瑤藥七爪風(fēng)的化學(xué)成分研究

胡金陵，胡中立，盧張偉

1北京大學(xué)深圳醫(yī)院，深圳 518036；2江蘇南京亞晶醫(yī)藥科技有限公司，南京 210007

瑤藥七爪風(fēng)的化學(xué)成分研究

胡金陵1，胡中立1，盧張偉2*

1北京大學(xué)深圳醫(yī)院，深圳 518036；2江蘇南京亞晶醫(yī)藥科技有限公司，南京 210007

從七爪風(fēng)中分離鑒定出6個三萜類化合物和1個甾醇，分別是suavissimoside R1（1）、nigaichigoside F1（2）、2α，3α，19α-三羥基烏蘇-12-烯-28-酸（3）、2α，3β，19α-三羥基-12-烯-23，28-二酸（4）、烏索酸（5）、齊墩果酸（6）和β-胡蘿卜苷（7）。化合物1～7均為首次從該植物中分離得到。

七爪風(fēng)；化學(xué)成分；三萜類

傳統(tǒng)瑤族藥七爪風(fēng)為薔薇科植物深裂銹毛莓Rubus reflexusKer.var.lanceolobusMetc的干燥根，屬風(fēng)濕跌打損傷藥，具有祛風(fēng)除濕、強筋骨、收斂止血、活血調(diào)經(jīng)的功效。該植物主要分布于浙江、江西、廣西、廣東、湖北、湖南等省區(qū)[1]。目前關(guān)于瑤藥七爪風(fēng)的報道很少[2-3]，周小雷等[2]對其化學(xué)成分做預(yù)實驗研究，發(fā)現(xiàn)七爪風(fēng)的根中主要含有三萜、甾體、糖類、苷類和有機酸等成分類型。本文通過多種柱色譜及制備型高效液相色譜等方法，從七爪風(fēng)根的乙醇提取物中分離鑒定出7個化合物：2個三萜皂苷、4個三萜類化合物和一個β-胡蘿卜苷；所有化合物均為首次從該植物中分離得到。

1 儀器、材料與試劑

Brucker AV-300，500型核磁共振儀（TMS內(nèi)標(biāo)）；Micromass Qauttro micro ES-CL質(zhì)譜儀；Waters 600制備液相色譜儀，Waters 2487檢測器；Kromasil?C18色譜柱。

D101型大孔吸附樹脂（天津歐瑞生物科技有限公司）；羥丙基葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜（GE公司）；MCI柱層析填料（日本三菱公司）；ODS反相填料（日本YMC公司）；制備型HPLC用試劑為色譜純；其余試劑均為分析純。

七爪風(fēng)Rubus reflexusKer.var.lanceolobusMetc的根，采自廣西金秀，經(jīng)由北京大學(xué)深圳醫(yī)院中藥房的胡虹教授鑒定確認(rèn)。

2 提取與分離

七爪風(fēng)8.5 kg經(jīng)90%乙醇回流提取3次，合并提取液，減壓濃縮成浸膏，加水混懸分散后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收得到石油醚萃取部位84 g、乙酸乙酯萃取部位122 g、正丁醇萃取部位175 g、水部分約345 g。乙酸乙酯部位經(jīng)過硅膠柱色譜，三氯甲烷-甲醇（100∶0～0∶100）梯度洗脫，得到14個部分RE-1～RE-14。RE-5經(jīng)過硅膠（200～300目）柱色譜，石油醚-丙酮（15∶1）洗脫，重結(jié)晶后分別得到化合物5（186 mg）和6（78 mg）；RE-8經(jīng)過凝膠Sephadex LH-20柱色譜，甲醇洗脫，后再經(jīng)過薄層色譜硅膠H柱色譜，得到化合物3（57 mg）和4（89 mg）；RE-9甲醇重結(jié)晶直接得到化合物7（約230 mg）；RE-11先經(jīng)過MCI柱色譜，甲醇-水（5%、15%、30%、40%、55%、70%、100%，v/v）梯度洗脫，40%甲醇洗脫部分經(jīng)過SephadexLH-20柱色譜，80%甲醇洗脫后再經(jīng)過反復(fù)反相ODS柱色譜，甲醇-水梯度洗脫，得到化合物1（24 mg）；RE-12經(jīng)過MCI柱色譜，甲醇-水（0～100%，v/v）梯度洗脫，50%甲醇洗脫部分經(jīng)凝膠Sephadex LH-20柱色譜（80%甲醇洗脫），得到9個部分RE-11a～RE-11i，RE-11e經(jīng)過ODS柱色譜（42%，v/v，甲醇-水）純化后，經(jīng)pre-HPLC繼續(xù)純化得到化合物2（17 mg）。七爪風(fēng)化合物1～5結(jié)構(gòu)式見圖1。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色粉末（甲醇），mp 254～255℃，易溶于吡啶，Liebermann-Burchard試驗和Molish反應(yīng)均為陽性，提示化合物可能為皂苷類化合物。ESI-MS（m/z）：703.2[M+Na]+，679.1[M-H]-，715.1[M+ Cl]-。1H-NMR（Pyr-d6，500 MHz）δ：1.05（3H，d，J= 5.5 Hz），1.15（3H，s），1.21（3H，s），1.37（3H，s），1.62（3H，s），1.72（3H，s），2.91（1H，s，H-18），4.62（1H，d，J=8.0 Hz，H-12），6.29（1H，d，J=7.0 Hz，H-1′）。13C-NMR（Pyr-d5，125 MHz）δ：48.5（C-1），68.6（C-2），80.9（C-3），54.3（C-4），52.2（C-5），21.4（C-6），33.2（C-7），40.6（C-8），48.2（C-9），37.6（C-10），24.4（C-11），128.1（C-12），139.2（C-13），42.0（C-14），29.0（C-15），26.0（C-16），48.1（C-17），54.7（C-18），72.5（C-19），42.0（C-20），26.6（C-21），38.5（C-22），180.0（C-23），13.4（C-24），17.4（C-25），17.3（C-26），24.4（C-27），176.8（C-28），26.9（C-29），16.6（C-30），95.7（C-1′），74.0（C-2′），78.9（C-3′），71.1（C-4′），79.1（C-5′），62.3（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻[4]數(shù)據(jù)基本一致，故推斷化合物1為suavissimoside R1。

圖1 化合物1～5的結(jié)構(gòu)式

化合物2白色無定型粉末（甲醇），mp 230～231℃，易溶于甲醇、吡啶。ESI-MS（m/z）：667.4[M+ H]+，665.3[M-H]-，701.3[M+Cl]-。1H-NMR（Pyrd5，500 MHz）δ：1.02（3H，d，J=6.5 Hz），1.05（3H，s），1.10（3H，s），1.23（3H，s），1.39（3H，s），1.65（3H，s），2.90（1H，s，H-18），5.30（1H，br.s，H-12），6.30（1H，d，J=6.5 Hz，H-1′）。13C-NMR（Pyr-d5，125 MHz）δ：47.4（C-1），68.0（C-2），78.1（C-3），43.8（C-4），47.3（C-5），18.1（C-6），32.9（C-7），40.6（C-8），46.6（C-9），35.4（C-10），23.9（C-11），127.6（C-12），138.8（C-13），37.8（C-14），28.7（C-15），25.8（C-16），47.9（C-17），53.8（C-18），72.2（C-19），41.7（C-20），26.4（C-21），37.1（C-22），64.5（C-23），14.3（C-24），17.1（C-25），17.4（C-26），24.8（C-27），175.9（C-28），27.0（C-29），16.7（C-30），95.1（C-1′），72.9（C-2′），76.2（C-3′），70.2（C-4′），77.5（C-5′），61.4（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻[5]對照基本一致，故推斷化合物2為nigaichigoside F1。

化合物3白色顆粒狀結(jié)晶（甲醇），香草醛-硫酸溶液顯藍(lán)色斑點。1H-NMR（500 MHz，Pyr-d5）δ：0.90（3H，s，CH3），0.98（3H，s，CH3），1.11（3H，s，CH3），1.26（3H，s，CH3），1.42（3H，s，CH3），1.63（3H，s，H-29），1.12（3H，d，J=6.6 Hz，H-30)，5.58（1H，d，J=3.0 Hz，H-12），4.29（1H，m，H-2），3.76（1H，d，J=3.0 Hz，H-3）。13C-NMR（125 MHz，Pyr-d6）δ：43.1（C-1），66.1（C-2），79.4（C-3），38.8（C-4），48.8（C-5），18.6（C-6），33.6（C-7），40.6（C-8），47.7（C-9），38.7（C-10），24.4（C-11），128.0（C-12），140.0（C-13），42.9（C-14），29.5（C-15），26.4（C-16），48.3（C-17），54.6（C-18），72.7（C-19），42.0（C-20），27.0（C-21），28.5（C-22），29.1（C-23），22.3（C-24），16.8（C-25），17.3（C-26），24.7（C-27），180.7（C-28），27.1（C-29），16.7（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻[5]對照基本一致，故鑒定化合物3為2α，3α，19α-三羥基烏蘇-12-烯-28-酸（2α，3α，19α-trihydroxyurs-12-en-28-oic acid）。

化合物4白色粉末（甲醇），mp大于300℃，Liebermann-Burchard反應(yīng)陽性，10%硫酸乙醇溶液呈亮藍(lán)色斑點。ESI-MS（m/z）：517.4[M-H]-，553.4 [M+Cl]-。1H-NMR（Pyr-d5，500 MHz）δ：13C-NMR（Pyr-d5，125 MHz）δ：48.2（C-1），68.5（C-2），81.0（C-3），54.8（C-4），52.2（C-5），21.4（C-6），33.3（C-7），40.1（C-8），48.2（C-9），38.8（C-10），24.3（C-11），128.0（C-12），139.9（C-13），42.2（C-14），29.1（C-15），26.5（C-16），48.5（C-17），54.8（C-18），72.7（C-19），42.6（C-20），27.2（C-21），38.4（C-22），180.4（C-23），13.5（C-24），17.5（C-25），17.2（C-26），24.8（C-27），180.7（C-28），29.0（C-29），24.9（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻[6]對照基本一致，故推斷化合物4為2α，3β，19α-三羥基-12-烯-23，28-二酸（2α，3β，19α-trihydroxyurs-12-en-23，28-dioic acid）。

化合物5白色針晶（甲醇），mp 287～289℃。ESI-MS（m/z）：457.3[M+H]+，479.3[M+Na]+。1H-NMR（CDCl3，300 MHz）和13C-NMR（CDCl3，75 MHz）數(shù)據(jù)與文獻[7]報道基本一致，故確定化合物5為烏索酸。

化合物6白色針晶（甲醇），mp 302～304℃。ESI-MS（m/z）：456.1[M]+。1H-NMR（CDCl3，300 MHz）和13C-NMR（CDCl3，75 MHz）數(shù)據(jù)與文獻[8]報道基本一致，故確定化合物6為齊墩果酸。

化合物7白色粉末，溶于甲醇、含水甲醇。與β-胡蘿卜苷標(biāo)準(zhǔn)品對照，薄層色譜Rf值一致，斑點顯色相同。鑒定化合物7為β-胡蘿卜苷。

[1] 戴斌.中國現(xiàn)代瑤藥[M].南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，2009：106.

[2] 周小雷，王碩，樊溪源，等.瑤藥七爪風(fēng)的化學(xué)成分預(yù)實驗研究[J].中國民族民間醫(yī)藥雜志，2012，21（2）：2-3.

[3] 梁冰，文志云，韋韡，等.瑤藥七爪風(fēng)薄層色譜檢測方法研究[J].中國民族民間醫(yī)藥雜志，2012，21（11）：3.

[4] 都述虎，馮芳，劉文英，等.茅莓化學(xué)成分的分離鑒定[J].中國天然藥物，2005，3（1）：17-20.

[5] 劉向前，鄒親朋，馮勝，等.高山地榆中3個烏蘇烷型三萜成分[J].西北藥學(xué)雜志，2011，26（4）：239-41.

[6] Wang BG,Zhu WM,Li XM,et al.Two triterpenoid dimersfromRubuspungensCambvar.oldhamii[J].Chin Chem Lett,2000,11(2):143-6.

[7] 常軍民，熱娜·斯木，諸年生.新疆鼠尾草的化學(xué)成分研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2001，13（1）：27-9.

[8] 周大穎，楊小生，楊波，等.黔產(chǎn)毛子草化學(xué)成分研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2007，19（5）：807-8.

Chemical Components from the Roots of Rubus reflexus Ker.var.lanceolobus Metc

HU Jin-ling1,HU Zhong-li1,LU Zhang-wei2*
1Peking University Shenzhen Hospital,Shenzhen 518036,China;2Nanjing Yajing Medical Technology Co., Ltd,Nanjing 210007,China

The seven compounds obtained from the roots ofRubus reflexusKer.var.lanceolobusMetc were suavissimoside R1(1),nigaichigoside F1(2),2α,3α,19α-trihydroxyurs-12-en-28-oic acid(3),2α,3β,19αtrihydroxyurs-12-en-23,28-dioic acid(4),ursolic acid(5),oleanic acid(6)and daucosterol(7).All compounds were obtained from this plant for the first time.

Rubus reflexusKer.var.lanceolobusMetc;Chemical components;Triterpene

R284.2

A

1673-7806（2014）03-231-03

胡金陵，男，主治醫(yī)師 E-mail:454744476@qq.com

*通訊作者 盧張偉，男，碩士，工程師

E-mail:Lzwsunbird@126.com

2014-01-08

2014-02-17