微生物檢驗中培養(yǎng)基的質量控制

楊丹

【摘要】培養(yǎng)基是微生物檢驗中一項不可缺少的關鍵工具，培養(yǎng)基的質量直接影響檢驗結果的可靠性和準確性。本文就培養(yǎng)基的制備過程、理化和微生物學指標控制、其他影響因素、質控記錄等方面，討論微生物檢驗中培養(yǎng)基的質量控制措施。

【關鍵詞】微生物檢驗；培養(yǎng)基；質量控制

【中圖分類號】R-0 【文獻標識碼】B 【文章編號】1671-8801（2014）10-0348-02

微生物檢驗涉及飲用水、食品、公共場所、食物中毒等方面，其結果的準確性直接關系到臨床用藥日常監(jiān)督的科學性、權威性以及疾病預防與控制的有效性。其中培養(yǎng)基作為微生物檢驗中一項不可缺少的關鍵因素，對其進行有效的質量控制是保證微生物檢驗結果準確性的重要前提。目前我國還沒有制定一個系統(tǒng)全面的培養(yǎng)基質量控制國家標準，以致培養(yǎng)基質量參差不齊，影響微生物檢驗結果。本文從以下幾方面對培養(yǎng)基的質量控制作一闡述，為有效控制培養(yǎng)基質量，提高微生物檢驗的質量作參考。

1 培養(yǎng)基的制備過程控制

1.1 稱量

稱量工具與設備事先應經(jīng)計量認證校準；稱量時要用專用的角匙，以防交叉污染。稱量動作要緩慢，防止吸入具有刺激性的培養(yǎng)基粉末。由于培養(yǎng)基中的瓊脂粉末具有吸濕性，吸濕后致使自身酸化，影響pH值，因此稱量環(huán)境應配置溫濕度計，并在濕度較低的環(huán)境情況下進行。量取水時應使用權威計量部門校準的帶刻度的量筒和移液管，不要使用外吹式移液管，嚴禁嘴吸移液管。

1.2 溶解

復水的容器一般采用清潔無污染的中性硬料玻璃、搪瓷或不銹鋼制品。復水時所用的容器的大小要大于復水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上，防止在加熱溶解過程中培養(yǎng)基溢出[1]。所選用的水必須是專用純凈水或者經(jīng)消毒過后的無菌水[2]。含有瓊脂粉的培養(yǎng)基在加熱溶解之前可以先浸泡數(shù)分鐘，加熱過程中邊攪拌邊觀察，直到玻棒上的培養(yǎng)基呈膠狀液體，否則配置好的培養(yǎng)基會發(fā)生分層。

1.3 分裝和滅菌

一般將培養(yǎng)基裝入試管或三角瓶。固體培養(yǎng)基約為試管高度的1/5，半固體培養(yǎng)基約為試管高度的1/3為宜，而裝入三角瓶的培養(yǎng)基以不超過其容積的一半為宜。分裝后立即滅菌，避免微生物生長繁殖，不僅消耗養(yǎng)分，還會改變培養(yǎng)基的酸堿度。滅菌前，在所有滅菌物品上多放幾層厚報紙，可以有效減少冷凝水的產生，避免冷凝水打濕棉塞而造成污染。培養(yǎng)基滅菌要完全，參照培養(yǎng)基說明書進行，滅菌時間不能過長或多次重復滅菌，以免增加酸性反應。

2 理化指標控制

2.1 pH值測定

滅菌前后都需要進行pH值測定。液體培養(yǎng)基的pH值可采用連接可滲透陶器型液體接頭的電極測定，固體培養(yǎng)基可用帶有針式電極的pH計測定pH值。當測得的pH值與配方中規(guī)定的pH值的差異小于0.5個單位時，可用1N NaCl或HCl調節(jié)pH至規(guī)定值。如果差異大于0.5個單位時，應棄去此批培養(yǎng)基并尋找原因，通常是由于水質不佳、培養(yǎng)基變質或配制方法不當所致。

2.2 凝膠強度測定

凝膠強度也是一個重要的指標，滅菌條件特別是pH會影響凝膠強度。Gelometer（Marine Colloids Inc.，2，Edison Place，Springfield，NJ 0708 1，U.S.A.）和the LFRA Texture Analyser（C.S.Stevens&Son Ltd.Dolphin Yard，HolywellHill，St.Albans，Herts，U.K.）均能提供良好的測量性能。商品干燥培養(yǎng)基的凝膠強度控制在450-650 g/cm2之間，半固體培養(yǎng)基的適宜凝膠強度在90 g/cm2 左右。

2.3 水分

取適量培養(yǎng)基，置鋁箔盤中，以110℃.min-1加熱烘烤至恒重，失重百分比即為干粉培養(yǎng)基中含有的水分比例，失重百分比應≤7%[3]。

3 微生物學指標控制

3.1 生長率和選擇因子

（1）固體培養(yǎng)基采用改良的Miles-Misra法（定量方法），計算生長率P=Ns/No（No=對照培養(yǎng)基的菌落數(shù)，Ns=試驗培養(yǎng)基的菌落數(shù)）。非選擇性培養(yǎng)基PR≥0.7，選擇性培養(yǎng)基PR≥0.1。選擇因子SF=Do-Ds，Do是對照培養(yǎng)基上至少10個菌落的最高稀釋度，Ds是試驗培養(yǎng)基上至少l0個菌落的最高稀釋度。SF，Do，和Ds采用log10為單位來表示。非目標微生物的SF≥2。

（2）液體培養(yǎng)基采用目標和非目標微生物的定量稀釋方法計算生長率PR和選擇因子SF，方法同前述[4]。

3.2 無菌試驗

每批配好的培養(yǎng)基均需進行無菌試驗，以確保滅菌效果。配制大量培養(yǎng)基，可采取抽樣方法進行選取任意10支的量做無菌試驗，少于100份樣本選取5-10支做無菌試驗。確定無微生物生長方可使用。

4 其他影響因素

4.1 一次性消耗品

一次性消耗品如一次性培養(yǎng)皿、一次性移液管、均質袋、封口膜、脂棉、試管帽（塞）、化學滅菌指示帶等，也將影響培養(yǎng)基的配制質量，必須保持干凈、無菌及精確。每年至少檢查1次，以確保培養(yǎng)基配制的質量及微生物檢測的質量[5]。

4.2 培養(yǎng)基的標識

已配制好的培養(yǎng)基應正確標識，內容包括培養(yǎng)基名稱、用途、儲存條件、有效期或推薦的儲存期限、無菌實驗結果、配制日期、配制者和復核者，保證培養(yǎng)基在使用、貯存過程中不發(fā)生混淆，防止錯用。

5 培養(yǎng)基質控記錄

培養(yǎng)基質控記錄包括入庫登記記錄、配制記錄、高壓滅菌記錄、技術驗收記錄及評估報告、菌種使用記錄、培養(yǎng)箱使用記錄等，各種記錄應認真填寫并制成檔案保存。

6 討論

培養(yǎng)基的質量控制過程并不復雜，但在質控過程中需要考慮到每一個環(huán)節(jié)，任一環(huán)節(jié)的疏忽都有可能導致培養(yǎng)基質量不過關，最終影響微生物檢驗結果的準確性和可靠性，給檢驗結果帶來誤差。因此，我們應系統(tǒng)全面的做好培養(yǎng)基質量控制，確保培養(yǎng)基質量，從而提高微生物檢驗的質量。

參考文獻：

[1]王綏家， 黃宏星. 微生物實驗室培養(yǎng)基的質量控制[J]. 檢驗醫(yī)學與臨床，2011， （20）： 112-114.

[2]景曉敏. 微生物檢驗培養(yǎng)基質量控制探討[J].中國實用醫(yī)藥， 2013， 8（9）：250.

[3] 馬仕洪， 楊美琴， 劉鵬， 等.《中國藥典》2010年版對照培養(yǎng)基的研制與應用[J].中國藥事， 2012， 26（8）：847-851.

[4]The International Organization for Standardizatin.ISO/TS 11133-2， 2003.

[5] 汪穗福. 微生物檢測驗證技術[M]. 北京：： 中國醫(yī)藥科技出版社， 2005.