黃酮類化合物的藥動(dòng)學(xué)研究

摘要：通過(guò)對(duì)近10年國(guó)內(nèi)外關(guān)于黃酮類化合物藥動(dòng)學(xué)研究的文獻(xiàn)資料進(jìn)行檢索、分析和歸納，闡述了生物樣品的前處理方法、檢測(cè)方法及其藥動(dòng)學(xué)過(guò)程的研究進(jìn)展，為科學(xué)、合理的評(píng)價(jià)黃酮類化合物的作用機(jī)制、體內(nèi)行為、指導(dǎo)臨床合理用藥奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：黃酮類；藥動(dòng)學(xué)；代謝

黃酮類化合物是許多中草藥的有效成分，具有廣泛的生理和藥理活性。實(shí)驗(yàn)證明其具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎和免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性。近年來(lái)對(duì)該類化合物的研究已成為國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥界的熱門(mén)話題，因此了解其在體內(nèi)的吸收、分布、排泄、代謝等信息，有助于了解黃酮類藥物的作用機(jī)制，對(duì)于指導(dǎo)新藥設(shè)計(jì)，提高藥物療效和安全性，科學(xué)的評(píng)價(jià)黃酮類化合物的藥用價(jià)值奠定基礎(chǔ)。本文就黃酮類化合物生物樣品的前處理方法，檢測(cè)方法和藥動(dòng)學(xué)研究方面進(jìn)行綜述。

1生物樣品的前處理方法

由于生物樣品中含有大量的內(nèi)源性物質(zhì)且樣品濃度低，所以對(duì)生物樣品中的黃酮及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行定量分析時(shí)，都需對(duì)樣品進(jìn)行前處理，以達(dá)到排除內(nèi)源性雜質(zhì)的干擾，富集被測(cè)組分滿足儀器檢測(cè)靈敏度的目的。目前對(duì)含有黃酮類化合物的生物樣品前處理方法主要有蛋白沉淀、液-液萃取和液-固萃取等。

1.1蛋白沉淀生物樣品中含有大量的蛋白質(zhì)，它們能夠結(jié)合藥物，因此對(duì)于某些藥物的測(cè)定，必須先將與蛋白結(jié)合的藥物游離之后再做進(jìn)一步處理[1]。比較簡(jiǎn)單的處理方法是用甲醇、乙醇、乙腈等常見(jiàn)的蛋白沉淀劑沉淀蛋白，高速離心后取上清液直接進(jìn)樣。馬國(guó)等[2]測(cè)定大鼠血漿中山楂葉總黃酮的兩個(gè)主要有效成分的濃度時(shí)，采用甲醇直接沉淀蛋白，取上清液進(jìn)樣分析。沉淀蛋白直接進(jìn)樣雖然方法簡(jiǎn)單，但需要沉淀劑對(duì)樣品和內(nèi)標(biāo)有較高的溶解度。現(xiàn)大部分情況是沉淀蛋白后取上清液，吹干，溶劑復(fù)溶進(jìn)樣。齊悅[3]等研究委陵菜黃酮在大鼠體內(nèi)的經(jīng)時(shí)過(guò)程時(shí)，生物樣品采用甲醇沉淀蛋白，取上清液氮?dú)獯蹈桑瑥?fù)溶后進(jìn)樣測(cè)定。

1.2液-液萃取液-液萃取一般用于提取親脂性成分，而生物樣品中含有的大多數(shù)內(nèi)源性雜質(zhì)是強(qiáng)極性的水溶性物質(zhì)。因而可以根據(jù)被測(cè)組分的極性來(lái)選擇有機(jī)溶劑，被測(cè)組分極性較小時(shí)，應(yīng)選擇極性相對(duì)較弱的溶劑，如正己烷等；被測(cè)組分極性較強(qiáng)一般選用二氯甲烷、丙酮等。孟繁華等[4]測(cè)定比格犬血漿中淫羊霍苷元濃度時(shí)，考察了蛋白沉淀、固相萃取、液-液萃取等樣品處理方法，發(fā)現(xiàn)用液-液萃取法處理樣品時(shí)能獲得較高且穩(wěn)定的提取回收率。其用血漿樣品，以乙酸乙酯為提取溶劑，渦流混合離心后，分取有機(jī)相吹干，復(fù)溶后進(jìn)樣分析。

1.3固-相萃取固-相萃取適合生物樣品中被測(cè)定組分的富集，是目前常用的前處理方法之一。測(cè)定大鼠血漿中芒柄花素、毛蕊異黃酮和異鼠李素的濃度時(shí)，血漿樣品的處理方法是樣品過(guò)已活化好的迪瑪C18萃取小柱，先用1mL水沖洗，再以1mL甲醇洗脫，收集洗脫液。由于黃酮類化合物在體內(nèi)多與葡萄糖醛酸結(jié)合，因此原形藥物的濃度很低，測(cè)定體液中黃酮類化合物的濃度時(shí)，多以酶水解后，再進(jìn)行處理分析。張穎[5]在測(cè)定血漿中銀杏黃酮含量時(shí)，取血樣，加入葡萄糖醛酸水解酶，37℃震蕩水浴下水解30min，渦旋后高速離心，上清液吹干，流動(dòng)相溶解進(jìn)樣分析。

2檢測(cè)方法

目前應(yīng)用最為廣泛的檢測(cè)方法是HPLC，根據(jù)檢測(cè)器的不同大致分為HPLC-UV、HPLC-ECD等。何秀瓊[6]等研究大鼠灌胃黃芩素后，采用HPLC-UV法，檢測(cè)波長(zhǎng)276nm，測(cè)定給藥后不同時(shí)間的原型藥物和酶解后藥物在血漿中的濃度。結(jié)果顯示灌胃給藥黃芩素后首過(guò)效應(yīng)嚴(yán)重，大部分在體內(nèi)被代謝成葡萄糖醛酸、硫酸結(jié)合物。張穎等[5]將血漿樣品經(jīng)葡萄糖醛酸苷水解酶水解后，采用HPLC-ECD同時(shí)分析大鼠血漿樣品中槲皮素、異鼠李素和山柰酚。結(jié)果最低檢測(cè)濃度達(dá)到0.5ng/ml。近年由于串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的廣泛應(yīng)用，LC-MSn聯(lián)用技術(shù)已逐步應(yīng)用于黃酮類化合物的體內(nèi)分析。王少敏等[7]首次采用HPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中槐角苷和苷元染料木素的血藥濃度，定量下限達(dá)1ng/ml。隨著UPLC的推廣，分析效率進(jìn)一步得到提高。黃勇等[8]采用UPLC-MS/MS同時(shí)測(cè)定家兔血漿中復(fù)方葒草凍干粉針的6個(gè)黃酮類化合物的濃度，樣品分析時(shí)間僅為3.5min。結(jié)果顯示，該方法快速、靈敏。

3藥動(dòng)學(xué)過(guò)程研究

3.1黃酮類化合物在體內(nèi)的吸收黃酮類化合物屬于多酚類化合物，具有弱酸性，已發(fā)現(xiàn)某些黃酮苷元可以經(jīng)胃部吸收。劉太明等[9]采用了在體胃吸收實(shí)驗(yàn)，研究了黃芩苷及黃芩素在胃內(nèi)的吸收情況，結(jié)果表明黃芩苷和黃芩素在胃內(nèi)的吸收率分別為 8.05%和34.53%。說(shuō)明在胃中黃芩素的吸收程度明顯優(yōu)于黃芩苷。袁勇等[10]采用大鼠在體腸灌流模型，研究田薊苷和香青蘭總黃酮在大鼠各腸段的吸收特性。黃酮類化合物經(jīng)過(guò)胃和小腸被選擇性吸收后，未被吸收的黃酮類化合物及其代謝物還可被大腸細(xì)菌產(chǎn)生的各種酶水解后吸收進(jìn)入體內(nèi)。

3.2黃酮類化合物在體內(nèi)的分布藥物的分布在一定程度上說(shuō)明藥物對(duì)機(jī)體的靶向性，研究藥物的體內(nèi)分布情況對(duì)闡明藥物的作用機(jī)制及其有效性和毒副作用有重大意義。目前已有學(xué)者對(duì)黃酮類化合物的體內(nèi)分布進(jìn)行了研究，并取得一定進(jìn)展。黃勇等[8]大鼠靜脈注射復(fù)方葒草后，研究原兒茶酸、異葒草素和野黃芩苷3種指標(biāo)成分在大鼠體內(nèi)的分布特征。結(jié)果表明，3種成分主要分布在腎、肺和心等血流量豐富的組織中。顏娟等[11]研究牡荊苷在兔體內(nèi)組織分布情況。實(shí)驗(yàn)中新西蘭白兔靜脈注射牡荊苷后，采用統(tǒng)計(jì)矩理論計(jì)算了各個(gè)組織的AUC，各組織的AUC順序?yàn)槟I＞肝＞肺＞脾＞心＞腦，說(shuō)明牡荊苷在兔體內(nèi)各組織分布廣泛，其中腎中分布最多，在腦中分布最低。

3.3黃酮類化合物在體內(nèi)的代謝和排泄對(duì)于大部分的黃酮類化合物來(lái)說(shuō)，肝臟和胃腸道是藥物代謝的主要場(chǎng)所。居文政等[12]采用 UPLC-MS/MS 技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)燈盞花乙素在腸內(nèi)菌群作用下轉(zhuǎn)化為燈盞花乙素苷元，胃腸道內(nèi)燈盞花乙素與其苷元并存，而苷元更易于吸收，可以提高燈盞花乙素的生物利用度。符乃光等[13]報(bào)道，槲皮素的血漿代謝物中含有槲皮素、異鼠李素和樹(shù)柳素等物質(zhì)。說(shuō)明槲皮素部分以原形吸收，而另一部分經(jīng)過(guò)胃腸道微生物菌群或酶轉(zhuǎn)化為異鼠李素或樹(shù)柳素等其他黃酮類后進(jìn)入血液。

3.3黃酮類化合物在體內(nèi)的排泄黃酮類化合物在體內(nèi)排泄途徑主要為腎臟排泄和膽汁排泄，排泄物大多為藥物的代謝物，也有少數(shù)以原形排泄。閆晶超等[14]以大鼠灌胃給予瀉心湯后，采集血樣和尿樣，HPLC法測(cè)定黃酮類成分濃度。結(jié)果顯示黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素在尿中均有排泄。陳婷等[15]研究大鼠口服菊花提取物后，代謝物木犀草素和芹菜素在膽汁中的排泄情況。膽汁樣品經(jīng)酶解后分析，結(jié)果顯示給藥后36h內(nèi)，膽汁中木犀草素和芹菜素的累積排泄量占給藥量的2.05%和6.34%，兩者經(jīng)膽汁排泄證明存在肝腸循環(huán)。

4結(jié)語(yǔ)

黃酮類化合物因具有毒性低和藥理活性較強(qiáng)的特點(diǎn)，成為國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥界開(kāi)發(fā)的重點(diǎn)。在我國(guó)傳統(tǒng)中藥復(fù)方制劑中，很多以黃酮作為主要指標(biāo)成分。但目前國(guó)內(nèi)外對(duì)黃酮類化合物的體內(nèi)過(guò)程研究尚不完善。因此有必要進(jìn)一步豐富和提高黃酮化合物的體內(nèi)分析方法，深入研究其體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)和代謝情況，這對(duì)于了解中藥的作用機(jī)制，指導(dǎo)臨床合理用藥，提高中成藥的質(zhì)量和療效有重要的意義。

參考文獻(xiàn)：

[1]李衛(wèi)中.黃酮類化合物藥物動(dòng)力學(xué)的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代食品與藥品雜志，2007，17(1)：17-21.

[2]馬國(guó)，蔣學(xué)華，黃婷，等.山楂葉總黃酮在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2007，42(8)：613-617.

[3]齊悅，唐鋮，段宏泉.委陵菜黃酮在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究[J].藥物評(píng)價(jià)研究，2010，33(3)：187-190.

[4]孟繁華，郭繼芬，李全勝，等. 液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定比格犬血漿中淫羊藿苷元[J].中國(guó)新藥雜志，2010，19(6)：537-540.

[5]張穎，劉建勛，林力，等．HPLC-ECD 法測(cè)定大鼠血漿中銀杏葉黃酮成分及藥代動(dòng)力學(xué)研究[J]．藥物分析雜志，2011，31(1)：10-14.

[6]何秀瓊，裴利霞，王一濤，等.高效液相色譜法研究大鼠灌胃黃芩素的藥動(dòng)學(xué)[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2010，22，1901-1905.

[7]王少敏，簡(jiǎn)龍海，王柯，等. HPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中槐角苷及染料木素[J].藥物分析雜志，2013，33（1）:39-43.

[8]黃勇，何峰，鄭林，等. UPLC－MS/MS法同時(shí)測(cè)定家兔血漿中6個(gè)黃酮類成分及其藥代動(dòng)力學(xué)研究[J].藥物分析雜志，2012，32（1）：1-6.

[9]劉太明， 將學(xué)華. 黃芩苷和黃芩素大鼠在體胃、腸的吸收動(dòng)力學(xué)研究[J].中國(guó)中藥雜志，2006，31(12)：999-1000.

[10]袁勇， 邢建國(guó)， 王新春，等. 香青蘭黃酮類化合物的大鼠在體腸吸收[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2011，31(20)：1667-1670.

[11]顏娟，商愛(ài)民，王書(shū)華，等. 金蓮花中牡荊苷在兔體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)及組織分布研究[J].中成藥，2012，34（4）：650-653.

[12]居文政，儲(chǔ)繼紅，譚仁祥，等. UPLC-MS/MS 聯(lián)用法分析燈盞花乙素在胃腸道的代謝物[J]．中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2006，11(3)：292.

[13]符乃光，陳峰，魏娜，等.LC-MS法鑒定槲皮素在大鼠體內(nèi)的主要代謝產(chǎn)物[J].藥物分析雜志，2009，29（5）：764-768.

[14]閆晶超，劉兆明，王天明，等. 瀉心湯黃酮類成分在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2007，42(7)：722-729.

[15]陳婷，蔣惠娣，魯鑫炎，等.大鼠膽汁中木犀草素和芹菜素HPLC測(cè)定方法的建立及應(yīng)用[J].藥物分析雜志，2007，27（4）：490.

編輯/哈濤