不同產(chǎn)地煙草中1—脫氧1—L—脯氨酸—D—果糖化合物含量分析

陳修紅　王葉　王軍

摘要[目的] 分析比較不同產(chǎn)地煙葉中1脫氧1L脯氨酸D果糖（ProFru）化合物含量的差異。[方法] 以水為溶劑，在超聲輔助條件下提取煙葉樣品中的ProFru物質(zhì)，經(jīng)過C18SPE固相萃取柱分離后利用高效液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜對國內(nèi)5個產(chǎn)地的30個煙草樣品進行定量分析。[結(jié)果] HPLCMS/MS方法適用于煙葉中ProFru化合物的準確分析，測定煙草樣品中ProFru化合物的含量在3～7 mg/g。四川、云南地區(qū)的煙葉樣品中ProFru化合物的含量相對最為豐富。[結(jié)論]研究可為了解各煙葉性質(zhì)，科學選用煙葉進行配方提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞煙草；1脫氧1L脯氨酸D果糖；液相色譜質(zhì)譜串聯(lián)；產(chǎn)地

中圖分類號S572文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）22-07557-02

是氨基酸與葡萄糖通過美拉德反應生成的關(guān)鍵中間產(chǎn)物之一，在煙草烤制、陳化、加工及燃吸等過程中均有不同程度的產(chǎn)生與積累[1]。這類化合物是重要的非揮發(fā)性香味前體物質(zhì)，對卷煙的煙氣質(zhì)量有重要影響[2]，也是評價煙草感官質(zhì)量和煙草加香研究的重要目標物之一[3-5]。我國煙草分布廣泛，煙草種質(zhì)資源豐富[6]，不同產(chǎn)地和品種的煙葉經(jīng)過烘烤和醇化后其中的香味物質(zhì)含量有較大區(qū)別，通過分析其中香味物質(zhì)前體Amadori化合物的含量，對了解煙葉風味品質(zhì)，選擇煙葉提高煙葉配方科學性具有一定的借鑒意義。

烤煙型煙葉中的Amadori化合物以1脫氧1L脯氨酸D果糖（ProFru）含量最為豐富，其含量約占Amadori化合物總含量一半以上，該物質(zhì)對煙葉吸味具有積極貢獻[7]，對評價煙葉質(zhì)量具有參考價值。筆者采用高效液相串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)[8]對5個產(chǎn)地的30個樣品中1脫氧1L脯氨酸D果糖化合物進行定量分析，比較該化合物在這批不同產(chǎn)地煙葉中的含量，以期為了解各煙葉性質(zhì)，科學選用煙葉進行配方提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料原材料：來自四川、云南、安徽、山東、河南5個產(chǎn)地，共30個烤煙單料煙葉樣品。主要試劑：超純水，去離子水經(jīng)過MilliQ超純水儀制得，18.2 MΩ·cm；甲醇，色譜級，北京百靈威科技有限公司；甲酸，純度99%，Acros公司；ProFru物質(zhì)，自制[9]。

主要儀器：Agilent 1260液相色譜儀，配置在線脫氣機、二元泵、自動進樣器、柱溫箱、可變波長紫外檢測器，美國Agilent公司；Agilent 6460QQQ質(zhì)譜儀，美國Agilent公司；ZORBAX SBC18色譜柱（3.5 μm，2.1×150 mm），美國Agilent公司；ProElut C18SPE固相萃取小柱（100 mg/1 ml），DIKMA公司；ASE12固相萃取儀，天津奧特賽恩斯儀器有限公司；KQ300型超聲清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；FA1104B萬分之一電子天平，上海越平科學儀器有限公司。

1.2方法

1.2.1固相萃取小柱活化處理。用5 ml甲醇淋洗小柱，再用5 ml超純水淋洗，控制流速在2滴/s。

1.2.2樣品處理。煙葉樣品冷凍干燥后磨成60目粉末，分別稱取300 mg左右（精確到0.1 mg）的煙草粉末，定量加入200 ml超純水，室溫超聲20 min，定容到250 ml，振蕩5 min后再靜置5 min。取上清液用0.45 μm微孔水系濾膜過濾，再取2 ml濾液用C18SPE固相萃取柱純化，取中間流出的1 ml液體作為樣液，分析備用。

1.2.3標準液制備。準確稱取33.4 mg ProFru 化合物用超純水溶解，定容于25 ml容量瓶中，配制成濃度為1.336 mg/ml標準品儲備液，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。稀釋成濃度?00.4 μg/ml的標準品母液，分別取50、100、200、300、500 μl標準品母液于5 ml容量瓶中，用超純水定容成不同濃度的標準液。

1.2.4液質(zhì)聯(lián)用條件。ZORBAX SBC18為色譜柱，柱溫30 ℃，流動相為含0.3%甲酸的甲醇：含0.3%甲酸的水以65∶35（V∶V）等度洗脫，流速為0.3 ml/ min，進樣量20 μl；三重四級桿質(zhì)譜采用多反應檢測（MRM）模式，電噴霧正離子模式（ESI+）為離子化條件，毛細管噴霧電壓為3 500 V，干燥氣溫度300 ℃，干燥氣流量10 L/min，離子源霧化氣壓力310 kPa，鞘氣溫度250 ℃，鞘氣流量11 L/min。

2結(jié)果與分析