劉紀(jì)青

（深圳市中醫(yī)院，廣東 深圳 518033）

目的 建立滋腎降糖顆粒質(zhì)量控制方法。方法 采用薄層色譜法鑒別樣品中枳殼、淫羊藿，采用高效液相色譜法測(cè)定樣品中黃芪甲苷的含量，建立質(zhì)量控制方法。結(jié)果 枳殼、淫羊藿薄層鑒別斑點(diǎn)清晰，專屬性好，黃芪甲苷在16.304～407.6 μg/mL之間呈良好的線性關(guān)系（r=0.9995，n=5），平均回收率為99.4%，RSD%為1.95%（n=9）。結(jié)論 所建立的方法操作簡(jiǎn)單、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為控制滋腎降糖顆粒質(zhì)量的方法。

滋腎降糖顆粒；黃芪甲苷；質(zhì)量控制

滋腎降糖顆粒是深圳市中醫(yī)院的院內(nèi)制劑，主要由黃芪[1]、三七[2]、淫羊藿、枳殼、黨參、丹參、熟地黃、五味子、牛膝[3]、骨碎補(bǔ)、龜甲、鱉甲等十四味中藥組成，具有益氣養(yǎng)陰，滋腎壯骨的功效。臨床上主要用來治療糖尿病及其并發(fā)癥、骨質(zhì)疏松等。我們對(duì)滋腎降糖顆粒制備工藝進(jìn)行研究，并建立質(zhì)量控制方法。

1　儀器與試藥

1.1儀器

LC-20AT高效液相色譜儀、ELSD-LT Ⅱ蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（島津公司）；Sartorius BP 211D型電子天平（十萬分之一，德國Sartorius公司）；密理博MQ超純水機(jī)（Millipore公司）；CQ-250-DST型超聲波清洗儀（25/40KHZ，上海生析超聲儀器有限公司）。

1.2試藥

黃芪等藥材，經(jīng)深圳市中醫(yī)院藥檢室檢驗(yàn)，均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。乙腈為色譜純（德國Merck公司）；黃芪甲苷對(duì)照品（110781-200613），柚皮苷（110722-201111）；淫羊藿苷（110737-200415）均來自中國藥品生物制品檢定所。滋腎降糖顆粒樣品及陰性樣品自制。

2　制備工藝

黃芪等十四味加10倍量水提取1.5 h，濾出藥液，藥渣加6倍量水提取1 h，濾出藥液，合并藥液，濃縮成稠膏（相對(duì)密度為1.25～1.30，80 ℃熱測(cè)），取稠膏1份、糊精1份、淀粉1份、阿斯巴甜0.1份，混勻，制成顆粒，95～100 ℃烘干，整粒，即得。

3　薄層鑒別

3.1枳殼[4]：取本品粉末10g，加甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液。按本品制備方法制備缺枳殼陰性對(duì)照品，同法制成缺枳殼陰性對(duì)照溶液。另取柚皮苷對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，吸取上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（9∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇試液，在105 ℃加熱1 min，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。見圖1。

3.2淫羊藿：取本品粉末20 g，加乙醇50 mL，溫浸30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液；按本品制備方法制備缺淫羊藿陰性對(duì)照品，同法制成缺淫羊藿陰性對(duì)照溶液。另取淫羊藿苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10∶1∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，在105 ℃加熱2 min，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。見圖2。

4　含量測(cè)定

4.1色譜條件及系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

GL Inertsil ODS-SP色譜柱（5 μm，150 mm×4.6 mm）；乙腈-水（32∶68）為流動(dòng)相，流速1 mL/min；柱溫30 ℃；氮?dú)鈮毫?65 kPa，蒸發(fā)溫度42 ℃，進(jìn)樣體積10 μL。理論塔板以黃芪甲苷峰計(jì)算不低于5000。見圖3。

4.2對(duì)照品溶液的制備

取黃芪甲苷對(duì)照品約20 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶，加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密取對(duì)照品儲(chǔ)備液，制成407.6、203.8、81.52、40.76、16.304 μg/mL的系列對(duì)照品溶液。

圖1　枳殼（1,缺枳殼陰性樣品；2,3,4-供試品；5-柚皮苷對(duì)照品）

圖2　淫羊藿（1,缺淫羊藿陰性樣品；2,3,4-供試品；5-淫羊藿苷對(duì)照品）

圖3　HPLC圖（A為黃芪甲苷對(duì)照品，B為供試品，C為缺黃芪陰性樣品）

4.3供試品溶液的制備

取本品10 g，加水20 mL溶解，加水飽和的正丁醇溶液振搖提取4次，每次30 mL，合并正丁醇層，水浴濃縮至干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，通過D-101型大孔吸附樹脂柱（12 cm×1.5 cm），加水50 mL洗脫，棄去水液，再以40%乙醇30 mL洗脫，棄去洗脫液，繼以70%乙醇80 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，溶液過0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液即為供試品溶液。

4.4線性范圍考察

取黃芪甲苷系列對(duì)照品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定黃芪甲苷峰面積，以對(duì)照品濃度的自然對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，以峰面積的自然對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y=1.012X+4.405，r=0.9995，表明黃芪甲苷在16.304～407.6 μg/mL呈良好線性關(guān)系。

4.5精密度試驗(yàn)：取黃芪甲苷對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，依法測(cè)定，RSD為0.80%。

4.6穩(wěn)定性試驗(yàn)：取本品按“4.3方法”制備樣品溶液，分別在第0、2、4、8、12 h依法進(jìn)樣，測(cè)定黃芪甲苷含量，RSD為1.08%。

4.7重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批次顆粒，精密稱定5份，分別制成供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定黃芪甲苷含量。結(jié)果黃芪甲苷平均含量216.3 μg/g，RSD為1.26%。

4.8加樣回收率試驗(yàn)：精密稱取已知含量的供試品5 g（216.3 μg/g），共9份，分別加407.6 μg/mL的對(duì)照品溶液2、2.5、3 mL各3份，按“4.3”制備樣品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算黃芪甲苷含量，平均回收率99.4%，RSD為1.95%，見表1。

表1　黃芪甲苷加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.9含量測(cè)定

取3批滋腎降糖顆粒，按照供試品溶液制備方法制備樣品溶液，按以上色譜條件測(cè)定黃芪甲苷峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

表2　樣品中黃芪甲苷含量測(cè)定

5　結(jié) 論

本方臨床上主要用來治療糖尿病及其并發(fā)癥、骨質(zhì)疏松等。黃芪是本方君藥，具有益氣健脾，調(diào)節(jié)免疫的功能，黃芪甲苷無紫外吸收，HPLC-ELSD法具有靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，故采用HPLC-ELSD測(cè)定滋腎降糖顆粒中黃芪甲苷含量。

本研究采用TLC鑒別枳殼、淫羊藿，結(jié)果斑點(diǎn)清晰、分離度好；HPLC-ELSD測(cè)定黃芪甲苷含量，結(jié)果準(zhǔn)確，方法可行，為滋腎降糖顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供了資料。

[1] 楊范莉,宋立強(qiáng). HPLC法同時(shí)測(cè)定黃芪中4種成分的含量[J].西北藥學(xué)雜志,2012,27(6):526-527.

[2] 張?？?陸再華,楊妍華.三七總皂苷對(duì)細(xì)胞免疫炎性因子作用的研究進(jìn)展[J].中國藥師,2011,14(9):1349-1350.

[3] 譚玉柱,陳寶華,李敏.川牛膝不同變種的品質(zhì)評(píng)價(jià)[J].中成藥, 2012,34(9):1770-1773.

[4] 中國藥典委員會(huì).中國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:306-322.

Study on the Preparation Technology and Quality Control for Zishenjiangtang Granule

HU Xue-feng, LIU Ji-qing
(Shenzhen Traditional Chinese Medicine Hospital, Shenzhen 518033, China)

Objective To establish the method for determining zishenjiangtang granules. Method Using thin layer chromatography sample identification Aster, Herba epimedii, using HPLC Astragaloside, establish quality control methods. Result Aster ,Herba epimedii TLC spots were clear, specific, one method for the determination Astragaloside was good. Good linear relationship was achieved between astragaloside peak area when the concentration range of which was 16.304～407.6 μg/mL(r=0.9995,n=5),the average recovery rate was 99.4%(RSD=1.95%, n=9). Conclusion The method is feasible, reliable, accurate and specific. It can be used for quality control of Zishenjiangtang Granule effectively.

Zishenjiangtang Granule; Astragaloside; Quality control

R977.15

B

1671-8194（2014）19-0105-02