HPLC法測(cè)定食品中順丁烯二酸與順丁烯二酸酐總含量

摘要：本實(shí)驗(yàn)建立了淀粉及其制品中順丁烯二酸和順丁烯二酸酐總量的檢測(cè)方法，樣品用乙醇水溶液超聲提取，經(jīng)過(guò)堿解離心以及C18填料凈化，液相色譜檢測(cè)。方法操作簡(jiǎn)便，具有可靠的靈敏度和穩(wěn)定性，適用于食品中順丁烯二酸和順丁烯二酸酐總量的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：液相色譜 淀粉 食品 馬來(lái)酸 順丁烯二酸

中圖分類號(hào)：TS207.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-5336（2014）12-0033-02

順丁烯二酸酐，又名馬來(lái)酸酐，是重要的有機(jī)化工原料，廣泛應(yīng)用于改性淀粉。順丁烯二酸酐遇水即水解為順丁烯二酸，二者均為非食品添加劑，對(duì)狗腎小管有損傷，對(duì)人體細(xì)胞可能有毒性[1-2]。但是順丁烯二酸（酐）加入淀粉后可提高食品口感，延長(zhǎng)保存期，而且價(jià)格低廉，常被不法商家濫用。

我國(guó)大陸地區(qū)目前沒(méi)有檢測(cè)食品中順丁烯二酸（酐）的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，已發(fā)表的順丁烯二酸的檢測(cè)方法有化學(xué)法、液相色譜法等，其中化學(xué)法的檢出限高，但定量不準(zhǔn)確；色譜法主要應(yīng)用于空氣、化工合成產(chǎn)物或單純的方法開(kāi)發(fā)[3-6]，食品中僅有淀粉及淀粉制品中順丁烯二酸（酐）的檢測(cè)[7-9]，其它食品樣品尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)常見(jiàn)淀粉及其制品，對(duì)前處理和儀器方法進(jìn)行了系統(tǒng)研究，建立了適用于食品中順丁烯二酸和順丁烯二酸酐總含量測(cè)定的高效液相色譜分析方法，方法可靠，操作簡(jiǎn)單，便于推廣。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

LC20A高壓液相色譜儀（日本島津公司）：四元泵，具有可變波長(zhǎng)的紫外檢測(cè)器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；

SK-1快速混勻器（常州國(guó)華電器有限公司）；

DL-500A超聲波清洗儀（40KHZ，上海之信儀器有限公司）；

順丁烯二酸標(biāo)準(zhǔn)品（純度大于99%，Sigma公司）；

實(shí)驗(yàn)樣品：小麥淀粉，玉米淀粉，紅薯淀粉，復(fù)合淀粉，紅薯粉絲，魚(yú)丸，關(guān)東煮，方便面等均購(gòu)于市場(chǎng)；

甲醇（色譜級(jí)），磷酸（優(yōu)級(jí)純），無(wú)水乙醇（分析純），國(guó)藥試劑有限公司。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱取順丁烯二酸酐0.0500g，用水溶解定容至100mL容量瓶中，配成500mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4℃冷藏 使用前以5%乙醇水溶液配制成0.1，0.5，5，20，50，100mg/L等系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18 4.6×250 mm 5μm

流動(dòng)相：甲醇/0.1%磷酸溶液=2/98

流速：0.6 mL/min

柱溫：35 ℃

檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm（或214nm）

進(jìn)樣量：20μL

1.4 樣品前處理

不含油脂樣品：取2.50g（精確至0.01 g）于50mL容量瓶，加入30mL乙醇-水（5：95，v：v）混合溶液，渦旋2min，超聲提取10min；加入10.0mL0.5mol/L的KOH溶液，充分混勻后靜置30min；加入1mL5mol/L的鹽酸溶液，混勻（PH3～5即可），去離子水定容；4000r/min 離心5min，取上清液過(guò)0.45μm濾膜，待測(cè)。

含油脂樣品：取2.50 g同上；定容后取2mL上清液入5mL離心管，加0.1g C18填料，混勻后10000 r/min離心5 min，取上清液過(guò)0.45μm濾膜，待測(cè)。

1.5 定量方法

由于順丁烯二酸酐遇水即水解，在提取后實(shí)際測(cè)得的目標(biāo)物為順丁烯二酸，故本方法以順丁烯二酸為標(biāo)準(zhǔn)品采用外標(biāo)法定量，對(duì)食品中的順丁烯二酸和順丁烯二酸酐總含量以順丁烯二酸計(jì)。

2 結(jié)果和討論

2.1 提取劑的選擇

在水中加入一定比例的無(wú)水乙醇時(shí)，由于降低了提取液的極性，提取效果有了較顯著的改善。無(wú)水乙醇的體積分?jǐn)?shù)為5%～40%時(shí)，提取效果無(wú)顯著差異。由于順丁烯二酸為水溶性強(qiáng)極性化合物，所以乙醇體積分?jǐn)?shù)超過(guò)50%時(shí)，色譜峰形逐漸變差，目標(biāo)峰開(kāi)始不對(duì)稱，并形成分叉峰，同時(shí)提取率也開(kāi)始下降，如圖1。綜合考慮，本方法選擇5%乙醇水溶液作為提取劑。

2.2 超聲提取時(shí)間和次數(shù)的影響

以5%乙醇水溶液為提取溶液，比較超聲提取時(shí)間和次數(shù)對(duì)提取效果的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，超聲提取5，10，20，30，60min時(shí)，提取效果無(wú)顯著差異，如圖2。由于順丁烯二酸酐遇水即水解，且在水中溶解度大，所以在提取過(guò)程中，超聲時(shí)間對(duì)提取率的影響不顯著，短時(shí)間內(nèi)可獲得較好的提取效果。為達(dá)到充分提取的目的，本實(shí)驗(yàn)選擇超聲提取10min。

2.3 凈化方法的選擇

提取液直接過(guò)膜上機(jī)，目標(biāo)化合物干擾嚴(yán)重，回收率也不理想；多次調(diào)節(jié)PH則可能費(fèi)工費(fèi)時(shí)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)堿解離心，含油脂樣品則進(jìn)一步通過(guò)C18填料吸附，消除了大部分干擾物質(zhì)，凈化效果比較理想。

2.4 色譜條件的確定

參考GB/T 23296.21-2009，比較甲醇、乙腈不同比例的0.1%磷酸溶液，發(fā)現(xiàn)以甲醇/0.1%磷酸溶液（2/98）為流動(dòng)相，目標(biāo)化合物在Diamonsil C18 4.6×250 mm 5μm色譜柱上峰形對(duì)稱，保留時(shí)間適中，能夠很好地和雜質(zhì)分離。

2.5 線性和檢出限

按照1.2配置順丁烯二酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，以1.3中色譜條件進(jìn)樣后，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為X軸，以峰面積為Y軸建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：Y=68842X+396.85，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。以10倍噪音為定量限；則樣品定量限為2mg/kg。

2.6 回收率和精密度

取不同淀粉及其制品，添加不同濃度的順丁烯二酸，按照實(shí)驗(yàn)方法平行測(cè)定，結(jié)果如表1所示，回收率回收率80%～110%，RSD%在0.148%～7.83%之間。

3 結(jié)語(yǔ)

本實(shí)驗(yàn)建立了淀粉及其制品中順丁烯二酸和順丁烯二酸酐總量的檢測(cè)方法，樣品用乙醇水溶液超聲提取，經(jīng)過(guò)堿解離心以及C18填料凈化，液相色譜檢測(cè)。方法操作簡(jiǎn)便，具有可靠的靈敏度和穩(wěn)定性，適用于食品中順丁烯二酸和順丁烯二酸酐總量的測(cè)定。

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