ASE—SPE—HPLC—MS/MS檢測(cè)水產(chǎn)品中阿維菌素類藥物殘留

周秀錦　周向陽(yáng)　邵宏宏　顏建波　傅謐妮

摘要[目的]建立水產(chǎn)品中阿維菌素、伊維菌素、莫西菌素、愛普利諾菌素、多拉菌素5種阿維菌素類藥物殘留量的快速溶劑萃取-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（ASESPEHPLC/MS/MS） 測(cè)定方法。[方法]樣品采用快速溶劑萃取，乙腈為提取液，提取液濃縮后經(jīng)C18小柱凈化；經(jīng)SHISEIDO CAPCELL PAK C18 MG S5質(zhì)譜柱分離，乙腈 2.5 mmol/L乙酸銨水（0.1%乙酸）溶液為流動(dòng)相，在電噴霧電離負(fù)離子（ESI-）、多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（ MRM ）下測(cè)定5種阿維菌素類藥物殘留，基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法定量。[結(jié)果]5種阿維菌素類藥物在2.0～50.0 μg/kg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)大于0.997，莫西菌素在5.0、10.0、20.0 μg/kg，其他4種化合物在2.0、5.0、10.0 μg/kg加標(biāo)水平的平均回收率為81.7%～93.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為7.54%～13.26%。[結(jié)論]該方法提取效率高、凈化較徹底，適合水產(chǎn)品中阿維菌素多藥物殘留量的測(cè)定。

關(guān)鍵詞快速溶劑萃??；液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜；阿維菌素類藥物殘留

中圖分類號(hào)S481+.8文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）22-07406-03

阿維菌素類藥物（AVMs）是一種大環(huán)內(nèi)酯雙糖類化合物，是一種高效廣譜的生物源性驅(qū)蟲藥，其結(jié)構(gòu)新穎，作用機(jī)理獨(dú)特，廣泛應(yīng)用于作物種植、動(dòng)物養(yǎng)殖中[1]。AVMs包括阿維菌素、伊維菌素、多拉菌素、莫西菌素、愛普利諾菌素等，按世界衛(wèi)生組織（WHO）五級(jí)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，AVMs屬高度化合物，對(duì)環(huán)境或生物直接造成影響，日本《肯定列表制度》規(guī)定鰻魚中阿維菌素和多拉菌素的限量為5.0 μg/kg。阿維菌素類藥物的檢測(cè)方法主要有免疫化學(xué)法[2-3]、高效液相色譜法[4-6]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[7-10]等。免疫化學(xué)法由于方法繁瑣且檢出限達(dá)不到要求而不能應(yīng)用于實(shí)際批量檢測(cè)；液相色譜法檢出限較高，可能造成假陰性的出現(xiàn)；而高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法則具有較高靈敏度，能夠滿足水產(chǎn)品中對(duì)阿維菌素類藥物最低檢出限的要求，目前存在的問題是回收率不高。ASE技術(shù)是一種快速、簡(jiǎn)單、安全、重復(fù)性好、樣品實(shí)用性強(qiáng)的前處理方法，該方法利用提高溫度和增加壓力來提高萃取的效率，使用常規(guī)的溶劑對(duì)固體或半固體樣品進(jìn)行萃取。筆者采用ASE和SPE技術(shù)進(jìn)行樣品前處理，結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，建立了水產(chǎn)品中阿維菌素、伊維菌素、莫西菌素、多拉菌素和愛普利諾菌素的檢測(cè)方法，旨在為水產(chǎn)品中阿維菌素類藥物殘留的快速檢測(cè)提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1試劑。三氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷、丙酮、乙酸銨、甲酸均為優(yōu)級(jí)純；乙腈、甲醇均為色譜純；硅藻土；其他試劑均為分析純；水為超純水。固相萃取柱：Varian C18（500 mg，6 ml），或相當(dāng)者，使用前依次用15 ml甲醇和10 ml水活化。0.22 μm有機(jī)系濾膜。

1.1.2藥劑。阿維菌素類藥物標(biāo)準(zhǔn)品：阿維菌素，CAS.No：71751412，Lot：21204，97.0%；愛普利諾菌素，CAS.No：123997262，Lot：20516，92.5%；莫西菌素，CAS.No：113507065，Lot：20827，87.0%；伊維菌素，CAS.No：70288867，Lot：10506，96.0%；多拉菌素，CAS.No：117704253，Lot：30516，96.0%。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取阿維菌素、伊維菌素、多拉菌素、莫西菌素、愛普利諾菌素標(biāo)準(zhǔn)品各10.0 mg，用乙腈溶解并定容至100.0 ml，配制成100.0 mg/L，4 ℃避光保存。標(biāo)準(zhǔn)工作液：臨用前根據(jù)需要用乙腈稀釋成適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)系列工作液。

1.1.3主要儀器。高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（API4000QTRAP）、ASE200快速溶劑萃取儀（美國(guó)戴安公司）和真空固相萃取裝置。