HPLC法測(cè)定新生化顆粒中益母草堿的含量

摘要：

目的：建立新生化顆粒中鹽酸益母草堿含量測(cè)定的方法。方法：色譜柱為Agilent Eclipse XDB C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；以乙腈-0.4%辛烷磺酸鈉的0.1%磷酸溶液（26：74）為流動(dòng)相；流速1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)277nm；柱溫25℃。結(jié)果：鹽酸益母草堿在5.4～86.4μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系（r=0.9995），加樣回收率為98.80%，RSD為0.72（n=6）；結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于新生化顆粒的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；新生化顆粒；益母草堿

【中圖分類(lèi)號(hào)】

R453 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1002-3763（2014）08-0046-02

新生化顆粒由當(dāng)歸、川芎、桃仁、益母草等組成，具有活血、去淤、止痛的功效。處方中益母草其主要有效成分為丁香酸、益母草堿等。益母草堿具有活血化淤、利水消腫的作用。筆者采用高效液相色譜法測(cè)定該成分的含量[1-4]。該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于新生化顆粒的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀；Sartorius-ME235S電子天平；鹽酸益母草堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)111823-201202，含量94.7%）；新生化顆粒（云南白藥集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)分別為ZLB1301，ZLB1302，ZLB1304）。乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：

色譜柱：Agilent Eclipse XDB C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.4%辛烷磺酸鈉的0.1%磷酸溶液（26：74）；流速1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)277nm；柱溫25℃。進(jìn)樣量：10μL。

2.2 溶液制備：

取鹽酸益母草堿對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加70%乙醇制成每1ml含30μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。 取本品，研細(xì)，精密稱(chēng)取約4.0g，置錐形瓶中，精密加入70%乙醇100ml，稱(chēng)定重量，加熱回流2小時(shí)，放冷，再稱(chēng)定重量，用 70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按新生化顆粒劑制備工藝，制備缺益母草的陰性樣品，照供品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察：

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)取22項(xiàng)下3種溶液，擬定的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液在與對(duì)照品溶液色譜峰相應(yīng)保留時(shí)間位置上未出現(xiàn)吸收峰，說(shuō)明處方中其他成分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

圖1高效液相色譜圖（1）陰性對(duì)照品溶液（2）對(duì)照品溶液（3）供試品溶液

線(xiàn)性關(guān)系考察：精密稱(chēng)取鹽酸益母草堿對(duì)照品（含量94.7%計(jì)）10.8mg，70%乙醇溶液定容于100mL容量瓶中，得質(zhì)量濃度約為108μg/ml作為母液，分別精密吸取母液0.5；1.0；2.0；4.0；8.0ml；分別定容于10ml的容量瓶中，得質(zhì)量濃度分別為5.4；10.8；21.6；43.2；86.4μg/ml鹽酸益母草對(duì)照品溶液，分別取上述溶液10μl注入液相色譜儀，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x），峰面積為縱坐標(biāo)（y），線(xiàn)性回歸得回歸方程為：y=17x+20.23，r=0.9995，表明鹽酸益母草堿質(zhì)量濃度在5.4～86.4μg/ml范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取21制備的對(duì)照品溶液，按23色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果峰面積的RSD為0.71%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱(chēng)取同一批號(hào)樣品（批號(hào)為ZLB1304），按供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液，分別測(cè)定，結(jié)果峰面積的RSD為0.97%（n=6），表明方法重現(xiàn)性好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，于制備后0，2，4，8，12，24h進(jìn)樣。結(jié)果峰面積的RSD為1.17%、（n=6），表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（批號(hào)ZLB1304）6份，精密加入鹽酸益母草堿對(duì)照品（濃度為0.108mg/ml）適量，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果鹽酸益母草堿平均回收率為98.80%，RSD%為0.72%；結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 鹽酸益母草堿加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）

3 討論

照《中國(guó)藥典》2010年版一部“益母草”項(xiàng)下的含量測(cè)定方法，故選擇用70%乙醇加熱回流提取，為保證被測(cè)成分的完全提取，實(shí)驗(yàn)中考察了回流1、2、3小時(shí)不同提取時(shí)間對(duì)提取效率的影響，結(jié)果表明回流2小時(shí)后供試品中鹽酸益母草堿的含量基本穩(wěn)定不變，故將提取時(shí)間定為加熱回流2小時(shí)。曾試用水、70%甲醇、70%乙醇提取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用70%乙醇作為提取溶劑效果最優(yōu)。

本實(shí)驗(yàn)采用的處理方法簡(jiǎn)便易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，專(zhuān)屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

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