芹菜素對大鼠骨肉瘤Caspases-3 NF-κB蛋白的影響

摘要：目的觀察芹菜素對大鼠骨肉瘤Caspases-3，NF-κB蛋白水平的調(diào)節(jié)作用。方法SD大鼠50只，建立大鼠骨肉瘤模型。隨機分為，模型組、順氯氨鉑組（10 mg/kg）、芹菜素組（2.5，5，10 mg/kg），每組10只，連續(xù)灌胃給藥30d。模型組灌胃給予等體積的生理鹽水。末次給藥24h后，取大鼠胸腺、胰腺稱重。Western blotting法檢測骨肉瘤組織中Caspases-3，NF-κB的蛋白含量。結(jié)果與模型組相比，順氯氨鉑組胸腺和脾臟重量明顯下降；芹菜素治療組的胸腺和脾臟重量增加，增加Caspases-3蛋白表達，同時下調(diào)NF-κB蛋白的表達，差異有顯著性意義（P＜0.05）。結(jié)論芹菜素可通過提高骨肉瘤大鼠免疫器官的重量，增加Caspases-3蛋白表達，下調(diào)NF-κB蛋白的表達，抑制骨肉瘤細胞的增殖，誘導(dǎo)骨肉瘤細胞凋亡。

關(guān)鍵詞：芹菜素；大鼠；骨肉瘤；NF-κB；Caspases-3

Effect of Apigenin on Osteosarcoma Caspases-3 rats， NF- κ B Protei

CHENG Xin-yan

(The Guangxi Zhuang Autonomous Region people's Hospital，Nanning 530021，Guangxi，China)

Abstract：ObjectiveTo study Apigenin in treatment of rats osteosarcoma on Caspases-3 and NF-κB protein expression. Methods50 rats were randomly divided into model group， Cisplatin group(10 mg/kg)， Apigenin group(2.5， 5， 10mg/kg). The models of rats osteosarcoma were made by operation. All groups were gavagefor 30 days. After the last administration 24h， weighing of rat thymus， pancreas weight. In osteosarcoma Caspases-3 and NF-κB expressions were assessed using Western blotting assay. ResultsCompared with the model group， the thymus and pancreas weight cyclophosphamide treatment group increased(P<0.05); Transplantation of apigenin enhanced the expression of Caspases-3 protein significantly in the damaged zone; Meanwhile， the expression of NF-κB expression levels were significantly down-regulated(P<0.05). ConclusionApigenin can improve immunity osteosarcoma in rats; improve Caspases3 protein levels; decrease the expression of NF-κB protein. Inhibit the proliferation of osteosarcoma cells， inducing apoptosis in osteosarcoma cells.

Key words：Apigenin；Rats；Osteosarcoma；NF-κB; Caspases-3

骨肉瘤是一種原發(fā)性的惡性骨腫瘤，多發(fā)病于青少年。美國惡性骨腫瘤病例中，0~24歲的年齡段占全部病例的55%[1]。骨肉瘤多發(fā)生在四肢長骨的干骺端，發(fā)病后死亡率很高，在發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者中5年生存率不足30%[1，2]。芹菜素是一種無基因毒性作用的飲食黃銅化合物， 具有抑制宮頸癌、胃癌、骨肉瘤、肺癌等癌細胞的增殖[3，4]。本實驗研究芹菜素對大鼠骨肉瘤Caspases-3和NF-κB蛋白的影響，為芹菜素的作用機制提供科學基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1資料與方法

1.1實驗動物SD大鼠，雌雄各半，（200±20）g，SPF級，由廣西醫(yī)科大學實驗動物中心提供，試驗動物生產(chǎn)許可證SCXK(桂)2009-0002，試驗動物使用許可證SCXK(桂)2009-0005。

1.2儀器與試劑大鼠骨肉細胞系UMR106（中科院上海生化與細胞學研究室上海細胞庫）；兔多克隆抗NF-κB抗體(武漢博士德公司)；辣根過氧化酶標記的鼠抗羊IgG抗體、羊抗鼠IgG抗體(武漢博士德公司)；半干電轉(zhuǎn)儀（美國，Bio-Rad）；低溫高速離心機（德國Heraeus）；常溫高速離心機（美國Thermofisher）；-40℃低溫冰箱（青島海爾股份有限公司）。

1.3實驗方法

1.3.1給藥及給藥方法將50只SD大鼠隨機分為三組，每組10只：模型組、順氯氨鉑組（10mg/kg）、芹菜素組（2.5，5，10mg/kg）。連續(xù)灌胃給藥30d。

1.3.2大鼠骨肉瘤模型建立[5]腹腔注射3%戊巴比妥鈉（30mg/kg）麻醉大鼠后，用1640培養(yǎng)液將對數(shù)生長期的大鼠骨肉細胞系UMR106稀釋為5×106/ml向大鼠的后肢股骨遠端的骨髓腔中注射0.2ml。

1.3.3觀察指標末次給藥24h后分別處死各組大鼠，切取大鼠胸腺、脾臟稱重。免疫蛋白印記法測定骨肉瘤組織中Caspases-3，NF-κB的蛋白水平。

1.4統(tǒng)計學方法本研究數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 18.0軟件進行統(tǒng)計學數(shù)據(jù)分析。數(shù)據(jù)以（x±s）表示，多樣本均數(shù)間比較采用 One-way ANOVA 分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1芹菜素對骨肉瘤大鼠胸腺、脾臟的影響與模型組相比，芹菜素5，10mg/kg組的胸腺和脾臟重量均有上升（P＜0.05），見表1。

2.2芹菜素對大鼠骨肉瘤組織中NF-κB的表達影響與模型相比，芹菜素5，10mg/kg組骨肉瘤組織中的NF-κB蛋白水平均下降，差異有顯著性意義（P＜0.05），見表2，圖1。

圖1 芹菜素對大鼠骨肉瘤組織中NF-κB蛋白表達的影響

2.3對大鼠骨肉瘤組織中Caspases3的表達影響與模型相比，順氯氨鉑組、芹菜素2.5，5，10mg/kg組骨肉瘤組織中的Caspases-3蛋白水平均上升，其中芹菜素10mg/kg組上升的水平最高，差異有顯著性意義（P＜0.05），見表3，圖2。

圖2 芹菜素對大鼠骨肉瘤組織中Caspases-3蛋白表達的影響

3討論

骨肉瘤為骨惡性腫瘤，由間質(zhì)細胞系發(fā)展，從軟骨階段之間或間接迅速形成腫瘤骨樣組織和骨組織。在患惡性腫瘤的兒童和青少年中，骨肉瘤是死亡率很高的疾病，但早期發(fā)現(xiàn)和及時治療已經(jīng)從很大程度上提高了該病的生存率。目前治療骨肉瘤的方法為化學、放射性或外科手術(shù)治療[6]?，F(xiàn)臨床使用的甲氨蝶呤、順氯氨鉑、阿霉素等化療藥物，均有使患者的免疫力下降，白細胞數(shù)降低等副作，多耐藥產(chǎn)生等缺點[7]。芹菜素是一種天然源性的黃酮類化合物，廣泛分布于蔬菜和水果中，芹菜的含量最高。具有抗腫瘤、擴張血管、抗氧化、調(diào)節(jié)血壓血脂等作用[8]。實驗結(jié)果表明，芹菜素治療的骨肉瘤大鼠的胸腺與脾臟的重量均比模型組的重，推測芹菜素可通過增加胸腺、脾臟免疫器官的重量，提高免疫能力，從而改善患者生存質(zhì)量。

NF-κB是轉(zhuǎn)錄因子蛋白家族的其中一員。NF-κB的異?；罨芤种萍毎乃劳?，在惡性腫瘤中NF-κB一般均呈現(xiàn)高表達水平。Caspases是在于胞質(zhì)溶膠中的結(jié)構(gòu)上相關(guān)的半胱氨酸蛋白酶。Caspases家族現(xiàn)研究確定至少存在11種。在細胞凋亡過程中，直接參與早起的凋亡啟動、信號傳遞及晚期凋亡效應(yīng)。其中Caspases-3蛋白是參與細胞凋亡執(zhí)行。Caspases的表達水平不但反應(yīng)細胞的凋亡水平，還反應(yīng)凋亡啟動因素的存在[9]。研究結(jié)果表明，芹菜素能增加骨肉瘤中Caspases-3的蛋白含量，下調(diào)NF-κB蛋白的表達。表明芹菜素能抑制抗凋亡因子，達到對骨肉瘤的治療效果。

參考文獻：

[1]Mirabello， L.， Troisi， R.J. Savage， S.A. Osteosarcoma incidence and survival rates from 1973 to 2004: data from the Surveillance， Epidemiology， and End Results Program[J].Cancer ，2009，115:1531-1543.

[2]Broadhead， M.L.， Clark， J.C.， Choong， P.F. Dass， C.R. Making gene therapy for osteosarcoma a reality. Expert review of anticancer therapy ，2010，10:477-480.

[3]Jin X Y， Ren C S. Effect and mechanism of apigenin on VEGF expression in human breast cancer cells[J]. Zhonghua Zhong Liu Za Zhi，2007，29(7):495-499.

[4] Patel D， Shukla S， Gupta S. Apigenin and cancer chemoprevention: progress， potential and promise (review)[J]. Int J Oncol，2007，30(1):233-245.

[5]孔佑正，李世德.番茄紅素對骨肉瘤大鼠后肢移植瘤及移植瘤細胞凋亡的影響[J].蛇志，2011，23（1）：4-8.

[6]牛曉輝，徐海榮.骨肉瘤的化療[J].中國癌癥雜志，2010，20（2）：81-85.

[7]汪新媛，田京.骨肉瘤化療研究進展[J].國際骨科學雜志，2010，31（3）：159-161.

[8]Rossoni G，Grande S，Galli C，et al． Wild artichoke prevents the age-associated loss of vasomotor function［J］． J Agric Food Chem，2005，53( 26) : 10291-10296.

[9]李琪佳，吳愛民，付文娟，等.TRA IL、Caspase-8和NF-JB蛋白在人骨肉瘤中的表達及其與細胞凋亡的相關(guān)性研究[J].實用癌癥雜志，2009，24(1):11-14.

編輯/申磊