大腸菌群檢測(cè)不同方法間的比較研究

摘要：對(duì)大腸菌群的研究可追溯到1884年的霍亂時(shí)期，1892年，大腸菌群被率先適用于糞便污染的指標(biāo)，1895年被應(yīng)用于水質(zhì)檢測(cè)中。至今大腸菌群對(duì)水環(huán)境的測(cè)定已有百年歷史，具有深遠(yuǎn)的科學(xué)衛(wèi)生意義。大腸菌群常用于對(duì)水質(zhì)、食品等公共衛(wèi)生的檢測(cè)之中，以是否具有大腸菌群或具有多少大腸菌群作為衡量水質(zhì)與食品質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)之一，具有十分重要的意義。因其重要意義，相應(yīng)的檢測(cè)方法隨之而來(lái)。本文主要選擇對(duì)水質(zhì)中的大腸菌群的檢測(cè)的兩種方法，進(jìn)行對(duì)比分析。

關(guān)鍵詞：大腸菌 檢測(cè) 不同方法

中圖分類(lèi)號(hào)：TS202 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-5336（2014）12-0038-02

大腸菌群名字中與“菌”有關(guān)，而實(shí)際上它并非以細(xì)菌學(xué)而得名，而是衛(wèi)生細(xì)菌領(lǐng)域的用語(yǔ)，并非是某一屬性的細(xì)菌，而是代指某些有相同特性的組群。大腸菌群通常包含大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌與陰溝腸桿菌等，廣泛分布于溫血?jiǎng)游锏募S便等自然界中，人畜糞便給外界環(huán)境帶來(lái)的污染是大腸桿菌長(zhǎng)久滋生的關(guān)鍵原因。大腸菌群是評(píng)價(jià)水質(zhì)、食品衛(wèi)生質(zhì)量的主要因素之一。[1]

1 大腸菌群檢測(cè)的兩種常用方法[2]

1.1 多管發(fā)酵法

多管發(fā)酵法所根據(jù)的原理是總大腸菌群所應(yīng)具備的比如革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌在特定溫度時(shí)間內(nèi)可發(fā)酵乳糖伴隨酸氣的生成，并有典型菌落生成于選擇性培養(yǎng)基等生物特性。水環(huán)境中的多管發(fā)酵法主要分為生活飲用水的檢測(cè)和水源水的檢測(cè)，前者主要分為三個(gè)過(guò)程。

（1）初發(fā)酵試驗(yàn)。使用無(wú)菌操作的方式將100ml原水樣分別加入到兩個(gè)伴有三倍濃縮乳糖蛋白胨的培養(yǎng)液的且已經(jīng)滅菌處理的50ml的大試管或者燒瓶中；用無(wú)菌操作的方式分別向十支伴有三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的且已經(jīng)滅菌處理的5ml內(nèi)附倒管的試管中加入10ml原水樣，在混合之后在37℃恒溫箱內(nèi)恒溫放置24小時(shí)。

（2）平板分離。在第一步完成之后，會(huì)有酸氣生成，將有酸或酸氣的發(fā)酵管分別接于品紅亞硫酸鈉或者伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基，然后再放置18至24小時(shí)于之前的恒溫箱中。在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基選擇紫紅色且伴有金屬光澤或深紅色基本不帶金屬光澤或淡紅色中心色澤較深的菌落，在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上選擇深紫黑色伴金屬光澤或紫黑色基本不伴金屬光澤或淡紫紅色中心色澤較深的菌落，選擇其中一部分菌落進(jìn)行涂片、革蘭氏染色鏡檢。

（3）復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。以上經(jīng)涂片鏡檢的菌落若是革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌，就選擇該菌落的其他部分繼續(xù)接種在內(nèi)附倒管的普通濃度的乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，每管能夠接種同一出發(fā)酵管的最典型菌落的1至3個(gè)，之后放置在上述恒溫箱中24小時(shí)，大腸菌群存在在產(chǎn)生酸或氣的試管中。

水源水檢驗(yàn)的過(guò)程為：其一，稀釋水樣以1：10的比例。其二，分別加入10ml水樣于五個(gè)裝有三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的5ml試管中；分別加入1ml水樣于五個(gè)含10ml乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管；分別加入1：10稀釋水樣于五個(gè)內(nèi)附倒管的含10ml乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管中。之后的過(guò)程同生活飲用水的檢測(cè)。

1.2 濾膜法

濾膜是一種0.45至0.65微米孔徑的微孔薄膜，濾膜法所根據(jù)的原理是濾膜對(duì)水樣的過(guò)濾作用，能將水中的細(xì)菌保留在濾膜上。對(duì)濾膜貼進(jìn)行選擇培養(yǎng)，即可計(jì)算出水樣中大腸菌群的含量。濾膜法大致分為下列過(guò)程：首先，對(duì)濾膜進(jìn)行滅菌處理。其次，過(guò)濾水樣。通過(guò)無(wú)菌鑷子夾取滅菌濾膜的邊緣位置，以粗糙面向上地方式將其貼于滅菌處理過(guò)的濾床，根據(jù)水樣含菌數(shù)量將水樣注入到固定好的濾器中，通常為30ml左右，然后加蓋、打開(kāi)閥門(mén)、在-0.5*1013.25hPa條件抽濾。之后，進(jìn)行5秒鐘左右的抽氣，關(guān)閉閥門(mén)，取下濾器，以上述方式通過(guò)滅菌鑷子將濾膜移至品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基，使濾膜無(wú)氣泡地緊貼于培養(yǎng)基，放于37℃恒溫箱中22至24小時(shí)。然后，觀察結(jié)果，選擇紫紅色伴有金屬光澤或深紅色基本不帶金屬光澤或淡紅色中心色澤較深的菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。將檢驗(yàn)為革蘭氏染色陰性無(wú)芽胞桿菌接種在乳糖蛋白胨培養(yǎng)液或半固體培養(yǎng)基中，在37℃條件下，24小時(shí)產(chǎn)生酸或者氣則說(shuō)明總大腸菌為陽(yáng)性。每升水中的大腸菌數(shù)一共為濾膜生長(zhǎng)的大腸菌落的三倍。

2 兩種檢測(cè)方法的對(duì)比研究[3]

上述兩種方法各有所長(zhǎng)，主要從可行性、準(zhǔn)確度和適用范圍三方面進(jìn)行對(duì)比分析：

（1）可行性。多管發(fā)酵法所根據(jù)的原理是總大腸菌群所應(yīng)具備的比如革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌在特定溫度時(shí)間內(nèi)可發(fā)酵乳糖伴隨酸氣的生成，并有典型菌落生成于選擇性培養(yǎng)基等生物特性。濾膜是一種0.45至0.65微米孔徑的微孔薄膜，濾膜法所根據(jù)的原理是濾膜對(duì)水樣的過(guò)濾作用，能將水中的細(xì)菌保留在濾膜上。兩種方法均為可行的。

（2）準(zhǔn)確度。通過(guò)對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)的分析可知，與發(fā)酵法相比濾膜法具有更為準(zhǔn)確的結(jié)果。上述方法最初所具有的水質(zhì)依據(jù)是基本一致的，而后影響準(zhǔn)確度的因素主要是試驗(yàn)過(guò)程中的誤差，多管發(fā)酵法的誤差約為60%左右，而濾膜法的誤差在20%之內(nèi)。結(jié)合理論與實(shí)踐我們發(fā)現(xiàn)，多管發(fā)酵法的準(zhǔn)確度與試驗(yàn)次數(shù)有關(guān)，試驗(yàn)次數(shù)越多，誤差會(huì)相應(yīng)變小。

（3）適用范圍的對(duì)比。多管發(fā)酵法與濾膜法比較，具有更廣泛的適用范圍，無(wú)論是對(duì)底泥、飲用水、水源水甚至渾濁水質(zhì)都是可行的。而濾膜法因?yàn)V膜有一定的限制性，為避免濾膜被污質(zhì)堵住造成的不便，更適用于雜質(zhì)量少的水樣，且操作更為便利?？傮w來(lái)說(shuō)，多管發(fā)酵法更為常用，且測(cè)試準(zhǔn)確度較好；濾膜法適宜低濁度水樣或較大水樣，在原水樣量不足的時(shí)候可適度增加無(wú)菌水稀釋至體積較大后測(cè)定。

3 結(jié)語(yǔ)

多管發(fā)酵法與濾膜法均為國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的大腸菌群檢測(cè)方法，通過(guò)對(duì)應(yīng)用原理、可行度、準(zhǔn)確度與適用范圍等檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)兩種試驗(yàn)方法各自的優(yōu)缺點(diǎn)。在操作的簡(jiǎn)易程度與試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度方面，濾膜法具有更高的優(yōu)勢(shì)，能通過(guò)提升清潔度高的水樣濾過(guò)量而提高測(cè)驗(yàn)的準(zhǔn)確度。然而因?yàn)V膜法所使用的濾膜的局限性，濾膜法并不適合對(duì)過(guò)于渾濁水樣的檢測(cè)，而多管發(fā)酵法具有更廣泛的使用范圍。城鎮(zhèn)排水中污水較多，因而應(yīng)使用多管發(fā)酵法進(jìn)行檢測(cè)和智力，以為人們提供更好的生活環(huán)境。

參考文獻(xiàn)

[1]孫超.水體中大腸桿菌的檢測(cè)分析新方法研究[D].東北大學(xué)，2010（12）.

[2]陳藝.水環(huán)境中大腸菌群檢測(cè)方法的對(duì)比研究[J].環(huán)境保護(hù)與循環(huán)經(jīng)濟(jì)，2008（02）：26-28.

[3]丁程成.歐美水質(zhì)大腸菌群相關(guān)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)探究[J].環(huán)境科技，2010（02）：67-69+74.