M2型抗線粒體抗體在原發(fā)性膽汁性肝硬化中的應(yīng)用研究

摘要：目的： 探討M2型抗線粒體抗體診斷原發(fā)性膽汁性肝硬化的臨床價(jià)值。 方法 回顧分析48例原發(fā)性膽汁性肝硬化（觀察組）和40例其他原因?qū)е赂斡不▽?duì)照組）患者血清M2型抗線粒體抗體、堿性磷酸酶（ALP）及氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）檢測(cè)結(jié)果。 結(jié)果 觀察組患者血清M2型抗線粒體抗體檢測(cè)陽(yáng)性率91.67%；高于對(duì)照組的2.50%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。血清M2型抗線粒體抗體陽(yáng)性與陰性患者ALP及GGT水平相似，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 結(jié)論 原發(fā)性膽汁性肝硬化患者血清M2型抗線粒體抗體陽(yáng)性率較高，有助于早期診斷，為臨床治療提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞： 原發(fā)性膽汁性肝硬化；抗線粒體抗體； M2型

【中圖分類號(hào)】R575.22 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1002-3763（2014）04-0065-01

近年來，隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的飛速發(fā)展，敏感檢測(cè)方法相繼開展，無癥狀、無黃疸的原發(fā)性膽汁肝硬化早期診斷逐漸增多。文獻(xiàn)報(bào)道[1]，抗線粒體抗體與原發(fā)性膽汁性肝硬化有關(guān)，高滴度的抗線粒體抗體是其主要的血清學(xué)指標(biāo)，其中M2亞型具有特異性。本研究回顧性分析68例原發(fā)性膽汁性肝硬化患者M(jìn)2型抗線粒體抗體檢測(cè)結(jié)果，報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照2009年美國(guó)肝病學(xué)會(huì)原發(fā)性膽汁性肝硬化指南中的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]：①存在膽汁淤積癥的生化學(xué)證據(jù)，主要是堿性磷酸酶（ALP）升高；②血清抗線粒體抗體陽(yáng)性；③非化膿性破壞性膽管炎及小葉間膽管破壞的組織學(xué)證據(jù)。如果符合上述三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)中的兩項(xiàng)即可診斷原發(fā)性膽汁性肝硬化。

1.2臨床資料 2010年1月～2014年1月，選取在我院診治的原發(fā)性膽汁性肝硬化患者48例（觀察組），其中男19例、女29例，年齡23～57歲，平均（45.57±8.19）歲。主要臨床表現(xiàn)：黃疸31例（64.58%）、疲乏26例（54.17%）、納差24例（50.00%）和皮膚瘙癢 19例（39.58%）。選擇同期在我院治療的其他原因?qū)е碌母斡不üＷ栊渣S疸及惡性腫瘤者除外）患者40例（對(duì)照組），其中乙肝肝硬化27例、酒精性肝硬化13例，男22例、女18例，年齡29～59歲，平均（46.90±8.43）歲。主要臨床表現(xiàn)：黃疸24例（60.00%）、疲乏20例（50.00%）、納差17例（42.50%）和皮膚瘙癢 12例（30.00%）。兩組患者年齡、性別及臨床表現(xiàn)相似，差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.3檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.3.1樣本收集 患者均于空腹清晨8：00時(shí)抽取靜脈血5 ml置入EDTA抗凝管中，常溫下3000 r/min離心10 min，分離血清保存于-70℃冰箱集中待測(cè)。

1.3.1生化指標(biāo) ALP及氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）采用全自動(dòng)生化分析儀（日立7600—020）檢測(cè)。

1.3.2M2型抗線粒體抗體 M2型抗線粒體抗體酶免疫試劑盒由德國(guó)歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司提供。操作步驟：①加樣。用100μL樣品稀釋液按1：200比例稀釋血清，將不同濃度的M2型抗線粒體抗體標(biāo)準(zhǔn)品及血清依次加入到已包被M2抗原的微孔中；在微振蕩器上進(jìn)行振蕩混勻，室溫（18℃～24℃）孵育30 min，應(yīng)用自動(dòng)洗板機(jī)洗板3次，拍干。②酶結(jié)合物反應(yīng)。將50μL已稀釋的堿性磷酸酶標(biāo)記的抗人IgG加入相應(yīng)微孔中，室溫條件下再次溫育30 min及洗滌、拍干。③顯色：各微孔依次加入50 μL底物液室溫下反應(yīng)10 min，洗板、風(fēng)干。④結(jié)果判斷：M2抗原包被區(qū)出現(xiàn)深藍(lán)或紫色條帶為陽(yáng)性，無顏色為陰性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理，計(jì)數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn)，計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1兩組患者血清M2型抗線粒體抗體檢測(cè)結(jié)果比較 觀察組患者血清M2型抗線粒體抗體檢測(cè)陽(yáng)性44例，陽(yáng)性率91.67%，陰性4例，陰性率8.33%；對(duì)照組患者血清M2型抗線粒體抗體檢測(cè)陽(yáng)性1例，陽(yáng)性率2.50%，陰性39例，陰性率97.5%；差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2血清M2型抗線粒體抗體陽(yáng)性與陰性患者生化指標(biāo)比較 M2陽(yáng)性組ALP為 256.91±34.75 U/L，GGT 274.33±38.41 U/L， M2陰性組ALP為 242.65±33.93 U/L， GGT 268.97±35.80 U/L. 血清M2型抗線粒體抗體陽(yáng)性與陰性患者ALP及GGT水平相似，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）

3.討論

原發(fā)性膽汁性肝硬化發(fā)病與自身免疫、病原微生物感染、接觸化學(xué)物品、遺傳和家庭因素有關(guān)，臨床主要表現(xiàn)為皮膚瘙癢、進(jìn)行性黃疸、黃色瘤、肝脾腫大和后期出現(xiàn)門脈高壓癥，好發(fā)于中老年女性[3]。本研究顯示男：女為0.66：1，平均年齡（45.57±8.19）歲。原發(fā)性膽汁性肝硬化目前尚無有效的治療方法，所以早期診斷、及時(shí)治療對(duì)于改善患者的預(yù)后至關(guān)重要?？咕€粒體抗體共有9各亞型，與原發(fā)性膽汁性肝硬化相關(guān)的有M2、M4、M8及M9亞型。M2是線粒體內(nèi)膜抗體，可與多個(gè)抗原發(fā)生反應(yīng)，最主要是與丙酮酸脫氧酶E2亞基，其次則是2-氧戊二酸脫氫酶復(fù)合物與2-氧戊二酸脫氫酶復(fù)合體的E2亞基。中M2診斷原發(fā)性膽汁性肝硬化的特異性抗體，主要原因：①靈敏度及特異度均達(dá)到95%以上[4]。②在疾病早期已經(jīng)出現(xiàn)，甚至在無癥狀的體檢者中可出現(xiàn)，多年后大多數(shù)發(fā)展為原發(fā)性膽汁性肝硬化患者；③動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)M2抗原可誘導(dǎo)建立小鼠原發(fā)性膽汁性肝硬化模型，其生化與病理特征和人類相似， 進(jìn)一步證實(shí)了M2在原發(fā)性膽汁性肝硬化發(fā)病中的重要作用[5]。本研究顯示，48例原發(fā)性膽汁性肝硬化患者血清M2型抗線粒體抗體陽(yáng)性率高達(dá)91.67%，進(jìn)一步證實(shí)了上述結(jié)論。國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道[6]，5011名健康體檢者，8例檢出血清M2型抗線粒體抗體陽(yáng)性，其中5例符合美國(guó)肝病學(xué)會(huì)推薦的原發(fā)性膽汁性肝硬化診斷標(biāo)準(zhǔn)，提示無癥狀者在我國(guó)也不少見，也說明懷疑該病者應(yīng)早做M2亞型篩查。許峰[7]報(bào)道采用ELISA法檢測(cè)原發(fā)性膽汁性肝硬化患者血清M2型抗線粒體抗體水平，以25 RU/mL（95%上限為25 RU/mL）為臨界值，其靈敏度為95.2%，特異度為97.4%，診斷符合率達(dá)95.6%，陰性預(yù)測(cè)值98.7%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值 90.9%，對(duì)其診斷原發(fā)性膽汁性肝硬化進(jìn)一步量化。本研究還發(fā)現(xiàn)，M2型抗線粒體抗體無論是陰性還是陽(yáng)性患者，其肝臟均具有以下病理改變：①膽管改變明顯，以小膽管最具特征性，膽管周圍見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；②匯管區(qū)細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象明顯，甚至形成淋巴濾泡；③肝細(xì)胞改變相對(duì)較輕，缺乏特異性。所以，對(duì)M2型抗線粒體抗體陰性者，病理學(xué)檢查十分重要。ALP及GGT升高是原發(fā)性膽汁性肝硬化患者肝功能損害的特征性改變。本研究48例患者肝功能ALP及GGT均為陽(yáng)性，較正常值高4～6倍。并且M2型抗線粒體抗體陰性及陽(yáng)性患者，ALP及GGT水平無差異。

綜上所述，原發(fā)性膽汁性肝硬化早期臨床癥狀輕微且無特異性，極易誤診為病毒性肝炎或肝炎性肝硬化，臨床醫(yī)師有必要加強(qiáng)對(duì)原發(fā)性膽汁性肝硬化及M2型抗線粒體抗體的認(rèn)識(shí)，將有助于患者獲得早期診斷和有效治療，對(duì)患者預(yù)后具有十分重要的意義。

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[7]許峰.血清抗線粒體抗體M2亞型檢測(cè)在原發(fā)性膽汁性肝硬化臨床診斷中的價(jià)值[J].診斷學(xué)理論與實(shí)踐， 2013，12（5）：556-558.