HPLC法測定清胰利膽顆粒中丹皮酚的含量

摘要：

目的：建立HPLC法測定清胰利膽顆粒中丹皮酚的分析方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱Agilent TC-C18（4.6×250mm，5μm），流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（30：70），流速為1mL·min^-1，柱溫為30℃；檢測波長：284nm。進樣量：10μL。結果：方法學考察表明，丹皮酚進樣量在 0.02278～0.3417 μg范圍內具有良好的線性關系（r=0.9999），平均回收率為 100.24%，RSD為 0.59 %（n =7）。 結論：該方法準確、簡便、快速，可用于清胰利膽顆粒中丹皮酚的含量測定方法。

關鍵詞：丹皮酚； HPLC； 含量測定

Content determination of Paeonol qingyilidan particles by HPLC

Li Hongxia （Guangxi Hechi Institute for Food and Drug Control Guangxi Hechi 547000）

Abstract：

Objective： To analysis method for determination of Paeonol qingyilidan particles in HPLC method. Methods： The chromatographic column was Agilent TC-C18（4.6×250mm，5μ m ）， mobile phase was -0.1% phosphoric acid solution （ 30：70 ）， the flow rate was 1mL·min^-1， column temperature was 30 ℃； the detection wavelength： 284nm. Sample size： 10μL.Results： the methodological study showed that， paeonol injection has a good linear relationship in the range of 0.02278～0.3417μg （ r = 0.9999 ）， the average recovery rate was100.24%， RSD was 0.59%（ n =7）Conclusion：. the method is accurate， simple， rapid method for the determination of content， can be used for paeonol qingyilidan particles in.

Key words：Paeonol； HPLC； Content determination

【中圖分類號】

R194 【文獻標識碼】B 【文章編號】1002-3763（2014）08-0007-01

1 引言

清胰利膽顆粒由牡蠣、姜黃、金銀花、柴胡、大黃、牡丹皮等八味藥組成。該藥品收載于《中藥成方制劑》第四冊，具有行氣解郁，活血上痛，舒肝利膽，解毒通便。用于急性胰腺炎，急性胃炎等癥^[1]。處方中牡丹皮為毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮。具有清熱涼血，活血化瘀等功效，主要含有酚酸類成分和具有籠狀結構的單萜類成分等^[2]。清胰利膽顆粒質量標準中尚未收載含量測定方法，為進一步完善其質量標準，有效地控制其質量，參考有關文獻，建立了HPLC對清胰利膽顆粒中丹皮酚含量測定方法。實驗結果表明，該方法快速、簡便、準確，可作為清胰利膽顆粒含量測定方法。

2 材料、儀器與試藥

2.1 材料：清胰利膽顆粒（吉林巨仁堂藥業(yè)股份有限公司，批號：110102）；丹皮酚對照品 （中國藥品生物制品檢定所，批號：110708-200505）。

2.2 儀器： Waters2487-1525-717高效液相色譜儀；超聲波清洗儀

2.3 試藥：乙腈為色譜純；水為純凈水；其他試劑、試藥均為分析純。

3 方法與結果

3.1 色譜條件： 色譜柱：Agilent TC-C18（4.6×250mm，5μm）；流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（30：70）^[3]；流速為1mL·min^-1；柱溫為30℃；檢測波長：284nm。進樣量：10μL。

3.2 對照品溶液的制備： 精密稱取11.39mg丹皮酚對照品，用甲醇溶液先定容至25ml量瓶中，再從中吸取5mL至100mL量瓶，用甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液（對照品濃度為：22.87ug·mL^-1）。

3.3 供試品溶液的制備： 供試品溶液的配制：精密稱取4g樣品置25mL量瓶中，加甲醇至容量的2/3，超聲處理30min，取出、放冷，用甲醇稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.4 陰性對照溶液的制備： 制備不含丹皮酚的樣品，同法制成陰性對照品溶液。

3.5 測定：分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，記錄峰面積，用面積歸一法計算含量，即得。

3.6 系統(tǒng)適用性試驗： 在上述色譜條件下，丹皮酚的保留時間大約為12分鐘，理論塔板數(shù)按丹皮酚峰計不低于5000，樣品與對照品在同一保留時間有相同的波峰出現(xiàn)，而陰性對照溶液則無相應的峰，證明陰性對照品不干擾測定，含量測定專屬（見圖1）。

〖XCC4.TIF〗

圖1 清胰利膽顆粒HPLC圖

a.丹皮酚對照品； b.清胰利膽顆粒樣品； c.陰性對照

3.7 線性關系考察：精密吸取3.2項下對照品溶液1、2、3、5、7、15μl，各注入液相色譜儀，分別測定峰面積積分值，以峰面積為縱坐標、丹皮酚的進樣量（μg）為橫坐標，得回歸方程為y=4500000x–8979.7（r=0.9999）。結果表明，丹皮酚進樣量在0.02287～0.34305μg范圍內，與峰面積呈良好線性關系。結果見表1和圖2。

5 結論與討論

5.1 結論：測定結果表明，本法回收率好，精密度、重現(xiàn)性高。樣品處理簡便，分析快速的優(yōu)點，可用作進一步完善清胰利膽顆粒的質量控制指標。

5.2 討論

5.2.1 提取時間優(yōu)化：取4份本品研細約4.0g，分別精密稱定，置25ml量瓶中，加入甲醇至容量的2/3，分別超聲提取15、30、45、60min，按上述供試品溶液的制備方法和色譜條件測定丹皮酚含量分別為22.37、39.54、36.92、33.78μg·g^-1。結果超聲提取30min時含量較高，故選擇用甲醇（超聲提取30min）為最佳提取條件。

5.2.2 測定波長的選擇：取丹皮酚對照品溶液，丹皮酚在200～300nm波長范圍進行掃描，結果丹皮酚在284nm處有最大吸收，因此確定檢測波長為284nm。

5.2.3 流動相的選擇：采用乙腈-0.1%磷酸溶液系統(tǒng)為流動相，調整不同的比例，結果顯示：乙腈-0.1%磷酸溶液的比例為30∶70時，主峰形較對稱，分離效果好，不拖尾，故選此比例為流動相。

參考文獻

[1]中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第四冊[S].衛(wèi)生部藥典委員.1991：186.

[2]中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典2010版第一部[S].北京：化學工業(yè)出版社，2010：160.

[3]華劍，武超.HPLC法測定桂枝茯苓膠囊中肉桂酸、桂皮醛和丹皮酚的含量[J].安徽醫(yī)藥，2006，10（1）：1009-6469.