不同產(chǎn)地金櫻根藥材根和莖抗炎鎮(zhèn)痛活性研究

趙郭林，張 澤，王 聰，江振洲,2，壽曉云，王 濤,2，鄒節(jié)明*

(1.中國(guó)藥科大學(xué) 江蘇省新藥篩選中心；2.中國(guó)藥科大學(xué) 江蘇省藥效學(xué)研究與評(píng)價(jià)服務(wù)中心，江蘇 南京210009；3.桂林三金藥業(yè)股份有限公司，廣西 桂林541004)

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不同產(chǎn)地金櫻根藥材根和莖抗炎鎮(zhèn)痛活性研究

趙郭林1，張 澤1，王 聰1，江振洲1,2，壽曉云3，王 濤1,2，鄒節(jié)明3*

(1.中國(guó)藥科大學(xué) 江蘇省新藥篩選中心；2.中國(guó)藥科大學(xué) 江蘇省藥效學(xué)研究與評(píng)價(jià)服務(wù)中心，江蘇 南京210009；3.桂林三金藥業(yè)股份有限公司，廣西 桂林541004)

目的：選取廣西、云南、貴州三種產(chǎn)地的金櫻根藥材，對(duì)其根和莖樣品的抗炎鎮(zhèn)痛活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法：采用鼠耳腫脹法、大鼠足跖腫脹法對(duì)金櫻根藥材根和莖樣品的抗炎活性進(jìn)行比較，采用小鼠醋酸扭體法對(duì)其鎮(zhèn)痛活性進(jìn)行比較。結(jié)果：金櫻根藥材均可抑制鼠耳廓腫脹和小鼠扭體反應(yīng)；部分金櫻根藥材樣品對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹表現(xiàn)為抑制作用。結(jié)論：金櫻根藥材樣品具有一定的抗炎作用并且具有不同程度的鎮(zhèn)痛作用。

金櫻根藥材；抗炎；鎮(zhèn)痛

金櫻根又名金櫻子根、金櫻蔃、脫骨丹，為薔薇科薔薇屬常綠攀援有刺灌木金櫻子(RosalaevigataMichx.)的根或根皮。2010年版《中國(guó)藥典》附錄收載金櫻根為薔薇科植物金櫻子、小果薔薇和粉團(tuán)薔薇植物的干燥根。臨床上金櫻根藥材常用于治療前列腺炎、婦科疾病、遺精、遺尿、泌尿系統(tǒng)感染以及燒傷燙傷等[1]。在金櫻根藥材市場(chǎng)，時(shí)常將金櫻根藥材的莖混入金櫻根中[2]。而莖與根的混用，對(duì)金櫻根的臨床應(yīng)用是否有不良影響，這方面的研究未見深入報(bào)道。本文對(duì)廣西、云南、貴州三個(gè)不同產(chǎn)地金櫻根藥材的根和莖兩個(gè)藥用部位的抗炎、鎮(zhèn)痛藥效作用進(jìn)行比較，為進(jìn)一步開發(fā)利用此藥材提供一定的藥理學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 試劑

受試藥物：金櫻根藥材3種產(chǎn)地的根和莖樣品共6種，均由廣西桂林三金藥業(yè)有限公司提供，主要信息如表1所示。

受試樣品配制方法：臨用前稱取所需藥量，采用無(wú)菌蒸餾水溶解，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

陽(yáng)性藥物：扎托布洛芬(純度98.7%)，由合肥科大生物技術(shù)有限公司提供，用于抗炎和鎮(zhèn)痛試驗(yàn)。配制方法：臨用前稱取所需藥量，采用0.5% CMC-Na研磨混懸均勻，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

二甲苯(南京化學(xué)試劑一廠)；0.9%氯化鈉注射液(南京小營(yíng)制藥廠)；λ-角叉菜膠(C3889，Lot 122k1444，購(gòu)自Sigma公司)；羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；醋酸(南京化學(xué)試劑有限公司)。

表1 金櫻根藥材信息

1.2 動(dòng)物

ICR小鼠，清潔級(jí)，18～22g，雄性，購(gòu)自南通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；SD大鼠，SPF級(jí)，150～180g，雄性，購(gòu)自浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。小鼠、大鼠均飼養(yǎng)于實(shí)驗(yàn)室常規(guī)條件。

1.3 儀器

BSA124S 精密電子天平(0.1mg～120g)：德國(guó)賽多利斯(sartorius)；KD-160型電子秤：東莞百利達(dá)健康器材有限公司。

1.4 劑量設(shè)置及依據(jù)

金櫻根藥材的臨床最大用量為60g/人/天，人體重按60kg計(jì)，受試藥物高、中、低劑量按體表面積折算，分別約相當(dāng)于人臨床劑量的2.0、1.0、0.5倍。各組劑量設(shè)定見表2。

表2 金櫻根藥材高、中、低劑量設(shè)置

2 方法

2.1 對(duì)二甲苯引起小鼠耳廓腫脹的影響

2.1.1 劑量與分組 200只小鼠隨機(jī)分為20組，每組10只：1為對(duì)照組，2為陽(yáng)性藥，3～5為廣西莖(GX-J)高、中、低劑量組，6～8為廣西根(GX-G)高、中、低劑量組，9～11為貴州莖(GZ-J)高、中、低劑量組，12～14為貴州根(GZ-G)高、中、低劑量組，15～17為云南莖(YN-J)高、中、低劑量組，18～20為云南根(YN-G)高、中、低劑量組。各組劑量參照表2設(shè)定，每組配制不同濃度，給藥體積均為20mL/kg，灌胃給藥，每天1次，給藥5天。

2.1.2 炎癥模型 末次給藥前禁食過(guò)夜，不禁水，末次給藥30min后，在小鼠右耳兩側(cè)涂二甲苯30μL/只為致炎耳，左耳不作任何處理為非致炎耳。2h后將動(dòng)物處死，剪下兩耳，用直徑8mm的打孔器自相同部位分別打出圓形耳片，用電子天平稱重。

2.1.3 檢測(cè)指標(biāo) 以致炎耳片重減去非致炎耳片重的差值作為腫脹度，計(jì)算腫脹率和腫脹度抑制率。腫脹率=腫脹度/正常耳片重×100%，腫脹度抑制率=(對(duì)照組腫脹度-受試組腫脹度)/對(duì)照組腫脹度×100%。比較各組腫脹度和腫脹率的平均值，進(jìn)而得出各組藥抗炎作用的強(qiáng)弱[3]。

2.2 對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的作用

2.2.1 劑量與分組 同“2.1.1”。各組劑量參照表2設(shè)定，每組配制不同濃度，給藥體積均為10mL/kg，灌胃給藥，每天1次，給藥5天。

2.2.2 大鼠足跖腫脹誘發(fā) 末次給藥后即刻進(jìn)行角叉菜膠注射造模。1%角叉菜膠于試驗(yàn)前1天配制，按比例稱取后置于0.9%氯化鈉注射液中溶脹過(guò)夜備用。致炎前將動(dòng)物灌胃給予0.9%氯化鈉注射液1mL/100g，然后將動(dòng)物后肢拉直，于右足跖中部皮下注入1%角叉菜膠0.1mL致炎。

2.2.4 檢測(cè)指標(biāo) 采用排水法測(cè)定大鼠后足體積。角叉菜膠注入后即測(cè)定，作為基礎(chǔ)體積，隨后測(cè)定致炎0.5、1、2和4h大鼠后足體積，觀察腫脹達(dá)峰時(shí)間和消退時(shí)間，求出各時(shí)間點(diǎn)腫脹度及腫脹率，比較給藥組和對(duì)照組的差異情況，算出藥物的腫脹抑制率，進(jìn)行抗炎作用評(píng)價(jià)[3]。

腫脹度(mL)=(測(cè)定體積-基礎(chǔ)體積)

腫脹率(%)= (測(cè)定體積-基礎(chǔ)體積)/基礎(chǔ)體積×100%

2.3 小鼠扭體反應(yīng)

2.3.1 劑量與分組 同“2.1.1”。

2.3.2 試驗(yàn)方法 預(yù)防給藥5天,試驗(yàn)前各組小鼠禁食過(guò)夜，試驗(yàn)當(dāng)天各組灌胃相應(yīng)受試藥物，給藥1h后，腹腔注射0.6%醋酸(0.2mL/只)，記錄注射后10min內(nèi)小鼠出現(xiàn)扭體的次數(shù)。以小鼠出現(xiàn)腰部肌肉反復(fù)收縮、拱背、臀部扭轉(zhuǎn)和后肢伸展為扭體反應(yīng)陽(yáng)性[3]，按下列公式計(jì)算藥物抑制扭體百分率。

抑制率(%)=(對(duì)照組扭體數(shù)—給藥組扭體數(shù))/對(duì)照組扭體數(shù)×100%

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 對(duì)二甲苯引起小鼠耳廓腫脹的影響

與對(duì)照組相比，金櫻根藥材18個(gè)受試組中除GZ-G中、GZ-G低、YN-J低3個(gè)組無(wú)抑制作用外，其余15個(gè)組均有不同程度的抑制作用(圖1)，其中YN-G、GX-G、YN-J的抗炎作用相對(duì)較強(qiáng)。各實(shí)驗(yàn)組按腫脹率由低到高排序如下：YN-G高

圖1 金櫻根藥材樣品對(duì)二甲苯引起小鼠耳廓腫脹的影響 (n=10，±s)與對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01

3.2 對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹作用

如表4所示，與對(duì)照組相比，部分金櫻根藥材樣品對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹表現(xiàn)為抑制作用，其中YN-G、GZ-G和GZ-J三個(gè)樣品抑制作用相對(duì)較強(qiáng)，但劑量相關(guān)性不明顯。

3.3 小鼠扭體反應(yīng)

如圖2所示，與對(duì)照組相比，三個(gè)產(chǎn)地的金櫻根藥材樣品對(duì)小鼠扭體反應(yīng)具有不同程度的抑制作用，組間比較未見明顯差異。各實(shí)驗(yàn)組按扭體數(shù)由低到高排序如下：YN-J高

4 討論

金櫻子始載于《蜀本草》，在《本草綱目》中亦有記載：“金櫻當(dāng)作金罌，謂其子形黃櫻也”。金櫻子主產(chǎn)于華東、華中、華南及陜西、四川、貴州、云南等地[4]。金櫻根性酸、澀、平，歸腎、脾經(jīng)。其根和根皮含有豐富的鞣質(zhì)、多糖、皂苷等成分。目前市場(chǎng)上含有金櫻根藥材的藥品有三金膠囊、三金片、婦科千金片、廣東涼茶顆粒、金雞膠囊等，具有清熱解毒、利濕通淋、益腎的作用，用于下焦?jié)駸崴碌臒崃堋⑿”愣坛?、淋瀝澀痛、尿急頻數(shù)、急慢性腎盂腎炎、膀胱炎、尿路感染見上述證候者。

表4 金櫻根藥材樣品對(duì)角叉菜膠致大鼠足跖腫脹率的影響 (n=10，±s)

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

圖2 金櫻根藥材樣品對(duì)小鼠扭體反應(yīng)的影響 (n=10，±s)與對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01

在2010版藥典附錄、廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)第一冊(cè)(2004)以及廣西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)(1990)中收錄的金櫻根藥用部位為金櫻子的根部，湖南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)(2009年版)收錄的金櫻根藥用部位為金櫻子的干燥根及莖(莖不得超過(guò)40%)[5]。但由于金櫻根用量較大，民間習(xí)用根和老莖入藥。

金櫻根藥材的現(xiàn)代藥理研究文獻(xiàn)較少，已有的研究顯示金櫻根對(duì)急性炎癥和慢性炎癥均有抑制作用，且其根和莖的水提液、醇提液具有不同程度的抗炎作用[6,7]。但關(guān)于不同產(chǎn)地的金櫻根藥材的抗炎作用及鎮(zhèn)痛作用目前尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。

基于金櫻根藥材的主要臨床用途，本文就金櫻根藥材廣西、云南、貴州三個(gè)代表性產(chǎn)地的根和莖兩個(gè)部位的抗炎、鎮(zhèn)痛藥效作用進(jìn)行了比較。通過(guò)二甲苯引起小鼠耳廓腫脹和角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的炎癥試驗(yàn)結(jié)果顯示：三個(gè)產(chǎn)地金櫻根藥材根和莖的樣品均具有一定的抗炎作用，部分樣品抗炎作用的劑量依賴性不明顯。在二甲苯引起小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)中，YN-G高、GX-G低、YN-G低、GX-G中、GX-G高、GZ-J中、YN-J中、YN-G中與對(duì)照組比較有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05，P<0.01)；在角叉菜膠致大鼠足跖腫脹實(shí)驗(yàn)中，YN-G、GZ-G和GZ-J三個(gè)樣品抑制作用相對(duì)較強(qiáng)。鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，三個(gè)產(chǎn)地金櫻根藥材根及莖樣品對(duì)小鼠扭體反應(yīng)具有不同程度的明顯抑制作用，其中YN-J高、GZ-J中、GX-G中、YN-G中、GZ-G高、GX-J中、GX-J高、YN-J中、YN-G高、YN-J低各樣品組與對(duì)照組相比具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05，P<0.01)，各樣品組間比較均未見明顯差異。

根據(jù)以上結(jié)果，推測(cè)金櫻根的根和莖在抗炎和鎮(zhèn)痛作用方面差異不明顯，來(lái)自不同產(chǎn)地的產(chǎn)品也沒有明顯的差異，為解決金櫻根僅根部入藥而導(dǎo)致資源短缺的問題提供了一定的參考，為金櫻根的莖部位入藥提供了理論依據(jù)。

[1] 劉佩沂，田素英，梅全喜.金櫻根的研究進(jìn)展[J]．海峽藥學(xué)，2010，22(1):98．

[2] 鐘小清，呂高榮，鄒節(jié)明.金櫻根藥材的名實(shí)考證[J].中草藥，2009，7(7)：1140-1143.

[3] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000:258-330.

[4] 廣東省食品藥品監(jiān)督管理局.廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)[S].第1冊(cè). 廣州：廣東科技出版社, 2004.

[5] 湖南省食品藥品監(jiān)督管理局.湖南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)[S].長(zhǎng)沙：湖南科技出版社,2010.

[6] 王艷，楊靜，李志響，等.金櫻根、莖抗炎作用的對(duì)比研究[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2010，12(3);34-35.

[7] 譚年秀，王嵩，江振霖，等.金櫻根、莖提取物的抗炎解熱作用對(duì)比研究[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2012,14(9):19-22.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

Anti-inflammatory and Analgesic Activity of Root and Rhizome Samples of Radix Rosa Laevigata in Different Regions

Zhao Guolin1，Zhang Ze1，Wang Cong1，Jiang Zhenzhou1,2,Shou Xiaoyun3，Wang Tao1,2，Zou Jieming3*

(1.Jiangsu Center for Drug Screening, China Pharmaceutical University；2.Jiangsu Center for Pharmacodynamics Research and Evaluation, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009，China；Guilin Sanjin Pharmaceutical Co.,Ltd., Guilin 541004，China)

Objective:To evaluate the anti-inflammatory and analgesic activity of root and rhizome samples of Radix Rosa Laevigata in Guangxi, Yunnan, Guizhou.Methods:The mouse auricular model and carrageenan-induced rat paw edema model were used to test the anti-inflammatory activity of root and rhizome samples of Radix Rosa Laevigata.The mouse acetic acid writhing test was used to compare their analgesic activities.Results:All the Radix Rosa Laevigata samples suppressed xylene-induced mouse ear edema and reduced the writhing number; Parts of Radix Rosa Laevigata samples could remarkably inhibit the rat paw edema.Conclusion:All the Radix Rosa Laevigata samples could have certain anti-inflammatory and analgesic activity of different levels.

Radix Rosa Laevigata；Anti-inflammatory；Analgesic Activity

2014-06-13

趙郭林(1992-)，女，中國(guó)藥科大學(xué)碩士研究生，研究方向?yàn)榉肿铀幚韺W(xué)。

鄒節(jié)明(1943-)，男，廣西桂林三金藥業(yè)股份有限公司教授級(jí)高級(jí)工程師、博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幮滤幯邪l(fā)。E-mail：zjm@sanjin.com.cn。

R285

A

1673-2197(2014)19-0014-03