紫外分光光度法測(cè)定香菊膠囊黃酮總含量

付佳樂，耿 直，徐鵬虎，李 陽

(陜西國際商貿(mào)學(xué)院，陜西 咸陽 712046)

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紫外分光光度法測(cè)定香菊膠囊黃酮總含量

付佳樂，耿 直，徐鵬虎，李 陽

(陜西國際商貿(mào)學(xué)院，陜西 咸陽 712046)

目的：建立香菊膠囊中黃酮總含量的測(cè)定方法。方法：采用紫外分光光度法，以蘆丁為對(duì)照品，檢測(cè)波長525nm，以線性、精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性、回收率等作為效能指標(biāo)，進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。結(jié)果：回歸方程為Y=0.476 0X-0.003 7，r=0.999 8，化香樹果序黃酮總含量在0.201 2～1.003 0mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為98.2%，RSD=1.83%。結(jié)論：該方法靈敏快速,準(zhǔn)確可靠，可用于香菊膠囊中黃酮成分總含量的測(cè)定。

香菊膠囊；蘆?。豢傸S酮；紫外分光光度法

香菊膠囊為山東步長制藥有限公司產(chǎn)品，根據(jù)中華人民共和國藥品標(biāo)準(zhǔn)《新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》第31冊(cè)香菊片的基礎(chǔ)劑型制成[1]，具有辛散祛風(fēng)、清熱通竅之功效。臨床常用于治療慢性鼻竇炎、呼吸道感染、鼻炎、慢性鼻炎鼻竇炎鼻息肉等病癥，同時(shí)可有效治療急性鼻炎鼻竇炎[2]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、肺炎鏈球菌和銅綠假單胞菌等為鼻炎、鼻竇炎主要感染菌；體外抑菌試驗(yàn)表明，香菊膠囊中君藥化香樹果序的有效成分為總酚和總黃酮類，抑制細(xì)菌作用較強(qiáng)，可用于治療鼻炎、鼻竇炎等。根據(jù)香菊膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)，主要采用薄層掃描法檢測(cè)黃芪中黃芪甲苷作為質(zhì)量控制指標(biāo)，而處方中黃芪并非君藥，且臨床主要功效為補(bǔ)氣固表，與香菊膠囊辛散祛風(fēng)、清熱通竅的作用不相符，不能正確體現(xiàn)該藥品確切療效[1]。因此，本文在香菊膠囊原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，通過研究化香樹果序藥材的主要化學(xué)成分，選擇穩(wěn)定、可靠的指標(biāo)，篩選專屬性好、準(zhǔn)確度高的檢測(cè)方法。建立合理、有效的香菊膠囊含量測(cè)定方法，提高香菊膠囊的質(zhì)量可控性，以期完善該品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增強(qiáng)企業(yè)的品牌效應(yīng)，現(xiàn)具體報(bào)告如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

722型紫外分光光度計(jì)(上海精密儀器有限公司)；KQ300YDB型超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)；BSA224S型電子天平(Sartorius公司)。

1.2 試劑

步長必暢香菊膠囊，由山東步長制藥有限公司提供；化香樹果序藥材，購自西安盛興飲片廠；蘆丁對(duì)照品(批號(hào)：20101112，中國食品藥品檢定研究院)；亞硝酸鈉(天津市鴻鑫化學(xué)試劑有限公司)；硝酸鋁(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)。

2 方法

2.1 溶液制備

2.1.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱定于120℃干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品20.06mg，置100mL容量瓶，加95%乙醇50mL，超聲處理，待溶解完全后，用50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，配制成0.20mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制[4]精密量取對(duì)照品溶液0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL，分別置于25mL容量瓶，各加50%乙醇溶液5mL；精密加入 5%亞硝酸鈉溶液0.3mL，搖勻，放置6min；加10%硝酸鋁溶液0.3mL，搖勻，放置6min，加1%氫氧化鈉試液4mL；分別加入50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15min。以第1瓶做空白對(duì)照，采用紫外分光光度法，在525nm波長處測(cè)定吸收度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制吸收標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.1.3 化香樹果序藥材溶液制備 取化香樹果序藥材，粉成細(xì)粉，稱取5g，置索氏提取器中，加乙醚120mL，加熱回流至提取液無色，放冷，揮去乙醚液；再加甲醇90mL，加熱回流至提取液無色，移置100mL容量瓶，加入少量甲醇洗滌容器，洗液并入容量瓶，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取10mL，置100mL容量瓶，加水至刻度，搖勻；精密量取3mL，置25mL量瓶，按上述標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可計(jì)算藥材中總黃酮含量。

2.1.4 供試品溶液制備 取香菊膠囊20粒，內(nèi)容物混勻，取3.0g，精密稱定，置索氏提取器中，按 “2.1.3”項(xiàng)方法制備供試品溶液，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可測(cè)得黃酮總含量。

2.2 方法學(xué)考察[5-6]

2.2.1 線性關(guān)系考察 以空白管為參比溶液，在525nm波長處測(cè)定各標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，以蘆丁濃度X為橫坐標(biāo)，以吸光度Y為縱坐標(biāo)，繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.2.2 精密度試驗(yàn) 取本品內(nèi)容物3.0g，精密稱定，置索氏提取器中，按照“2.1.3”項(xiàng)方法進(jìn)行試驗(yàn)，測(cè)定吸光度值，連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算RSD值。

2.2.3 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取本品內(nèi)容物3g(同一批號(hào))6份，精密稱定，按照含量測(cè)定方法測(cè)定黃酮的總含量，計(jì)算RSD值。

2.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取本品內(nèi)容物3g精密稱定，按照含量測(cè)定方法，制備供試品溶液，以相應(yīng)溶液為空白，每隔1h記錄1次數(shù)據(jù)，測(cè)定吸光度值，連續(xù)測(cè)定6次，共5h，計(jì)算RSD值。

2.2.5 回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品(黃酮平均含量為27.54mg/粒)6份，分別精密加入一定量蘆丁對(duì)照品，按照含量測(cè)定方法操作，制備供試品溶液，測(cè)定黃酮總含量，計(jì)算回收率及RSD值。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果[5-6]

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

按照“2.1.2”線制備方法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，由試驗(yàn)得出蘆丁溶液含量與吸光度結(jié)果見表1。

表1 蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液含量與吸光度關(guān)系

以蘆丁含量為橫坐標(biāo)(X)，吸收度值為縱坐標(biāo)(Y),根據(jù)吸收度值對(duì)蘆丁量進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=0.476 0X-0.003 7(r=0.999 8)。由結(jié)果可知，蘆丁在0.200 6～1.003 0 mg范圍內(nèi)，吸收度與蘆丁量線性關(guān)系良好。見圖1。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.2 精密度試驗(yàn)

試驗(yàn)得出，6次重復(fù)試驗(yàn)的吸光度分別為0.281 1、0.285 0、0.280 0、0.283 7、0.282 8、0.281 3，由吸光度差值計(jì)算，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為0.63%(n=6)，說明精密度良好。

3.3 重現(xiàn)性試驗(yàn)

試驗(yàn)得出，6次試驗(yàn)樣品的黃酮總含量分別為27.61、27.67、27.46、27.56、27.63、27.35(mg/粒)，黃酮含量平均為27.55mg/粒，由吸光度差值計(jì)算，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為0.44%(n=6)，說明該試驗(yàn)重現(xiàn)性良好。

3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

試驗(yàn)得出， 5h內(nèi)樣品的吸光度值分別為0.283 1、0.281 4、0.279 5、0.278 7、0.276 8、0.275 3，由吸光度差值計(jì)算，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為1.08%(n=6)，結(jié)果表明：5h內(nèi)吸收度值基本穩(wěn)定，不影響定量分析結(jié)果。

3.5 回收率試驗(yàn)

試驗(yàn)結(jié)果表明，平均回收率為98.2%，RSD=1.83%，加樣回收率良好。

3.6 藥材含量測(cè)定

分別按照含量測(cè)定方法操作，測(cè)定化香樹果序藥材的黃酮含量，計(jì)算平均值為5.57%。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，其中化香樹果序藥材黃酮總含量以無水蘆丁(C27H30O16)計(jì)，不低于4.5%。

3.7 樣品含量測(cè)定[6]

分別取3個(gè)不同批次的香菊膠囊，內(nèi)容物研細(xì)，分別稱取3.0g，各取兩份，精密稱定，置于索氏提取器，按“2.1.3”項(xiàng)方法，測(cè)定吸光度值，計(jì)算總黃酮含量。結(jié)果顯示：三批共六組香菊膠囊中黃酮總含量分別為28.45、29.32、25.36、23.14、24.18、25.69mg/粒，平均含量為26.02mg/粒。

根據(jù)試樣品測(cè)定結(jié)果，考慮大生產(chǎn)及藥材來源等因素，該品每粒黃酮總含量以無水蘆丁(C27H30O16)計(jì)，不低于20.0mg。

4 結(jié)論

本研究表明：采用乙醇提取香菊膠囊化香樹果序成分中黃酮總含量方法良好。在波長525nm處，采用紫外分光光度法，樣品在0.201 2～1.003 0mg范圍內(nèi)黃酮總含量呈良好線性關(guān)系，回歸方程為Y=0.476 0X-0.003 7(r=0.999 8)，加樣平均回收率為98.2%，RSD=1.83%。

采用紫外分光光度法可簡便、靈敏、準(zhǔn)確用于測(cè)定化香樹果序黃酮的總含量，可為香菊膠囊質(zhì)量控制研究提供有效的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。以NaNO2-Al(NO3)3-NaOH為顯色劑，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品在525nm波長測(cè)定化香樹果序黃酮總含量。該方法靈敏快速,準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，可用于香菊膠囊中黃酮成分總含量的測(cè)定。

化香樹果序化學(xué)成分的研究尚不成熟，雖已有關(guān)于黃酮類、揮發(fā)油、酚類等成分的研究與文獻(xiàn)報(bào)道，但由于化香樹果序的成分復(fù)雜，還不能將一些有效成分完全分離出來，對(duì)其藥理作用尚不明確，因此化香樹果序的進(jìn)一步研究勢(shì)在必行。近年來，根據(jù)花香樹果序在心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、抗腫瘤等方面的藥理作用研究成果，多種以黃酮類成分為主的制劑已經(jīng)上市，臨床應(yīng)用較為廣泛。

[1] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.中華人民共和國新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)[S].第31冊(cè),2011:21.

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[4] 汪樹理,賀鳳成,董金平.長白山區(qū)野生款冬花不同采收期蘆丁含量的差異[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2010(4):842-843.

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(責(zé)任編輯：李嵐春)

Determination of Total Flavonoids in Xiangju Capsule by Ultraviolet Spectrometry

Fu Jiale, Geng Zhi,Xu Penghu，Li Yang

(Shanxi Institute of International Trade and Commerce, Xi’an 712046,China)

Objective:To establish the determination method for total flavonoids from Xiangju Capsule.Methods:The contents of total flavonoids were determined by UV spectrophotometry at detection wavelength of 525 nm with rutin as standard substance, using linear ity and linear range, accuracy,reproducibility,selectivity as the performance parameters.Results:The linear regression equation was Y=0.476 0X-0.003 7(r=0.999 8).The linear range of rutin were 0.201 2～1.003 0mg with average recovery of 98.2%(RSD=1.83%,n=6).Conclusion:This method is sensitive,accurate and rapid,which can be used for quality control of total flavonoids in Xiangju Capsule.

Xiangju Capsule;Rutin; total flavonoids; UV spectrophotometry

2014-07-30

陜西省大學(xué)生創(chuàng)業(yè)創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201213123002)

付佳樂(1984-)，女，陜西國際商貿(mào)學(xué)院講師，研究方向?yàn)橹兴幹苿?/p>

R256

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1673-2197(2014)24-0017-02