高效液相色譜法測定降逆化積口服液中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量

摘要：目的： 建立高效液相色譜法測定降逆化積口服液中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量。 方法： 色譜柱：Phenomenex C18柱，流動(dòng)相：乙腈―0.085%磷酸溶液（15：85），流速為1.0mL·min-1，柱溫：室溫，檢測波長：225nm。 結(jié)果： 木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯進(jìn)樣量分別在1.581μg·mL-1～15.81μg·mL-1（r=0.9998），2.25μg·mL-1～22.5μg·mL-1 （r=0.9996），范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率（n=9）分別為98.78%、98.81%、。 結(jié)論： 建立了HPLC測定木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的含量，提供了更好的控制該藥質(zhì)量的方法。

關(guān)鍵詞： 高效液相色譜法 ；降逆化積口服液；木香烴內(nèi)酯

【中圖分類號】R286 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【文章編號】1002-3763（2014）04-0013-02

Simultaneous Determination of the Contents of Costunolide and Dehydrocostuslactone in JiangNiHuaJi Oral liquid by HPLC

Abstract： Objective ： To establish an HPLC method for the Simultaneous determination of the Contents of Costunolide and Dehydrocostuslactone in JiangNiHuaJi Oral liquid Methods The column C18 was used with CAN-0.085%H3PO4 mobile phase， the flow rate was 1.0ml.min-1， the column temperature was Room Temperature and the detection wavelength was at 225 nm. Results The calibration curves were linear within the range of 1.581μg·mL-1～15.81μg·mL-1（r=0.9998）fo Costunolide ； 2.25μg·mL-1～22.5μg·mL-1 （r=0.9996）for Dehydrocostuslactone； The average recovery（n=9）of the three components in JiangNiHuaJi Oral liquid were98.78% and 98.81% .Conclusion The mothod is specific， accurate and reproducible， and it can be used for the quality control.

Key words： HPLC； JiangNiHuaJi Oral liquid； Costunolide

降逆化積口服液是由木香、枳殼、檳榔、陳皮等七味藥材制成的中藥制劑。具有順氣降逆，消積止痛的功效。主用于中老年氣滯、食積證、癥見脘腹脹滿、腹痛、便秘及手術(shù)后腹脹等癥。原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為《醫(yī)院自制制劑注冊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》，無主藥木香的含量測定，本實(shí)驗(yàn)參照中國藥典2010年版一部[1]采用高效液相色譜法同時(shí)測定處方君藥木香中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量，樣品不需要特殊處理，具有簡便、準(zhǔn)確、無干擾的特點(diǎn)。

1 儀器與試藥

日本島津LC-20ATVP高效液相色譜儀；CBL9960A超聲波清洗器。對照品：木香烴內(nèi)酯（批號：111524-200503）、去氫木香內(nèi)酯（批號：111525-200505），降逆化積口服液（批號：130220，130511，130925，140218）；乙腈、磷酸為色譜純，其它試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：

色譜柱：Phenomenex C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈―0.085%磷酸溶液（15：85）；流速：1.0mL·min-1；柱溫：室溫；檢測波長：225nm；進(jìn)樣量：10μL。按木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯計(jì)算，理論板數(shù)均不低于2000[2]。

2.2 對照品溶液制備：

精密稱取經(jīng)減壓干燥（真空度0.075MPa，溫度20℃，干燥劑五氧化二磷）24h的木香烴內(nèi)酯15.81mg，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成木香烴內(nèi)酯質(zhì)量濃度為158.1μg·mL-1對照品溶液①；另精密稱取經(jīng)減壓干燥（真空度0.075MPa，溫度20℃，干燥劑五氧化二磷）24h的去氫木香內(nèi)酯對照品11.25mg，置50mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成去氫木香內(nèi)酯質(zhì)量濃度為225.0μg·mL-1混合對照品溶液②[3]。分別精密量取上述對照品溶液①②各5ml，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成木香烴內(nèi)酯質(zhì)量濃度為15.81μg·mL-1 ，去氫木香內(nèi)酯質(zhì)量濃度為22.5μg·mL-1對照品混合溶液③。

2.3 供試品溶液制備：

精密量取本品5ml，置25mL容量瓶中，加甲醇適量，分2次超聲處理（功率250W，頻率33kHz），每次時(shí)間為20min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[4]。

2.4 陰性對照溶液的制備：

取缺木香的陰性制劑適量（約相當(dāng)于供試品的量），按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。

2.5 線性關(guān)系考察：

精密吸取上述對照品混合溶液③1.0、2.0、4.0、6.0、8.0，10.0mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，各取 10μL分別注入液相色譜儀測定，記錄峰面積，以峰面積為縱座標(biāo)，以進(jìn)樣量為橫座標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表1。

2.6 精密度試驗(yàn)：

按2.1項(xiàng)下的色譜條件，用同一供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μL，分別測得各次峰面積。結(jié)果木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯RSD值分別為0.84%，0.80%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)：

取同一對照品混合溶液在0，2，4，8，10，12，15， 18， 24h分別進(jìn)樣10μL，結(jié)果6次進(jìn)樣木香烴內(nèi)酯峰面積的RSD為0.90%；去氫木香內(nèi)酯峰面積的RSD為0.83%，結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.8 陰性對照實(shí)驗(yàn)：

取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μL，按2.1項(xiàng)下的色譜條件分別進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，陰性對照溶液對測定結(jié)果無干擾。見圖1C。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)：

取同一批樣品（批號：130925），按2.3項(xiàng)下的供試品溶液制備方法，平行制備6份，依法測定，木香烴內(nèi)酯含量均值為28.2μg·ml-1，RSD=0.84%；去氫木香內(nèi)酯含量均值為47.8μg·ml-1，RSD=0.93%，結(jié)果表明該方法的重復(fù)性好。

2.10 回收試驗(yàn)：

取本品（批號：130925，含量：木香烴內(nèi)酯28.2μg·ml-1；去氫木香內(nèi)酯47.8μg·ml-1）5ml，共9份，置25mL容量瓶中，分別精密加入濃度為158.1μg·mL-1的木香烴內(nèi)酯對照品溶液①、225.0μg·mL-1去氫木香內(nèi)酯對照品溶液②0.8，0.8，0.8，1.0，1.0，1.0，1.2，1.2，1.2mL，加入甲醇適量，分兩次超聲處理，每次20min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取濾液按2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行含量測定并計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

2.11 樣品的測定：

取4批樣品，按2.3項(xiàng)下的供試品溶液制備方法制備，精密吸取10μL，注入液相色譜儀測定，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的含量（見表3）。

表3 樣品含量測定結(jié)果表（mg·片-1，n=3）

3 討論

流動(dòng)相的優(yōu)化 在研究試驗(yàn)過程中以甲醇—水（25：75）為流動(dòng)相系統(tǒng)時(shí)，發(fā)現(xiàn)色譜峰出峰時(shí)間長，柱效低，分離效果差且色譜峰拖尾，改用乙腈—0.085%磷酸溶液（15：85）系統(tǒng)時(shí)出峰時(shí)間適中，色譜峰較尖銳，上述問題得到改善，柱效及分離度均達(dá)到要求。

本試驗(yàn)建立的測定含量的方法可有效控制降逆化積口服液的產(chǎn)品質(zhì)量，具有簡便、靈敏、準(zhǔn)確且專屬性較強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，對制劑質(zhì)量進(jìn)行更好的控制，具一定的實(shí)際意義。

參考文獻(xiàn)：

[1]中國藥典2005年版.（一部）[S] 2005：附錄57.

[2]中國藥品生物制品檢定所.中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社， 2005： 79-95.

[3]劉曉哲.多波長RP-HPLC法同法測定肥兒丸中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、去氫二異丁香酚的含量[J].中成藥，2014， 36（1） ： 98-102

[4]包桂花，包同力噶.高效液相色譜法測定蒙藥壯西六味散中中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2013，33（22）：1900-1903.