苦參蒼術(shù)口服液急性毒性研究

高艷艷　周德剛　高富紅

摘 要：為了考察苦參蒼術(shù)口服液的安全性，按《獸藥注冊資料匯編》的要求，選用小白鼠進(jìn)行了急性毒性試驗。結(jié)果顯示，苦參蒼術(shù)口服液灌胃給藥的LD50為20.51 mL/kg，相當(dāng)于生藥量68.91 mL/kg，可判斷苦參蒼術(shù)口服液為小毒。95%可信限（可信區(qū)間）范圍為16.37～25.90 mL/kg，相當(dāng)于禽臨床用量的27.3～43.2倍，說明苦參蒼術(shù)口服液臨床使用安全。

關(guān)鍵詞：苦參蒼術(shù)口服液；急性毒性

苦參蒼術(shù)口服液是洛陽惠中獸藥有限公司依托“十一五”國家科技支撐計劃項目“中獸藥現(xiàn)代化技術(shù)研究與開發(fā)”研制出的三類新獸藥，農(nóng)業(yè)部于2012年3月26日頒發(fā)新獸藥證書，證書號：（2012）新獸藥證字11號。它由茅蒼術(shù)、苦參按一定配比制成，具有較強的抗菌作用，對畜禽大腸桿菌等細(xì)菌病感染有很好的療效，并能抑制耐藥菌株的產(chǎn)生。為了考察其臨床安全性，本試驗通過小鼠灌胃給藥，觀察苦參蒼術(shù)口服液的急性毒性，評價其安全性，為臨床用藥提供指導(dǎo)。

1 試驗材料

1.1 供試藥品 苦參蒼術(shù)口服液：批號20080801，規(guī)格：100 mL∶366 g生藥，洛陽惠中獸藥有限公司。

1.2 受試動物 健康未交配的昆明種小鼠，體重18～22 g，雌雄各半，購自河南省實驗動物研究中心，許可證號：SYXK（豫）2005-0012。體重20±2 g。試驗前小鼠雌雄分籠飼養(yǎng)，入舍后觀察3 d使其適應(yīng)環(huán)境。

2 試驗方法

2.1 預(yù)試驗

共設(shè)5個劑量組，每組4只動物（雌雄各半），5個組分別按40 mL/kg·bw、20 mL/kg·bw、10 mL/kg·bw、5 mL/kg·bw、2.5 mL/kg·bw灌胃苦參蒼術(shù)口服液，相當(dāng)于生藥量146.4 g、83.2 g、46.7 g、23.4 g、11.7 g，灌胃前動物禁食12 h，自由飲水。

根據(jù)給藥劑量將供試藥物進(jìn)行稀釋，稀釋后各組藥液濃度與原液的比為1∶2、1∶4、1∶8、1∶16，各組每20 g體重灌胃0.4 mL/次，1 d2次，給藥后觀察各組動物的發(fā)病及死亡情況。具體給藥情況見表1。得出100%死亡與0%死亡的劑量分別為40 mL/kg和10 mL/kg。

2.2 正式試驗

2.2.1 給藥方式

經(jīng)口急性試驗，給藥前一天從20：00至次日8：00禁食，自由飲水，各組灌胃0.4 mL/次，1 d2次，總劑量作為1 d劑量。

2.2.2 給藥劑量與分組

根據(jù)表2顯示結(jié)果，給藥劑量40 mL/kg為100%死亡劑量（b），10 mL/kg為0%死亡劑量（a），b/a=4，比值為4～10之間，正式試驗分為5組，按下列公式求得相鄰兩組劑量比值（r）：

各劑量組給藥劑量見表2，根據(jù)體重計算各組的給藥量。

2.2.3 經(jīng)口LD50測定

取健康小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，雌雄各半，采取灌胃方式給藥，各組的給藥劑量分別為9.5 mL/kg、13.6 mL/kg、19.5 mL/kg、27.9 mL/kg、40 mL/kg，相當(dāng)于生藥含量31.8 g/kg、45.6 mg/kg、65.4 mg/kg、93.7 mg/kg、134.4 mg/kg。小鼠灌胃后觀察7 d，觀察動物的一般健康狀況、中毒表現(xiàn)、死亡過程和死亡數(shù)量。

2.2.4 數(shù)據(jù)處理及毒性判定標(biāo)準(zhǔn)

采用改良寇氏法計算，公式如下：LD50及其95%可信限（FL）計算公式[1]：

式中：Xm——最大劑量的對數(shù)值；i ——相鄰劑量比值的對數(shù)；p ——各組劑量的死亡率；q——各組劑量的存活率； ——各組死亡率之和；n ——各組動物數(shù)；Pm 最高死亡率；Pn 最低死亡率；

_lgLD50的標(biāo)準(zhǔn)差。

根據(jù)表3中藥毒性分級標(biāo)準(zhǔn)，判斷苦參蒼術(shù)口服液毒性級別。

3 試驗結(jié)果與分析

3.1 預(yù)試驗

給藥后1、2、3組均有部分動物出現(xiàn)明顯中毒癥狀，灌胃后首先表現(xiàn)為不安，然后呆滯、靜臥，對刺激反應(yīng)減弱，給藥后20 min出現(xiàn)異常興奮，騷動、跳躍，最后臥地不起，呼吸困難，突然蹦跳，有的出現(xiàn)泳樣運動，最終死亡。各組動物死亡情況見表4。

3.2 正式試驗

灌胃后，50只小鼠全部出現(xiàn)中毒癥狀，癥狀為灌胃后不安到處走動，幾分鐘后表現(xiàn)為呆滯，對刺激反應(yīng)遲鈍，閉眼、臥地，大約給藥后30 min小鼠出現(xiàn)異常興奮，突然跳躍，倒地，艱難行走，呼吸困難，后肢蹬地，最后死亡，小鼠死亡情況見表5。剖檢后除見肺臟有出血點外，其他臟器未見異常。

根據(jù)表5的結(jié)果，采用改良冦氏法計算苦參蒼術(shù)口服液對小鼠0%和100%致死量組，按等比數(shù)級排列，如果出現(xiàn)相鄰的重復(fù)0%或100%，應(yīng)將靠邊的組舍去不計，使大劑量組只有一組100%死亡[1]，計算LD50[2]：

LD50的95%可信限=lg-1（lgLD50±1.96×Sx50）=16.37～25.90

苦參蒼術(shù)口服液100 mL含生藥336 g，對小鼠的LD50為20.51 mg/kg，相當(dāng)于生藥68.91 g/kg，95%可信限為55～87.02 g/kg。

4 結(jié)論

根據(jù)表3中藥毒性分級標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)口給藥后小鼠符合以下四項，臟器損傷：少見臟器損傷；用量較大時：不易死亡；LD50灌胃大于50 g/kg；有效量與中毒量距離為很遠(yuǎn)，判為小毒。雞臨床用量為1 L水添加苦參蒼術(shù)口服液1 mL，通過體表面積及種間換算系數(shù)[3]換算成小鼠的用量為0.6 mL/kg，苦參蒼術(shù)口服液對小鼠的安全范圍為16.37～25.90 mL/kg，相當(dāng)于禽臨床用量的27.3～43.2倍，說明苦參蒼術(shù)口服液臨床使用安全。

（編輯：郭遠(yuǎn)）

參考文獻(xiàn)：

[1] 沈建忠，王建華，王大菊，等.動物毒理學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002.92-93.

[2] 謝秀瓊主編.中藥新制劑開發(fā)與應(yīng)用[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2002.533-541.

[3] 趙偉，孫國志.不同種實驗動物間用藥量換算[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2010（5）：52-53.