健脾益肺口服液對(duì)慢阻肺“肺脾氣虛證”大鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響

何 嘉，郭建輝，梁 棟，史肅育

（南京市中醫(yī)院呼吸科，江蘇 南京 210001）

健脾益肺口服液對(duì)慢阻肺“肺脾氣虛證”大鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響

何 嘉，郭建輝，梁 棟，史肅育

（南京市中醫(yī)院呼吸科，江蘇 南京 210001）

目的 觀察健脾益肺口服液對(duì)慢阻肺“肺脾氣虛證”大鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)的影響。方法將65只SD成年雄性大鼠隨機(jī)分為6組，分別為空白組，健脾益肺口服液高、中、低劑量組，模型組，地塞米松組。用香煙熏吸和脂多糖（LPS）復(fù)制慢阻肺“肺氣虛”模型；接著用大黃液灌胃，復(fù)制“脾氣虛證”；造模共為28 d，在造模開始14 d開始給藥，28 d麻醉后取血處死后剝離大鼠脾臟及胸腺，計(jì)算脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)。結(jié)果(1)模型組大鼠體重、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)低于空白組(P＜0.05或P＜0.01)；(2)健脾益肺口服液各治療組大鼠體重、脾指數(shù)、胸腺指數(shù)顯著增加，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中高劑量組與模型組比較，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；(3)高、中、低劑量三組組間大鼠體重、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論健脾益肺口服液可提升慢阻肺大鼠體重，而脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)相應(yīng)提高，從而使機(jī)體免疫力得到提高，機(jī)體防病抗病力得到加強(qiáng)。

健脾益肺口服液；慢性阻塞性肺疾?。环纹馓撟C；脾臟指數(shù)；胸腺指數(shù)

慢性阻塞性肺病(Chronic obstructive pulmonary diseases，COPD)簡稱為“慢阻肺”，因其病程長，反復(fù)發(fā)作，長期慢性消耗，多伴有機(jī)體免疫功能的紊亂。同時(shí)，慢阻肺患者反復(fù)急性發(fā)作常常需要使用抗菌素、激素等，而使機(jī)體免疫力進(jìn)一步下降，久之形成惡性循環(huán)。為此，國內(nèi)外諸多學(xué)者對(duì)慢阻肺患者機(jī)體免疫功能狀態(tài)進(jìn)行了研究，而脾指數(shù)和胸腺指數(shù)的變化直接反映了機(jī)體免疫功能狀態(tài)。本實(shí)驗(yàn)2012年1月至2013年12月觀察慢阻肺大鼠體內(nèi)免疫功能狀態(tài)，并觀察健脾益肺口服液對(duì)其脾指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響，以期為臨床治療慢阻肺提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD成年雄性大鼠65只，購自江寧青龍山動(dòng)物飼養(yǎng)中心，大鼠體重198～260 g，平均231 g，分籠飼養(yǎng)，每天自由進(jìn)水，進(jìn)食顆粒飼料。保持動(dòng)物飼養(yǎng)室一定的照明、噪音、溫度、濕度等，每天清潔飼養(yǎng)房及更換飲用水。飼養(yǎng)2 d后開始造模。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 受試藥物：健脾益肺口服液是南京市中醫(yī)院自制制劑(批準(zhǔn)文號(hào) 蘇藥制字Z04000839，其組成：黨參9 g、茯苓10 g、黃精10 g、白術(shù)9 g、山藥10 g、黃芪15 g、防風(fēng)3 g、扁豆10 g、雞內(nèi)金9 g、陳皮6 g、丹參15 g)；陽性藥：地塞米松(Dexamethasone，DM)(國藥準(zhǔn)字H12020686)，0.75 mg/片；天津天藥藥業(yè)公司；造模藥物：大黃。

1.3 儀器、試劑 (1)主要儀器：手術(shù)剪、鑷子等(南京中醫(yī)藥大學(xué)一臨動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心)；電子天平(上海良平儀器公司)；(2)主要試劑：脂多糖(Sigma公司)：生產(chǎn)批號(hào)為20120115；大前門香煙：上海煙草公司，其焦油含量為23 mg，煙氣煙堿量為1.5 mg。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 “肺脾氣虛證”動(dòng)物模型的復(fù)制 將65只大鼠分為空白組，健脾益肺口服液高、中、低劑量組，陽性藥對(duì)照組，模型組。采用香煙煙熏+脂多糖氣管內(nèi)滴注法[1-2]建立慢阻肺模型(除空白組)：在造模開始的第1天、第14天用10%水合氯醛(按每100 g體重大鼠0.3 mg計(jì)算)進(jìn)行腹腔麻醉，充分暴露大鼠喉頭，用靜脈套管行氣管插管，用1 ml注射器抽取脂多糖0.2 ml，滴入氣管內(nèi)，結(jié)束后馬上直立旋轉(zhuǎn)10～20 s。第2～13天、第15～28天，在自制的有機(jī)玻璃密閉箱(帶通氣孔，直徑為1.2 cm)吸入香煙煙霧1 h/d，熏煙20支/d，造模共28 d。然后在張偉等[3]用“二次方法”復(fù)制慢阻肺“脾氣虛證”模型方法上加以改良：造模開始后第7天以大黃混懸液(1 ml/g)灌胃，2 ml/d，共8 d，復(fù)制慢阻肺“脾氣虛”模型。

1.4.2 給藥方法 健脾益肺口服液組：藥物劑量按成人30 ml/60 kg計(jì)算，常規(guī)劑量組為每日每公斤體重3 ml，故低劑量組1 ml/(kg·d)，高劑量組為9 ml/(kg·d)。實(shí)驗(yàn)中所飼養(yǎng)大鼠體重每只一般不超過300 g，故高劑量組不超過3 ml/只，不足3 ml的均加蒸餾水至3 ml灌胃。造模開始的第15天開始灌藥，每天一次，灌藥14 d結(jié)束。測(cè)指標(biāo)；空白組、模型組：用生理鹽水3 ml灌胃；陽性藥對(duì)照組：用地塞米松灌胃，劑量按成人常規(guī)6.75 mg/d，并按照大鼠體表面積與人體體表面積的換算公式進(jìn)行換算(陳奇版《中藥藥理研究方法學(xué)》)，給藥量=6.75 mg×0.026×5，即每天每只大鼠約0.88 mg，10只為8.8 mg，將藥片溶于30 ml蒸餾水中，每日每只灌服3 ml。

1.4.3 取材及測(cè)定 每只大鼠造模結(jié)束后用精密電子天平稱取其體重，然后以0.3 mg/100 g水合氯醛對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔麻醉，充分麻醉取血后剝離大鼠脾臟和胸腺，稱重并記錄。脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)的計(jì)算：脾臟(或胸腺)指數(shù)(g/100 g)=100×脾臟(或胸腺)重量/體重。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)后，采用One-Way ANOVA和One-Sample Test來分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

單純?cè)炷＝M大鼠體重、脾指數(shù)、胸腺指數(shù)低于空白組，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；健脾益肺口服液各治療組大鼠體重、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)上升明顯，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，尤其是高劑量組與模型組比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；健脾益肺口服液高、中、低劑量治療組組間大鼠體重、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

表1 各組大鼠體重、胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)比較(±s)

表1 各組大鼠體重、胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)比較(±s)

注：a表示與模型組比較，P＜0.05；b表示與模型組比較，P＜0.01；c表示與空白組比較，P＜0.05，；d表示與空白組比較，P＜0.01。

組別空白組(n=10)低劑量組(n=11)中劑量組(n=11)高劑量組(n=11)陽性藥組(n=11)模型組(n=11)體重(g) 272.60±58.88 267.18±41.60a267.55±51.90a229.36±34.35b224.82±14.37 229.45±24.80c脾臟指數(shù)(g/100 g) 2.102±0.713 1.995±0.749a2.001±0.457a2.294±0.919b1.237±0.502 1.367±0.714c胸腺指數(shù)(g/100 g) 1.657±0.636 1.419±0.799a1.376±0.353a1.383±0.604b0.602±0.192 0.600±0.202d

3 討 論

脾臟和胸腺是人體非常重要的免疫器官，機(jī)體的免疫功能直接與脾臟和胸腺的結(jié)構(gòu)功能相關(guān)。脾臟是最大的外周免疫器官，是B淋巴細(xì)胞成熟發(fā)育的場(chǎng)所，在抗原刺激下產(chǎn)生免疫應(yīng)答。胸腺是機(jī)體的中樞免疫器官，胸腺在人出生時(shí)就已完全發(fā)育，隨年齡的增長逐漸增大，青春期達(dá)到最大，以后胸腺就開始逐漸萎縮變小。胸腺是T淋巴細(xì)胞成熟發(fā)育的場(chǎng)所。故如果脾臟、胸腺的功能下降或結(jié)構(gòu)衰退就會(huì)影響免疫功能，導(dǎo)致免疫功能紊亂，出現(xiàn)免疫功能亢進(jìn)或下降，導(dǎo)致疾病發(fā)生或發(fā)展。人體的脾指數(shù)和胸腺指數(shù)直接與體質(zhì)量成正比，是反映脾臟、胸腺免疫功能的重要指標(biāo)[4]。脾指數(shù)和胸腺指數(shù)的變化直接反映了機(jī)體免疫功能狀態(tài)。

慢阻肺患者有不同程度的免疫功能紊亂，而其免疫功能紊亂與肺、脾兩臟密切相關(guān)?！罢龤獯鎯?nèi)、邪不可干”，慢阻肺的發(fā)生，而且由于病程長，存在不同程度的“虛”，慢阻肺的“虛”首先是肺虛，漸而脾虛、腎虛，免疫功能逐漸低下，因此肺虛、脾虛尚處于早期階段，若此時(shí)進(jìn)行干預(yù)，就能提高其免疫功能，阻止慢阻肺進(jìn)展。中醫(yī)學(xué)的“脾”蘊(yùn)涵著豐富的免疫學(xué)內(nèi)容。有研究[5]發(fā)現(xiàn)，中醫(yī)“脾”的概念與免疫功能密切相關(guān)?！捌⑻撟C”與免疫器官、免疫細(xì)胞、免疫功能及免疫遺傳學(xué)等的異常呈顯著相關(guān)[6]，因此健脾就能提高免疫器官如脾臟的免疫功能。本實(shí)驗(yàn)中大鼠在煙霧與內(nèi)毒素脂多糖作用下，大鼠的氣道和肺實(shí)質(zhì)出現(xiàn)慢性炎性病變，氣道狹窄、氣流阻力增加，肺功能下降，慢阻肺發(fā)生，同時(shí)出現(xiàn)如神倦、體弱、咳嗽、氣短、納少、便溏等肺脾兩虛證的表現(xiàn)。本研究發(fā)現(xiàn)慢阻肺“肺脾氣虛證”模型組大鼠的體重、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)顯著低于空白組(P＜0.05或P＜0.01)，由此得出結(jié)論：在慢阻肺緩解期，機(jī)體體重、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)是低下的。

健脾益肺口服液臨床使用多年，方中諸藥如黨參、白術(shù)、茯苓、山藥等有補(bǔ)益肺脾之氣之功，全方通過補(bǔ)益肺脾，達(dá)到提高機(jī)體免疫力的目的。前期我們用健脾益肺口服液治療36例慢阻肺緩解期患者，療效顯著，顯示其有消除機(jī)體痰濁、健中洲以溉四旁及調(diào)節(jié)機(jī)體免疫的功能[7]。本研究觀察健脾益肺口服液對(duì)慢阻肺“肺脾氣虛證”大鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響，發(fā)現(xiàn)健脾益肺口服液能顯著改善大鼠咳嗽、氣喘等及肺氣虛、脾氣虛癥狀，且其各治療組大鼠體重、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)上升明顯，與模型組比較，P＜0.05，說明健脾益肺口服液能明顯提高大鼠體重、脾指數(shù)、胸腺指數(shù)。同時(shí)顯示健脾益肺口服液隨著劑量的增加，療效有所增加，但高、中、低劑量組三組組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，說明健脾益肺口服液藥物劑量與改善脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)無顯著相關(guān)性。

本研究顯示健脾益肺口服液能增加脾臟、胸腺重量，提高大鼠體重，可提升大鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，而脾指數(shù)和胸腺指數(shù)是反映機(jī)體免疫功能的重要指標(biāo)，說明健脾益肺口服液有提高COPD免疫功能的作用，證實(shí)本方不盡能顯著減輕COPD肺氣虛、脾氣虛及咳嗽、氣喘等的癥狀，而且還能有效地控制該病因呼吸道感染等而導(dǎo)致的復(fù)發(fā)和加重，同時(shí)還能有效的提高機(jī)體免疫功能、控制COPD疾病進(jìn)展，體現(xiàn)了表里同治、扶正驅(qū)邪的原則，達(dá)到了“正氣存內(nèi)，邪不可干”的目的。

[1]Cai C,Zhang H,Le JJ.et al.Inflammatory airway features and hypothalamic-pituitary-adrenal axis function in asthmatic rats combined with chronic obstructive pulmonary disease[J].Chin Med J,2010, 123(13):1720-1726.

[2]顧延會(huì),歐陽瑤.煙熏聯(lián)合脂多糖制備大鼠慢性阻塞性肺疾病動(dòng)物模型[J].重慶醫(yī)學(xué),2012,41(13):1295-1296.

[3]張 偉,宮 靜,張靖軒,等.一種肺脾兩虛證慢阻肺動(dòng)物模型的建立[J].遼寧中醫(yī)雜志,2009,36(1):142-143.

[4]劉 茜,劉向國,武 松.肺氣腫肺氣虛證模型大鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)變化的實(shí)驗(yàn)研究[J].甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2006,23(1): 20-22.

[5]曾慶祥,衷誠偉.異功散及其加味方對(duì)小兒脾虛證患者臨床療效及免疫功能的影響[J].中醫(yī)雜志,2003,44(3):197-198.

[6]修宗昌,余紹源,黃穗平.脾虛免疫學(xué)機(jī)制[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2003,10(4):10-13.

[7]郭建輝.健脾益肺口服液治療明顯阻塞性肺病18例總結(jié)[J].湖南中醫(yī)雜志,2010,66(6):4-6.

Influence of spleen-strengthening and lung-tonifying liquid on spleen index and thymus index of COPD inrats with Lung and spleen qi deficiency syndrome.

HE Jia,GUO Jian-hui,LIANG Dong,SHI Su-yu.Department of Respiratory Medicine,Nanjing Hospital of Traditional Chinese Medicine,Nanjing 210001,Jiangsu,CHINA.

Objective To observe the effect of spleen-strengthening and lung-tonifying liquid on thymus index and spleen index of COPD in rats with lung-spleen qi deficiency syndrome.MethodsSixty-five adult SD male rats were randomly divided into six groups,normal control group,3 spleen-strengthening and lung-tonifying liquid groups with small,middle or large dosage separately,model group and dexamethasone control group.Rats was treated with smoke and LPS,and followed by rhubarb liquid through gavaging,to generate model of lung-qi deficiency.Model-making lasted for 28 days.Rats were given medicine on day 14 of model-making.28 days later,blood was taken after anesthesia,and then the spleen index and thymus index was calculated after the spleen and thymus were peeled from rats.Results(1)The weight,spleen index and thymus index of model group were significantly lower than those of normal control group(P＜0.05 or P＜0.01).(2)The weight,thymus index and spleen index in all spleen-strengthening and lung-tonifying liquid groups increased，especially the large dose group,which were higher than those in the normal control group(P＜0.05 or P＜0.01).(3)There were no striking changes in thymus index and spleen index in large dose,middle dose and small dose treatment groups(P＞0.05).ConclusionSpleen-strengthening and lung-tonifying liquid can increase body weight,spleen index and thymus index of the rats with COPD,and then improve body immunity and disease resistance.

Spleen-strengthening and lung-supplementing liquids;Chronic obstructive pulmonary disease (COPD);Lung-spleen qi deficiency syndrome;Spleen index;Thymus index

R-332

A

1003—6350（2014）10—1412—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.10.0546

2013-11-06)

南京市衛(wèi)生局課題（編號(hào)：YKK11042）

郭建輝。E-mail:781835470@qq.com