中國漢族人群Ghrelin基因Leu72Met多態(tài)性與2型糖尿病相關性Meta分析

崔兆輝，宋瑞娟，胡長軍，陸衛(wèi)平

（南京醫(yī)科大學附屬淮安第一醫(yī)院內分泌科1、醫(yī)保處2，江蘇 淮安 223300）

·循證醫(yī)學·

中國漢族人群Ghrelin基因Leu72Met多態(tài)性與2型糖尿病相關性Meta分析

崔兆輝1，宋瑞娟2，胡長軍1，陸衛(wèi)平1

（南京醫(yī)科大學附屬淮安第一醫(yī)院內分泌科1、醫(yī)保處2，江蘇 淮安 223300）

目的探討ghrelin基因Leu72Met(C408A)位點多態(tài)性與中國漢族2型糖尿?。═2DM）人群發(fā)病的關系。方法檢索中國生物醫(yī)學文獻數據庫、萬方醫(yī)學網，檢索時間范圍包括2013年5月之前的所有文獻，分別檢索到研究ghrelin基因Leu72Met位點多態(tài)性與中國漢族T2DM相關文獻15篇。按納入、排除標準選取病例，采用RevMan4.2.10分析其相關性。結果納入研究文獻5篇（涉及l(fā) 132例2型糖尿病患者和961名對照組)。Meta分析結果表明，中國漢族人群2型糖尿病與Leu72Met位點多態(tài)性相關：AA基因型與CA基因型和CC基因型合并后比較，固定效應模型OR=2.55，95%CI：1.07～6.11，P=0.03；AA基因型與CC基因型比較，固定效應模型OR=2.63，95%CI：1.09～6.30，P=0.03；等位基因A與C比較，固定效應模型OR=1.30，95%CI：1.06～1.60，P=0.01。結論Ghrelin基因Leu72Met位點多態(tài)性與中國漢族人群2型糖尿病的發(fā)生發(fā)展可能有關。

2型糖尿??；Ghrelin基因；Leu72Met；基因多態(tài)性；Meta分析

Ghrelin是生長激素促分泌素受體的內源性配體，由日本學者Kojima在胃的內分泌細胞中發(fā)現(xiàn)，具有促進生長激素分泌、增加食欲、促進脂肪合成、調節(jié)能量代謝及糖代謝等作用[1-2]。Korbonits等[3]發(fā)現(xiàn)ghrelin基因存在10個多核苷酸多態(tài)性，其中Leu72Met較為常見，其多態(tài)性與2型糖尿病(Type 2 diabetes，T2DM)及脂代謝有一定關系，但研究結果在不同地域、不同種族之間有所差異。本研究就中國漢族2型糖尿患者群ghrelin基因Leu72Met多態(tài)性與對照組(Control)進行Meta分析，旨在為中國漢族人群T2DM與Leu72 Met基因多態(tài)性的關系提供循證依據。

1 資料與方法

1.1 資料來源以2型糖尿病、ghrelin、Leu72Met基因多態(tài)性為檢索詞，聯(lián)合檢索2013年5月以前的中國生物醫(yī)學文獻數據庫和萬方醫(yī)學網并獲得全文。

1.2 方法

1.2.1 文獻納入標準國內外公開發(fā)表的中國漢族人群ghrelin基因Leu72Met多型態(tài)相關性的研究文獻；研究設計是病例對照研究，病例組為2型糖尿病，對照組為健康人群；可獲得等位基因頻率和(或)基因型頻率。

1.2.2 文獻排除標準對糖尿病合并其他疾病、原始文獻中無對照組、重復報告文獻、數據不完整及針對國內少數民族研究的文獻進行剔除。

1.2.3 質量控制根據STREGA[4]原則對納入的每個病例對照研究進行質量評價：(1)樣本量是否充分；(2)診斷標準是否清楚；(3)分組匹配情況；(4)對照組基因型分布是否符合Hardy-Weinberg(H-W)遺傳平衡定律；(5)基因檢測方法是否合理；(6)數據是否充分。以上6項，每滿足一項記為1分，總分≥3分者，表示質量可靠。由2名研究者分別獨立完成數據的提取，不一致部分，討論并征求第三方建議。每篇文獻摘錄的主要信息包括：(1)第一作者姓名；(2)地域；(3)發(fā)表年份；(4)病例組和對照組的病例數及基因型分布頻率。

1.3 統(tǒng)計學分析(1)對所選擇的研究基因型分布進行H-W遺傳平衡檢驗，對照組不符合H-W遺傳平衡定律的文獻在敏感性分析中予以剔除后再進行分析；(2)用Meta分析軟件Revman4.2.10進行統(tǒng)計學分析；(3)采用漏斗圖分析納入的文獻是否存在偏倚；(4)計算各研究等位基因頻率、OR值及其95%CI；(5)統(tǒng)計學異質性采用q檢驗，并給出I2值，若各研究間無顯著異質性，則采用固定效應模型進行數據合并，若各研究間存在顯著異質性，則采用隨機效應模型法進行數據合并，并繪制森林圖。

2 結果

2.1 入選文獻基本情況通過數據庫檢索共獲取文獻共15篇，其中針對少數民族人群研究文獻2篇[5-6]，未確切標注為針對漢族人群研究文獻1篇[7]，根據納入及排除標準，將上述文獻予以剔除，最終納入5篇(圖1)，包含公開發(fā)表論文4篇[8-12]，經遺傳平衡檢驗有1篇文獻[8]研究對照組不符合H-W分布。研究對象均為漢族人群，納入研究中累積2型糖尿病病例1 132例，對照組961例，見表1。

圖1 文獻篩選流程

2.2 Meta分析結果

2.2.1 野生型純合子CC為參照的結果變異型純合子AA基因型與2型糖尿病易感性的關系。經過一致性檢驗(χ2=2.00，P=0.74)，結果顯示各文獻間同質，故采用固定效應模型進行統(tǒng)計分析，合并分析結果提示變異純合子基因型AA與2型糖尿病的易感性有關(OR=2.63，95%CI：1.09～6.30，P=0.03)，見表2。

2.2.2 隱性模型下結果假設突變基因為隱性基因，采用隱性模式來評估變異型純合子(AA)與2型糖尿病易感性之間的關系。經過一致性檢驗(χ2= 2.03，P=0.73)，結果顯示各文獻間同質，故采用固定效應模型。分析結果提示，在隱性模式下，變異基因型(AA)與2型糖尿病的易感性有關(OR=2.55，95%CI：1.07～6.11，P=0.03)，見表2。

表1 納入的Ghrelin基因Leu72Met多態(tài)性與2型糖尿病關聯(lián)研究的基本情況(例)

表2 Ghrelin基因Leu72Met等位基因及基因型的Meta分析結果

2.2.3 顯性模式結果假設突變基因為顯性基因，采用顯性模式來評估變異純合子(AA)和變異雜合子(CA)與2型糖尿病易感性之間的關系。經過一致性檢驗(χ2=0.34，P=0.99)，結果顯示各文獻間同質，采用固定效應模型進行分析。分析結果提示，在顯性模式下，變異基因型(AA+CA)與2型糖尿病的易感性無關(OR=1.25，95%CI：0.99～1.57，P=0.06)，見圖2。

2.3 A等位基因與2型糖尿病的關系異質性檢驗結果提示各研究結果間無統(tǒng)計學異質性(χ2= 0.48，P=0.97)，故采用固定效應模型進行Meta分析。結果顯示，具有A等位基因與2型糖尿病的易感性有關(OR=1.30，95%CI：1.06～1.60，P=0.01)，見圖3。

2.4 發(fā)表偏倚及敏感性分析用Revman4.2.10統(tǒng)計軟件繪制漏斗圖(圖4)，圖中各研究圍繞中心線對稱排列，表示不存在發(fā)表性偏倚，將對照組不符合H-W遺傳平衡定律的文獻[8]剔除再進行Meta分析，結果與剔除前基本一致(表2)，說明本次Meta分析結果穩(wěn)定性較好，較可靠。

圖2 顯性模式下Ghrelin基因Leu72Met多型態(tài)與2型糖尿病關系的森林圖（CA+AA vs.CC）

圖3 Ghrelin基因Leu72Met多型態(tài)等位基因與2型糖尿病關系的森林圖（A vs.C）

圖4 評估發(fā)布偏倚的漏斗圖

3 討論

Ghrelin是1999年發(fā)現(xiàn)胃腸道分泌的28個氨基酸多肽，其作用除促進生長激素(GH)分泌外，還與調節(jié)能量代謝及糖代謝的作用等密切相關[1]。ghrelin與其受體結合后可產生增強食欲、刺激攝食、維持能量平衡等作用，故認為是調節(jié)能量代謝紊亂的生物學靶點之一[13]。人ghrelin基因位于染色體3p26～p25，含4個外顯子[14]。Leu72Met位于第2個外顯子中，72位亮氨酸由甲硫氨酸替代。此突變改變了ghrelin原mRNA的結構，可能通過影響蛋白質加工修飾來改變ghrelin的分泌和活性[15]。

研究發(fā)現(xiàn)ghrelin基因多態(tài)性與糖尿病[16]、肥胖[17]、高血壓[18]等疾病有一定聯(lián)系，其Leu72Met(C408A)是常見的ghrelin基因單核苷酸多態(tài)SNP位點，這種突變位于成熟的ghrelin編碼區(qū)域以外，導致前ghrelin分子末端的1個氨基酸發(fā)生改變[3]，其基因型分布在不同的地區(qū)和種族之間有差異。白人、黃種人和黑人之間差異較大[17，19-20]。就Leu72Met基因型來說，黑人野生型發(fā)生的頻率最高，白人次之。國外有報道，Leu72Met(A)攜帶者與2型糖尿病的風險相關[16]。同樣，國內文獻報道2型糖尿病AA基因型高于對照組,提示A等位基因可能與2型糖尿病有聯(lián)系[9]，另有文獻報道，Leu72Met多態(tài)性與2型糖尿病無關，則與血肌酐[19]、Lp(a)[21]、LDL-C[8]有關。

本研究ghrelin基因Leu72Met多態(tài)性Meta分析(A/C)結果顯示，人ghrelin基因第2個外顯子中408位有C>A突變的糖尿病發(fā)病的危險性是其無突變的1.3倍，考慮408位點的A等位基因可能與糖尿病易感性有一定的聯(lián)系。本文結果也發(fā)現(xiàn)，AA與CC、CA+CC基因型進行比較二者之間存在相關性，在森林圖中其95%CI橫線并不與無效豎線相交，且該橫線落在無效線之右側，故認為病例組的發(fā)病率大于對照組的發(fā)病率。糖尿病的發(fā)生與發(fā)展是一種多基因、多環(huán)境、多因素和多系統(tǒng)等相互協(xié)同、復雜的過程，有文獻報道，ghrelin基因多態(tài)性可能與LDL-C[8]、肥胖[17]、高血壓[18]、Lp(a)[21]等危險因素有關。因此，我們認為Leu72Met基因多態(tài)性可能參與了糖尿病的發(fā)病機制。

我們對納入文獻進行了H-W遺傳平衡檢驗，除其中1篇文獻[8]外，其余研究均符合H-W遺傳平衡定律，而剔除該研究文獻后，本文Meta分析結果并無明顯的改變。我們采用了漏斗圖來評估發(fā)表偏倚，提示本文并無顯著的發(fā)表偏倚，說明本文Meta分析結果較可靠。

由于Meta分析是在總結既往已發(fā)表文獻的基礎上進行的統(tǒng)計分析，因此無法獲取如性別、年齡、生活方式、遺傳因素、相關生化指標等更加詳盡的資料，因而上述潛在混雜因素的存在可能對本次分析的OR值產生一定程度的影響，由于本研究中的AA基因型頻率較低，納入的研究人數有限，使計算得到的合并OR值和95%CI較寬。

綜上所述，本研究對中國漢族人群ghrelin基因Leu72Met多態(tài)性與糖尿病相關研究進行Meta分析。鑒于本研究的不足，本文結論尚需進行多中心、大樣本病例對照試驗的驗證，我們將繼續(xù)關注相關研究的進展，以期進一步明確Leu72Met基因多態(tài)性與糖尿病發(fā)病之間的相關性。

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Relationship between ghrelin Leu72Met polymorphism and type 2 diabetes mellitus among the Chinese Han population:a meta-analysis.

CUI Zhao-hui1,SONG Rui-juan2,HU Chang-jun1,LU Wei-ping1.Department of Endocrinology1,Health Insurance Office2,Huai'an First People's Hospital Affiliated to Nanjing Medical University, Huai'an 223300,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo evaluate the relationship between ghrelin Leu72Met polymorphism and type 2 diabetes mellitus(T2DM)among the Chinese Han population.MethodsWe conducted a computer retrieval of SINOMED,Wanfang databases prior to May 2013.Articles investigating the relationship of T2DM and ghrelin Leu72Met polymorphism of Han group were found through literature.According to the including and excluding criteria,a meta-anatysis was performed in T2DM and ghrelin Leu72Met polymorphism,including 15 articles on Leu72Met polymorphism and T2DM.The association was examined by RevMan4.2.10 software.ResultsFive articles on Leu72Met polymorphism were include(involving l 132 cases of T2DM and 961 controls).Meta-analysis showed that there was a significant association between Leu72Met polymorphism and T2DM:AA/(CA+CC)(fixed-effect model, OR=2.55,95%CI:1.07～6.11,P=0.03).AA/CC(fixed-effect model,OR=2.63,95%CI:1.09～6.30,P=0.03).A/C allele comparison(fixed-effect model,OR=1.30,95%CI:1.06～1.60,P=0.01).ConclusionGhrelin Leu72Met polymorphism may be related with development of type 2 diabetes mellitus in the Chinese Han population.

Type 2 diabetes mellitus(T2DM);Ghrelin genotype;Leu72Met;Gene polymorphism;Meta-analysis

R587.1

A

1003—6350（2014）07—1053—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.07.0410

2013-10-14)

南京醫(yī)科大學科技發(fā)展基金(編號：2012NJMU146)

。崔兆輝。E-mail：cuizhaohui7626@163.com