關(guān)于鹽酸小檗堿膠囊含量測定中濾紙吸附的影響研究

摘要：目的： 通過一系列的試驗證明鹽酸小檗堿膠囊含量測定中使用濾紙進(jìn)行過濾對檢測結(jié)果的影響。 方法： 通過過濾不同體積的樣品液進(jìn)行試驗，證明濾過的體積越大，越能減少因濾紙吸附所帶來的影響。 結(jié)論： 檢測結(jié)果表明，濾紙對鹽酸小檗堿的吸附嚴(yán)重影響含量測定結(jié)果的真實性，使含量測定結(jié)果偏低。

關(guān)鍵詞： 鹽酸小檗堿膠囊；含量測定；濾紙吸附

【中圖分類號】R927.2 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】1002-3763（2014）04-0050-02

小檗堿又名黃連素，是黃連、黃柏等級植物中含有的一種生物堿，也可以合成得到，主要用于腸道感染的治療。主要用于治療胃腸炎、細(xì)菌性痢疾等腸道感染、眼結(jié)膜炎、化膿性中耳炎等有效。還發(fā)現(xiàn)本品有阻斷 α-受體，抗心律失常作用。小檗堿的鹽酸鹽（俗稱鹽酸黃連素）已廣泛用于治療胃腸炎、細(xì)菌性痢疾等，對肺結(jié)核、猩紅熱、急性扁桃腺炎和呼吸道感染也有一定療效。

鹽酸小檗堿膠囊在《中國藥典》1995年版[1]、2000年版[2]、2005年版[3]和2010年版[4]均有收載，1995年版和2000年版的是采用重鉻酸鉀滴定液進(jìn)行測定，自2005年版起修訂為高效液相色譜法，2010年版所載的方法大體與2005年版所載的方法一致，只作了部份修改，把“用濾膜（0.45μm）過濾，棄去初濾液約8ml，精密量取續(xù)濾液2ml置25ml量瓶中[2]”修訂為“棄去初濾液約8ml，精密量取續(xù)濾液2ml置25ml量瓶中[3]”。在沒有明確規(guī)定過濾操作所采用的材質(zhì)的情況下，我們一般會使用濾紙進(jìn)行過濾，這也是我這篇文章想要說明的主要問題，同時“棄去初濾液約8ml”，這一點可能很多人會把它忽視掉，一般會理解為8ml以上或更多，但我司就曾出現(xiàn)這種情況，被抽檢該品種，抽檢的檢驗所堅持按照藥典所描述的“棄去初濾液約8ml”進(jìn)行檢驗，但結(jié)果確是偏低甚至是不合格，為了證明是濾紙吸附造成的不合格，我司做了大量的實驗去論證。

方案設(shè)計如下：嚴(yán)格按照藥典所描述的“棄去初濾液約8ml”，那為了證明濾紙是有吸附的，或者說如何消除濾紙對主成份的吸附，我們將采用續(xù)濾不同量的方法進(jìn)行論證，在初濾量相同的情況下，只有續(xù)濾更多的溶液才會減少濾紙對主成份吸附的影響。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC2010-C高效液相色譜儀，色譜柱：迪馬C18；梅特勒AB135-S電子天平，定性濾紙：杭州新華紙業(yè)有限公司

1.2試藥

鹽酸小檗堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110713-201212，分子式：C20H18ClNO4，分子量：371，純度86.7%）；水為純化水；鹽酸小檗堿膠囊（規(guī)格0.1g，批號120901，均為我公司所生產(chǎn)）

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：磷酸鹽緩沖液[0.05mol/l磷酸二氫鉀溶液和0.05mol/l庚烷磺酸鈉溶液（1：1），含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0]-乙腈（60：40）；檢測長：263nm；流速：1.0ml/min；理論板數(shù)：按鹽酸小檗堿峰計算不低于3000，鹽酸小檗堿峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

2.2 含量測定方法[4]

取裝量差異項下內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量（約相當(dāng)于鹽酸小檗堿40mg0，置100ml量瓶中，加沸水適量，使鹽酸小檗堿溶解，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液8ml，精密量取續(xù)濾液2ml，置25ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，另取鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定，用沸水溶解，放冷，用水定量稀釋制成每1ml約含32μg的溶液，同法測定，按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。

3.3 本實驗方案的設(shè)計

由三位檢驗員對該批品進(jìn)行測定。在棄去初濾液8ml是固定的情況下，如何才能減少或消除濾紙對主成份的吸附致使含量偏低的影響，我們將以過濾不同體積的供試品來進(jìn)行比較，同時分取10ml離心后取上清液進(jìn)行稀釋，同法測定。結(jié)果見表1。

3 討論

結(jié)果顯示，過濾不同體積的供試品，含量數(shù)據(jù)程一定的梯度增長；而離心處理的結(jié)果明顯比濾紙過濾高2.6%-5.3%，可見使用濾紙過濾對主成份有較大的吸附作用，而且過濾的量越大，越能減少濾紙的吸附影響。

鹽酸小檗堿膠囊含量測定法中，《中國藥典》2010年版修訂時與2005年版最大的區(qū)別就是去掉了“用濾膜（0.45μm）過濾”這一操作，在孔愛英[5]的研究中發(fā)現(xiàn)，使用濾膜進(jìn)行過濾，雖然對產(chǎn)品的含量影響不大，但有檢測過該產(chǎn)品的人員不易發(fā)現(xiàn)，實際操作中，使用濾膜棄去8ml的初濾液是很難做到的。

使用濾紙進(jìn)行過濾操作，雖然過濾的體積越多，越能減少吸附的影響，但要全部過濾完也是很難做到的，同時在實驗中我們發(fā)現(xiàn)，即使是相同品牌相同批號的濾紙，過濾的速度也不盡相同，經(jīng)常能過濾80ml已經(jīng)是極限，而且很費時，當(dāng)然也有能完全濾完的。

在供試品溶液的制備過程中，使用沸水溶解，沸水的溫度和振搖的方式對含量的測定也存在一定的局限性，對含量的真實結(jié)果也有一定的影響，建議未來方法的修訂可更多的考濾供試品溶液制備的方法。

參考文獻(xiàn)：

[1]國家藥典委員會. 《中國藥典》2000年版. 二部[S]. 1995：569.

[2]國家藥典委員會. 《中國藥典》2000年版. 二部[S]. 2000：550.

[3]國家藥典委員會. 《中國藥典》2005年版. 二部[S]. 2005：466.

[4]國家藥典委員會. 《中國藥典》2010年版. 二部[S]. 2010：640.

[5]孔愛英，陶勝源. 有關(guān)HPLC法測定鹽酸小檗堿征含量的問題探討[J]. 中國藥品標(biāo)準(zhǔn)2011年第12卷第2期： 83-86